Pcr微板核酸杂交elisa试剂盒中微孔板包被探针的技术制作方法

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专利名称

Pcr微板核酸杂交elisa试剂盒中微孔板包被探针的技术制作方法
发明者

王虹, 王虹
公开日

2004年9月22日
申请日期

2003年3月12日
优先权日

2003年3月12日
申请人

王虹, 王虹
文档编号

C12P19/00GK1530447SQ0310697
关键字

Pcr 微板 elisa 核酸杂交试剂
权利要求

PCR核酸杂交ELISA试剂盒中微孔板包被探针的技术是体外诊断生物试剂的一部分该技术方案为向微孔板内加入活化剂室温进行活化，用经碳酸盐缓冲液稀释的包被探针在适宜温度下将板条进行包被，在适宜温度下封闭板条一段时间，干燥真空封板1、微孔板加入活化剂进行活化显示氨基基团的方法2.寡核苷酸探针的5’进行羧基化羧基化的探针与微孔板上的氨基结合的方法及相关技术
技术领域

体外生物医学诊断技术背景技术PCR微板核酸杂交ELISA试验融合了基因扩增(PCR)、核酸杂交、酶联显色技术(ELISA)三种技术1、基因扩增(PCR)技术PCR是一种选择性体外扩增DNA或RNA片段的方法在一定温度控制下通过变性—复性—延伸的循环过程使靶核酸分子快速复制，被扩增的核酸产量呈指数上升，将极微量的靶核酸成百万倍地扩增到足够检测到的水平因此PCR技术的敏感性非常高但因诸多因素的影响，限制了PCR技术的发展①假阴性 Tag酶活力不够或活性受到抑制、引物设计不合理、提取模板质量不过关等等会导致假阴性结果出现②假阳性 PCR技术的高度敏感，极其微量的靶基因污染都会影响结果判断出现假阳性③相对特异性由于存在同源序列，随意设计的引物，其PCR产物在电泳分析时可能出现多条链因此在设计引物时要考虑其绝对特异性和相对特异性2、核酸杂交技术核酸杂交技术从上世纪60年代发展至今在诸多领域得到广泛应用，特别是在分子生物学技术方面有突破性进展但目前在临床应用中，还没有哪种方法能运用此技术很大规模的进行临床标本检测如各临床实验室较普遍应用的斑点杂交技术，尽管特异性高、但灵敏度低、操作复杂、存在放射性污染，因此极大限制了该技术在临床中的普及我们创立的PCR核酸杂交ELISA试验中的核酸杂交技术是以微孔板作杂交载体，将捕捉探针固定在微孔板内捕捉待测核酸，再与用酶标记的探针(指示探针)进行杂交(夹心杂交)这是核酸杂交技术的重大突破，是我们创立的PCR微板核酸杂交ELISA试验核心内容3、酶联显色技术(ELISA) ELISA集中了抗原抗体反应的特异性和酶促反应的放大作用，有效的显示杂交信号，使结果判读客观、简单、快捷我们集中了上述三种技术的优势，避开他们各自的不足，创建PCR微板核酸杂交ELISA试验，在体外生物医学诊断技术领域开辟了一块新天地

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专利名称：Pcr微板核酸杂交elisa试剂盒中微孔板包被探针的技术的制作方法
我们发明的微孔包被探针技术是PCR微板核酸杂交ELISA试验的核心技术。该技术的原理是先将捕捉探针的5′端氨基进行修饰，再将微孔板活化(活化剂配方保密)，显示羧基基团，捕捉探针通过共价键牢固地结合在微孔上，以捕捉待测样本中的靶核酸。具体实施方法是1、向微孔内加入活化剂室温进行活化。2、用经碳酸盐缓冲液稀释的捕捉探针在适宜的温度下包被。3、在适宜温度下封闭微孔一段时间，真空干燥封板。微孔板包被探针技术是体外生物医学诊断技术——PCR微孔板核酸杂交ELISA试验中的一部分。该技术以微孔板作载体，先将捕捉探针固定于微孔板内，加入指示探针和扩增产物进行夹心杂交，通过对指示信号的检测显示试验结果。微孔板包被探针技术的原理是先将捕捉探针的5′端氨基进行修饰，再将微孔板活化(活化剂配方保密)，显示羧基基团，捕捉探针通过共价键牢固地结合在微孔板上，以捕捉待测样本中的靶核酸。具体实施方法是1.向微孔板内加入活化剂室温进行活化。2.用经碳酸盐缓冲液稀释的捕捉探针在适宜的温度下包被。3.在适宜温度下封闭微孔板一段时间，真空干燥封板。

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