专利名称：局部眼用肽制剂的制作方法局部眼用狀制剂发明领域本发明属于医学领域，具体地涉及一种处于生长抑素或生长抑素类似物的局部眼用组合物形式的药物制剂。视网膜和玻璃体疾病是失明的主要原因，其中突出的是糖尿病视网膜病变和年龄相关性黄斑变性。 虽然在现有技术中有一些生长抑素及其类似物在治疗眼后段疾病中的潜在用途的參考文献(基于在这些疾病中生长抑素受体过度表达的证据)，但是没有明确的治疗效果的实例。最近已经说明了内源生长抑素和生长抑素受体在人眼的不同部位中的存在。因此，例如已经在泪腺、结膜、角膜和鼻泪管中检测出生长抑素受体sstrl、sstr2和sstr5[Minsel等人，内分泌学，2009，150 (5) :2254-2263]。已经说明了在眼后段中相应于在健康人眼中的视网膜、睫状体、脉络膜中的生长抑素受体sstrl、sstr2、sstr3、sstr4和sstr5的基因的存在[Klisovic等人，眼科学研究&视觉科学(InvestigativeOphthalmology & Visual Science)，2001，42 (10) :2193-2201]、在视网膜中 sstr2和sstr3mRNA的存在[van Hagen等人，欧洲内分泌学杂志(European Journal ofEndocrinology), 2000,143 S43-S51 ;Cervia 等人，分子和细胞内分泌学(Molecular andCellular Endocrinology)，2008，286 :112-122]、以及还有在玻璃体液和视网膜中的内源生长抑素的存在[Sim0等人，糖尿病护理(Diabetes Care)，2002，25 (12) :2282-228]。现有技术已知的是，在处于糖尿病视网膜病变第一期的视网膜中，存在着较低的生长抑素表达，这可能与视网膜神经退行性病变有关[Carrasco等人,糖尿病护理(Diabetes Care),2007,30(11) :1-7]。对于治疗眼后段疾病，存在着不同的给药途径，如全身给药、局部给药、眼内给药和眼周给药。文献WO 02/09739A1描述了生长抑素及其类似物用于治疗或预防眼部疾病的用途。在这篇文献中命名的给药途径中，优选的途径是全身非消化道给药、皮下或肌肉给药，并且在所述文献中没有针对生长抑素或它的类似物给药的处于滴眼剂形式的制剂的指示。然而，由于限制药物穿透进入眼中的血-视网膜屏障的缘故，在全身给药的情况下，在眼后段中达到治疗浓度是困难的。全身给药的另ー个普通的缺点是它的效果不是局部的，因此它不能唯一地针对眼后段。此外，在生长抑素的情况下，由于它在血液中的不稳定性，高剂量是必需的。在类似物奥曲肽的情况下，即使结果没有显示出明确的治疗效果，不同的临床研究已经通过全身皮下给药评定了它的效果[Wegewitz等人，当代药物设计(Current Pharmaceutical Design), 2005,11 :2311-2330 ;Palii 等人，眼科学研究 & 视觉科学(Investigative Ophthalmology & Visual Science), 2008,49 (11) :5094-5102]。对于在眼后段中的全身给药的低可用度，一个替代方案是通过眼内注射和眼周注射的在眼后段中的局部给药，如结膜下注射、眼球筋膜下注射和眼球后注射，或在这一段中的结膜下植入物[Geroski等人,眼科学研究&视觉科学(Investigative Ophthalmology& Visual Science)，2000，41 (5) :961-964 ;Kiagiadaki 等人，眼科学研究 & 视觉科学(Investigative Ophthalmology & Visual Science), 2008,49 (7) :3080-3089]。