专利名称：一种具有抗血小板聚集活性的化合物及其制备方法图1.化合物合成路线1-邻氯苯基-2-苄基-1，2，3，4-四氢异喹啉(TQP-1)的性质白色结晶，熔点118℃，分子式C22H20ClN，分子量333.9。不溶于水，微溶于乙醇、丙酮中，易溶于二氯甲烷和氯仿中。经元素分析、傅立叶变换红外光谱、质谱以及及300兆核磁共振技术测定，结构准确无误，如下所示。1-邻氯苯基-2-间氯苯甲酰基-1，2，3，4-四氢异喹啉(TQP-2)的性质白色晶体，熔点160℃，分子式C22H17Cl2NO，分子量382.3。不溶于水，微溶于乙醇、丙酮中，易溶于二氯甲烷和氯仿中。经元素分析、傅立叶变换红外光谱、质谱以及及300兆核磁共振技术测定，结构准确无误，如下所示。1-邻氯苯基-2-间溴苯甲酰基-1，2，3，4-四氢异喹啉(TQP-3)的性质白色晶体，熔点120℃，分子式C22H17BrClNO，分子量426.7。不溶于水，微溶于乙醇、丙酮中，易溶于二氯甲烷和氯仿中。经元素分析、傅立叶变换红外光谱、质谱以及及300兆核磁共振技术测定，结构准确无误，如下所示。 本发明初步体外抑制血小板聚集活性实验结果表明，化合物TQCP-3的抗血小板聚集活性远高于阿司匹林的活性。采用Bron方法，以健康成人的血液制备贫血小板血浆(PPP)和富血小板血浆(PRP)，以ADP(终浓度10μmol/L)为诱导剂，利用血小板聚集仪(北京普利生LBY-NJ2四通道血液凝聚仪)测定化合物的抗血小板聚集活性。阿司匹林的IC50为9.673±3.285nmol/L，化合物TQP-1、TQP-2和TQP-3的IC50分别为60.60±25.23、54.21±18.72和0.206±0.033nmol/L。其中化合物TQP-3的抗血小板聚集活性远高于阿司匹林的活性，而化合物TQP-1和TQP-2的活性低于阿司匹林。本发明涉及的化合物是全新结构的化合物，与已知的抗血小板聚集药物的结构有显著区别，不同于喘速宁、噻氯匹定、氯吡格雷和阿司匹林等，具有创新性。特别是化合物TQP-3具有很强的抗血小板聚集药物活性，且远高于阿司匹林的活性，有望开发成为新一代抗血小板聚集药物。有机合成熔点用熔点管上测定，温度计读数已经校正。红外光谱仪为Nexus 870 FT-IR，KBr压片。质谱仪为英国VG公司ZAB-HS型倒置双聚焦高分辨质谱仪分辨率1000，加速电压8kv范围600-400-600amu。300兆核磁共振仪为FX-900型，TMS为内标。薄层色谱以青岛海洋化工厂生产的硅胶GF254与CMC-Na(0.8％)的水溶液铺板，110℃活化30min后置干燥器内备用，254nm紫外灯下显色。实验原料2-苯乙胺，江苏武进化工厂生产，纯度大于98％，分馏178℃产物，密封备用。邻氯苯甲酸，Singma公司生产，化学纯98％。邻溴苯甲酸(CP)，间溴苯甲酸(CP)，对溴苯甲酸(CP)，间氯苯甲酸(CP)，对氯苯甲酸(CP)，上海试剂公司生产。苯磺酰氯(CP)，氯化亚砜(AR)、苄氯(CP)，和邻氯苄氯(CP)购自SIGAMA公司。1、中间体化合物的合成N-苯乙基-邻氯苯甲酰胺的制备邻氯苯甲酸10g，氯化亚砜11.4g，回流反应1h，减压蒸去多余的氯化亚砜，得无色或淡黄色液体，即邻氯苯甲酰氯(待用)。将β苯乙胺7.8g、三乙胺10ml和二氯甲烷80ml混合，冰浴下搅拌，滴加邻氯苯甲酰氯(新鲜制备)和15ml二氯甲烷的混合液。滴加完毕，室温反应3小时，减压蒸去溶剂，稍冷，析出大量白色晶体，抽滤，水洗，乙醚洗，烘干得白色粉状晶体，N-苯乙基-邻氯苯甲酰胺，熔点99-101℃。1-邻氯苯基-3，4-二氢异喹啉的制备将N-苯乙基-邻氯苯甲酰胺20g，无水甲苯溶剂40ml和新鲜制备的三氯氧磷40ml混合，回流反应6小时，减压蒸去溶剂，得到粘稠状残余物。加10ml丙酮溶解，再倒入冰水，用浓氨水调PH9-10，上层浮现油状物，乙醚提取三次，合并醚液，水洗三次，活性炭脱色，无水MgSO4干燥，过滤，滤液浓缩，得到浅黄色粘状物(久置，析出针状固体)，即1-邻氯苯基-3，4-二氢异喹啉，得率54％。