专利名称：一种通用多重pcr方法
为了提高多重PCR的通用性，本发明提供了ー种通用多重PCR方法，该方法不仅能一次扩增多个目的片段，而且能显著降低非特异性扩增。本发明解决其技术问题所采用的技术方案是首先，在筛选或设计好的每对特异性上游引物和下游引物的5’端都分别加上通用PCR接头Universal adapter-F (5’-CTCGTAGACTGCGTACCA-3，)，(其序列如 SEQ ID NO : I 所示)和 universal adapter-R (5’-TACTCAGGACTCATCGTC-3’)(SEQ ID NO :2所示)，引物加上接头后命名为通用PCR接头引物；然后采用两段循环模式PCR扩增程序进行PCR扩增，该PCR扩增程序为①预变性(94°C，5min)。②第一段循环(循环数3)命名为“逐一退火循环”变性(94°C，40s);按照未加通用接头前的多对引物的退火温度从高到低的顺序逐一分别退火(未加通用接头前的多对引物的退火温度应根据Tm值进行优化；在设定退火温度时，退火温度相近的可以合并为ー个温度)，每个退火温度的退火时间为20s ;延伸(72°C，30s)。③第二段循环(循环数28-32，通常为30个循环)变性(94°C，40s);将退火和延伸过程合并(70°C，50s)。④终延伸(72°C，lOmin)。详细的通用多重PCR扩增程序见表I。表I通用多重PCR程序(两段循环模式)本发明涉及一种通用多重PCR方法，是通过增加通用接头序列，使引物间退火温度的差异变小，且增加接头后的引物的退火温度(70℃左右)与延伸温度相近，可以合并退火和延伸阶段，缩短PCR时间；并根据引物退火温度从高到低的逐一退火循环，利用两段循环模式提高PCR产物的特异性和产量。本发明能显著提高多重PCR的通用性，可应用于多个领域，如种子纯度鉴定、品种真实性鉴定、多态性分析、突变分析、定量分析和物种鉴定等。