然而，如果反复进行这些给药形式的话，对于患者是不舒适的，并且存在着其频率增加的继发效应。此夕卜，在植入物的情况下，需要进行外科干预。虽然这些治疗类型在临床前研究中显示是有效的，但它们需要规则注射应用，在一些情况下具有继发效应，如视网膜脱离、白内障、发红或眼内炎[Geroski 等人,眼科学研究 & 视觉科学(Investigative Ophthalmology & VisualScience), 2000,41 (5) :961-964 ;Herrero_Vanrell 等人，药物递送科学与技术杂志(Journal of Drug Delivery Science and Technology),2007,17(I) :11-17 ;Robertson等人，眼科药理学与治疗学杂志(Jour nal of Ocular Pharmacology and Therapeutics),1997，13(13)) :171-177]。对于之前的药物的给药途径的另一个替代方案是局部眼部给药。然而，局部眼部通道，作为药物目标是在眼后段中的一个给药途径，由于估计能够到达后段的活性物质的百分比在大多数情况下是不显著的，到目前为止已经受到限制[Andds-Guerreix)等人，Archivos de la Sociedad LspaFio/a de Oftalmologia, 2008,83 :683-686] 已经提及在现有技术之内的用于生长抑素和类似物的局部眼部给药的若干选项。因此，例如，文献US 2005/074497A1描述了一种含有用于治疗眼后段疾病的抗血管生成药物(如奥曲肽)的水凝胶。在大量药物中，奥曲肽被披露于本专利申请中。此外，在本文献中没有描述奥曲肽或其他药物的实例。通过使用隐形眼镜使水凝胶与眼睛接触，或可替代地使用粘合剂或外科手术将其附着到眼睛上。在本文献中明确排除通过滴眼剂给药。然而，使用隐形眼镜给药伴随有眼睛被病原体感染的风险，并且另外地，随着增加的眼压使得患者不能忍受。另一种可能性是处于一种油膏或软膏形式的在眼睑内部的局部给药。然而，由于它们的过度粘性和缓慢吸收，油膏倾向于不舒适并且降低视力。文献WO 99/24019A1也描述了一种由不同药物制成的干固体剂型，这些药物中的生长抑素被复原为一种液体溶液，然后作为滴眼剂给药。虽然在本文献中没有提供任何生长抑素制剂的实例，也没有使用滴眼剂而到达所施用的眼后段的这种或其他药物的指示。另一方面，文献US 5182258A描述了一种处于滴眼剂形式的制剂，它可以通过鼻泪系统用于全身给药，除了许多其他之外，其中给予的有效成分可以是生长抑素。然而，在本文献中没有陈述关于用于治疗眼后段疾病的这种或其他有效成分的给药。这同样发生在现有技术中的其他制剂，其中通过局部途径给予奥曲肽，没有指示用于治疗和/或预防眼后段疾病的可能应用。[Danesi等人，临床癌症研究(Clinical Cancer Research), 1997,3 :265-272 ；Demir 等人，眼科学文献(Documenta Ophthalmologica)，2003，107 :87-92]。因此，在现有技术中对于找到用于局部治疗和/或预防眼后段疾病的生长抑素或其类似物的局部眼部给药形式存在着需要，这种形式解决对于患者的舒适性以及在药学上可接受的制剂中的低治疗有效性两个问题。本发明的目的是一种局部眼用组合物，一种局部给予在眼中的生长抑素或其类似物的液体药物制剂，其到达眼后段，结合在该处呈现的生长抑素受体，并且被施用用于治疗和/或预防眼后段疾病，这些疾病受益于生长抑素或它的类似物与生长抑素受体的结合。