所得游离碱粗品不需精制，可直接用于下一步反应。HNMR(δppm)2.75(m，2H，CH2N)，3.70(m，2H，ArCH2)，7.45(m，8H，aromatic)1-邻氯苯基-1，2，3，4-四氢异喹啉的制备将1-邻氯苯基-3，4-二氢异喹啉4.485g与30ml无水甲醇混合，加热溶解，加二乙胺调PH8.5左右(约2滴)，再缓慢加入1.5g(0.027mol)的硼氢化钾(KBH4)，并放出大量气泡，加完，再搅拌反应3小时，溶液颜色由浅黄变为淡黄色。减压蒸去溶剂，得黄色糊状物。加入水60ml和丙酮5ml的混合物，充分搅拌以分解多余的KHB4，且上层浮现油状物。乙醚提取三次，合并醚液，水洗三次，活性炭脱色，无水MgSO4干燥，过滤，滤液浓缩，得淡黄色的粘状物，1-邻氯苯基-1，2，3，4-四氢异喹啉，3.519g(78.10％)，所制备的粗碱不需精制可直接用于下一步反应。2、目的化合物的合成1-邻氯苯基-2-苄基-1，2，3，4-四氢异喹啉(TQP-1)的制备将1-邻氯苯基-1，2，3，4-四氢异喹啉3.48g和等摩尔的苄氯溶于50ml无水乙醇，回流反应6h，溶液颜色变成深褐色，反应完全。减压蒸去溶剂，得黄褐色粘状物。加5ml丙酮溶解，乙醚提取三次，合并醚液，水洗三次，无水MgSO4干燥，活性炭脱色，得浅黄色溶液。滤液浓缩，静置，析出白色结晶(即产物)0.78g，收率15.9％，熔点118℃。Anal(C22H20ClN＝333.9；C％，H％，N％)Req79.15，6.04，4.20；Found 79.30，6.20，4.14；IR(KBr，cm-1)2938(υas-CH2-)，2861(υs-CH2-)；1603，1495.8，1456(苯环骨架振动)；757，707(苯环C-H的面外弯曲振动)；HNMR(CDCl3，δppm)δ2.501(m，2H，AR-CH2-C(H2)-)；3.093(m，2H，AR-C(H2)-CH2-N-)；3.282(d，2H，-N-CH2-AR)；5.311(s，1H，C1-H)；6.767(d，1H，C7-H)；7.134(m，1H，邻氯苯基C5-H)；7.194(2H，C8-H，邻氯苯基C6-H)；7.226(2H，邻氯苯基C4-H与C5-H)；7.258(d，1H，；7.306(d，4H，苄基C2-H，C3-H，C5-H，C6-H)；7.417(d，1H，邻氯苯基C3-H)；7.486(m，1H，C6-H)；MS(SCI，m/Z)333(M-1)，334(M)，335(M+1)。
1-邻氯苯基-2-间氯苯甲酰基-1，2，3，4-四氢异喹啉(TQP-2)的制备将1-邻氯苯基-1，2，3，4-四氢异喹啉3.46g溶于30ml二氯甲烷中，加入稍微过量的三乙胺，冰浴下搅拌，滴加等摩尔量的间氯苯甲酰氯(新鲜制备)与5ml二氯甲烷的混合液，加毕，室温反应3小时，溶液颜色变深，反应完全。减压蒸去二氯甲烷溶剂，得褐色粘状物。二氯甲烷提取三次，5％NaHCO3洗三次，水洗三次，无水MgSO4干燥，活性炭脱色，滤液浓缩，静置析出固体。无水乙醇重结晶，析出白色晶体(即产物)，0.61g，收率11.23％，熔点160℃。Anal(C22H17Cl2NO＝382.3；C％，H％，N％)Req 69.12，4.48，3.66；Found 69.23，5.51，3.50；IR(KBr，cm-1)2945，2836(-CH2-)；1637(C＝O伸缩振动)，1593，1475，1455(苯环骨架振动)；HNMR(CDCl3，δppm)δ2.193(s，1H C1-H)；2.826(d，2H，C4-H)；3.446(d，2H，C3-h)；6.890(d，1H，C7-H)；7.067(s，1H，C5-H)；7.138(m，5H，1C6-H，1C8-H，2位邻氯苯基C4，C5，C6上三个H)；7.341(m，5H，2位邻氯苯基C3-H，3位间氯苯甲酰基C2，C4，C5，C6四个氢)；MS(SCI，m/Z)381(M-1)，382(M)，383(M+1)。