本发明提供了前所未有的在肽(特别是生长抑素或它的类似物)的局部眼部给药方面的突破。发明说明出人意料地，本发明解决了先前描述的问题。在第一方面，本发明涉及含有肽的一种局部眼用组合物，特征在于治疗有效量的这种肽到达眼后段。在一个具体的实施方案中，该局部眼用组合物选自滴眼剂、油膏、软膏的组。在另一方面，本发明涉及含有一种肽的滴眼剂，其特征在于治疗有效量的这种肽到达眼后段。 在本发明的背景下，术语“滴眼剂”涉及一种以滴剂的形式给予到眼外面上并且对眼后段具有局部作用的药用液体制剂。在本发明的背景下，术语“眼后段”包括脉络膜、视网膜色素上皮、视网膜、黄斑、中央凹(fovea)、视神经以及玻璃体液。在具体的实施方案中，这种肽选自生长抑素或生长抑素类似物，优选地生长抑素或生长抑素类似物选自下组，该组由以下各项构成生长抑素-28、生长抑素-14、生长抑素-13、前生长抑素、奥曲肽、兰瑞肽、伐普肽、帕瑞肽、司格列肽、皮质抑素以及它们的药学上可接受的盐类。在另一个具体的实施方案中，生长抑素或生长抑素类似物是用一个酰基或聚乙二醇部分取代的。优选地，酰基选自下组，该组由以下各项组成乙酰基、叔丁酰基、己酰基、甲基己酰基、环己烷羧基、辛酰基、癸酰基、月桂酰、肉豆蘧酰、棕榈酰、硬脂酰、油酰以及亚油酰。优选地，聚乙二醇部分具有在200与35，000道尔顿之间的分子量。在另一个具体的实施方案中，肽(优选生长抑素或生长抑素类似物)的浓度是在0. I ii g/mL 与 100mg/mL 之间，优选在 I ii g/mL 与 10mg/mL 之间，更优选在 10 y g/mL 与 Img/mL之间。在另一个具体的实施方案中，滴眼剂的pH值是在3与8之间，优选在4与7之间。为了调节滴眼剂的PH值，将会加入本领域技术人员已知的酸类和/或碱类，以达到前述的pH值。在另一个具体的实施方案中，本发明中的滴眼剂载体是一种等渗水溶液，如氯化钠或硼酸的等渗溶液、或一种聚(乙烯醇)水溶液或其混合物。在另一个具体的实施方案中，可以将本发明组合物的肽结合到脂质体、混合脂质体、盘状体、醇质体、纳米粒子、固体脂质纳米粒、纳米结构脂质载体、胶束、表面活性剂的混合胶束、表面活性剂-磷脂混合胶束、纳米球、脂质球以及纳米囊中。在另一个具体的实施方案中，本发明的滴眼剂可以任选地含有一种防腐剂。本领域的技术人员可以识别现有技术的防腐剂，如苯扎氯铵、苯甲酸、烷基苯甲酸酯、三氯叔丁醇、氯甲酚、鲸蜡醇、脂肪醇(如十六醇)、水银的有机金属化合物(如乙酸盐、硝酸苯汞或硼酸苯汞)、双咪唑烷基脲、己二酸二异丙酯、聚二甲基硅氧烷、EDTA的盐类、维生素E及其混合物。在另一个具体的实施方案中，本发明的滴眼剂可以任选地含有一种可以增加肽(优选肽生长抑素或一种生长抑素类似物)的渗透性以到达眼后段的试剂。优选地，增加渗透性的试剂选自下组，该组由以下各项构成苯扎氯铵、皂苷、脂肪酸、聚氧乙烯脂肪醚、月旨肪酸烷基酯、吡咯烷酮、聚乙烯吡咯烷酮、丙酮酸、焦谷氨酸以及他们的混合物(除其他之外)。在第二方面，本发明涉及用于治疗和/或预防眼后段疾病的本发明的滴眼剂。优选地，眼后段疾病的治疗和/或预防受益于生长抑素或它的类似物与生长抑素受体的结合。更优选地，眼后段疾病选自下组，该组由以下各项构成非增殖性糖尿病性视网膜病变、增殖性糖尿病性视网膜病变、年龄相关性黄斑变性、新生血管性视网膜疾病、缺血诱导的视网膜病变、早产儿视网膜病变、镰状红细胞性视网膜病变、视网膜静脉阻塞、视网膜色素变性、脉络膜新生血管、眼色素层炎、黄斑水肿以及囊样黄斑水肿。在生长抑素的情况下，相对于它的在血清中的半衰期，它在眼后段玻璃 体的稳定性更好，这有利于它在局部水平用于治疗和/或预防先前提及的眼后段疾病的作用。在第三个方面，本发明涉及一种治疗和/或预防眼后段疾病的方法，该方法包括借助于一种局部眼用组合物局部给予一个治疗有效量的肽，该局部眼用组合物选自下组，该组由以下各项组成滴眼剂、油膏和软膏。在具体的实施方案中，这种肽选自生长抑素或生长抑素类似物，优选地生长抑素或生长抑素类似物选自下组，该组由以下各项构成生长抑素-28、生长抑素-14、生长抑素-13、前生长抑素、奥曲肽、兰瑞肽、伐普肽、帕瑞肽、司格列肽、皮质抑素以及它们的药学上可接受的盐类。在另一个具体的实施方案中，给药频率可以取决于每位受试者的需要和有待治疗或预防的疾病的严重性而变化很大，其中推荐给药范围是从每周I次到每日10次之间，优选从每周3次到每天3次之间，更优选每日I次或2次。在另一个具体的实施方案中，治疗和/或预防的方法也包括另一种用以治疗和/或预防眼后段疾病治疗剂的给药。在非限制意义上，用于治疗和/或预防眼后段疾病的治疗剂是例如选自下组的那些药剂抗血管内皮生长因子(VEGF)、前列腺素类似物、￠-肾上腺素受体拮抗剂、a -2-肾上腺素受体激动剂、碳酸酐酶抑制剂、缩瞳剂、单克隆抗体、皮质激素、糖皮质激素、激酶抑制剂、睫状肌麻痹药或抗代谢物。这些用于治疗和/或预防眼后段疾病的治疗剂可以通过局部、口服或非胃肠道途径给药。在本发明的背景下，术语“非胃肠道”包括玻璃体内、眼内、角膜内、皮下、真皮内、血管内注射,如静脉内、肌肉内、以及其他类似的注射或输注技术。在此给出的特定实例用于说明本发明的性质。包括的这些实例仅仅是用于说明的目的并且不应当被解释为对在此要求的本发明的限制。图I :图I显示了两只小鼠(I和2)的视网膜，它们在右眼⑴中接受生长抑素而在左眼(_)中接受安慰剂图2:图2显示了在对照大鼠(组I)、糖尿病大鼠(组2)、用生长抑素治疗的糖尿病大鼠(组3)以及用奥曲肽治疗的糖尿病大鼠(组4)中在第二 OP幅值之间的差异。图3 :图3显示了共聚焦显微图像。共聚焦GFAP免疫组织化学40倍放大。在STZ诱导的糖尿病大鼠(组2)的神经节细胞层中观察到了高得多的GFAP表达(最亮的标记)。用生长抑素(组3)或奥曲肽(组4)治疗阻止了神经胶质细胞的活化，与相似于对照(组I)的GFAP水平相关。图4 :图4显示了共聚焦显微图像。TUNEL的共聚焦图像放大40倍。视网膜变性与较高数量的凋亡细胞相关(最亮的标记表示TUNEL阳性)，特别是在STZ诱导的糖尿病大鼠(组2)中所观察到的0NL。用生长抑素(组3)和奥曲肽(组4)的治疗阻止了视网膜变性并且显示出发现于健康对照大鼠(组I)中的相似细胞数。SM实例I :含有生长抑素 -14的滴眼剂。通过将125 L的0. 9%氯化钠添加到5mg的生长抑素_14中制备了处于滴眼剂形式的生长抑素药物组合物。实例2 :在视网膜中的局部眼用生长抑素浓度的评估。使用了 8周大C57BL/6小鼠。动物的处理和照料遵循瓦尔德希伯伦大学医院研究所(Institut de Recerca del Hospital Universitari Vall d’Hebron)方案和欧洲经济共同体(European Economic Community)以及A.R.V.O.(视觉与眼科学研究协会)国际指南而进行(目86/609/CEE)。在控制的温度(20° )和湿度(60% )，在持续12小时的恒定明-暗周期下，将动物保持在动物设施中的单独的笼子中，动物可以自由接近食物和饮水。将来自实例I的生长抑素-14滴眼剂(每滴5UL)施用到右眼，并且将安慰剂(生理盐水)施用到左眼。每天给药两滴，早上一滴，晚上给另一滴，持续5天。