1-邻氯苯基-2-间溴苯甲酰基-1，2，3，4-四氢异喹啉(TQP-3)的制备将1-邻氯苯基-1，2，3，4-四氢异喹啉3.51g溶于30ml二氯甲烷溶液中，加入稍微过量的三乙胺，冰浴下搅拌，滴加等摩尔量的间溴苯甲酰氯(新鲜制备)与5ml二氯甲烷的混合液，加完，室温反应3小时，溶液颜色变深，反应完全。减压蒸去二氯甲烷溶剂，得褐色粘状物。二氯甲烷提取三次，5％NaHCO3洗三次，水洗三次，无水MgSO4干燥，活性炭脱色，滤液浓缩，静置析出固体。无水乙醇重结晶，析出白色晶体(即产物)，0.68g，收率11.06％，熔点120℃。Anal(C22H17BrClNO＝426.7；C％，H％，N％)Req 61.92，4.02，3.28；Found 59.69，4.60，3.06；IR(KBr，cm-1)1673(C＝O伸缩振动)；1595，1469，1434(苯环骨架振动)；NHMR(CDCl3，δppm)δ2.191(s，1H，C1-H)；3.226(m，2H，2C4-H)；3.843(m，2H，2C3-H)；7.254(m，3H，C5-H，C7-H，C8-H)；7.315(d，1H，2位邻氯苯基C6-H)；7.490(m，4H，C6-H，邻氯苯甲酰基C3，C，C5上3个氢)；7.534(m，1H，2位间溴苯甲酰基C5-H)；7.763(d，2H，2位间溴苯甲酰基C4，C6上两个氢)；7.992(s，1H，2位间溴苯甲酰基C2上氢)；MS(SCI，m/Z)425.8(M+)，426.7(M+1)。3、抗血小板聚集活性检测化合物的抗血小板聚集试验采用血小板聚集仪(北京普利生LBY-NJ2四通道血液凝聚仪)测定。ADP和柠檬酸三钠购自Sigama公司，生理盐水自配，ASPIRIN由江苏省药品检验所提供。
血标本的采集血液样本取自成年人体，血小板聚集实验前10天停止服用抑制血小板聚集的药物，前一天忌食油腻、抽烟等。每个血液提供者于试验当天早晨空腹采血，自前肘静脉取血30ml，按照1∶9的比例加入抗凝剂3.28％柠檬酸钠。
血浆制备富血小板血浆(PRP)的制备在25℃-32℃温度下离心，转速为500-800转/分，时间原则上控制在10分钟，待离心机自然停止后取出(如出现溶血现象应重新采血)，用移液器将离心出的PRP吸到另一试管中，尽量将PRP全部吸出。贫血小板血浆(PPP)的制备将已吸取过PRP的血再离心，转速是2000-2500转/分，时间控制在10分钟左右，取出上清即为PPP。用PPP调整PRP中血小板计数为250×109个/L。制取PRP后30min后开始血小板聚集测定，整个测活过程在3小时内完成。
实验过程按照Bom比浊法进行血小板聚集试验在空白管中加入350μl PPP，37℃保温并设定透光率为100％。测定管中加入300μl PRP，分别加入各代测样品30μl，计算相应样品终浓度，设定透光率为0％。样品37℃保温3分钟，加入20μl血小板聚集诱导剂ADP(终浓度10μmol/L)和胶原(终浓度3μg/ml)，开始检测，一共检测5分钟，记录5分钟内血小板的最大聚集率(Maximum Aggregation Rate MAR)。用生理盐水(NS)作对照。计算血小板聚集抑制率(Aggregation Inhibition Rate，AIR)。由样品浓度绘制浓度抑制曲线，计算最大抑制率和半抑制浓度(IC50)。
实验结果体外抑制血小板聚集活性结果显示，阿司匹林的IC50为9.673±3.285nmol/L，化合物TQP-1、TQP-2和TQP-3的IC50分别为60.60±25.23、54.21±18.72和0.206±0.033nmol/L。可见化合物TQP-3的抗血小板聚集活性远高于阿司匹林的活性。化合物TQP-1和TQP-2的活性低于阿司匹林。


本发明属于化学合成制药技术领域。本发明涉及一种具有抗血小板聚集活性的化合物的化学合成路线及其制备方法。本发明还涉及该化合物的体外抗血小板聚集活性试验，采用Bron方法，利用血小板聚集仪测定化合物的抗血小板聚集活性。其中化合物1－邻氯苯基－2－间溴苯甲酰基－1，2，3，4－四氢异喹啉(TQP－3)的IC