在最后一次给药之后，在麻醉两小时下通过颈脱位法使这些动物安乐死。之后立即取眼球并在-80°冷冻保存直到处理。通过在放大镜下将其解剖，将眼后段(视网膜和玻璃体)与眼球的其余部分分离。通过蛋白质印迹确定在视网膜中的生长抑素-14量。用50mM Tris-HCKpH 7. 9)、300mM KC1、I.5mM MgCl2、0. 1%诺乃洗涤剂P-40以及含有Complete 蛋白酶抑制剂混合物的20%甘油的溶液在4°C提取蛋白质持续12小时。之后将样品离心(12，OOOrpm，在4°C )持续10分钟，用针对生长抑素-14的兔抗体(ab53165, abeam)对这些蛋白质进行蛋白质印迹。为了标准化所获得的生长抑素-14的浓度，使用P -肌动蛋白作为对照。使用标记有HRP的针对兔IgG的羊抗体或针对羊IgG的兔抗体连同化学发光底物(Pierce生物技术公司，洛克福特，伊利诺州，美国)(Pierce Biotechnology Inc. , Rockfort, Illinois, USA)通过暴露在射线照相胶片上来鉴定特异性抗原抗体复合物。进行光密度分析(光密度计GS-800.伯乐实验室，赫拉克勒斯，加利福尼亚，美国)(Densitometer GS-800. Bio-Rad Laboratories,Hercules, California, USA),结果表示为任意单位。图I显示了 2只小鼠(I和2)的视网膜，它们在右眼(+)中接受生长抑素并且在左眼(_)中接受安慰剂。正如可以看见的，在两只动物上的治疗眼中的生长抑素的量是更大的。对于在两只眼都接受安慰剂的对照小鼠，没有检测到在两只眼中之间的生长抑素浓度的差异。实例3 :在人玻璃体及人血清中的生长抑素的稳定性。在37°C以90%将生长抑素与人血清或人玻璃体液孵育。在不同的孵育时间提取等分部分。加入乙腈使血清蛋白沉淀，离心，过滤上清液，然后注入RP-HPLC中(梯度20-80% B 30分钟，B =在乙腈中的0. 07% TFA)。使用相应于初始产物的区域分析初始产物的消失并计算半衰期。生长抑素在血清中的半衰期是2. 7小时，在玻璃体液中的半衰期是64小时。实例4 :含有生长抑素-14的滴眼剂。通过将ImL的0. 9%氯化钠水溶液加入到IOmg的生长抑素-14中制备了处于滴眼剂形式的生长抑素药物组合物。最后，将溶液通过0. 22 i! m无菌过滤器过滤。实例5 :含有奥曲肽的滴眼剂。通过将ImL的0. 9%氯化钠水溶液加入到IOmg的奥曲肽中制备了处于滴眼剂形式的奥曲肽药物组合物。最后，将溶液通过0. 22 u m无菌过滤器过滤。
实例6 :含有伐普肽的滴眼剂。通过将ImL的0. 9%氯化钠水溶液加入到IOmg的伐普肽中制备了处于滴眼剂形式的伐普肽药物组合物。最后，将溶液通过0. 22 无菌过滤器过滤。实例7 :含有皮质抑素的滴眼剂。通过将ImL的0. 9%氯化钠水溶液加入到IOmg的皮质抑素中制备了处于滴眼剂形式的皮质抑素药物组合物。最后,将溶液通过0. 22 iim无菌过滤器过滤。实例8 :含有生长抑素-14的滴眼剂。通过将ImL的0. 9%氯化钠和I. 4%聚(乙烯醇)水溶液加入到0. 27mg的生长抑素-14中制备了处于滴眼剂形式的生长抑素药物组合物。最后，将溶液通过0. 22 y m无菌过滤器过滤。实例9 :含有生长抑素-28的滴眼剂。通过将ImL的0. 9%氯化钠水溶液加入到0. 05的生长抑素-28中制备了处于滴眼剂形式的生长抑素药物组合物。最后，将溶液通过0. 22 无菌过滤器过滤。实例10 :含有生长抑素-14、羟基苯甲酸酯以及聚氧乙烯脂肪醚的滴眼剂。通过将ImL 0. 9%的氯化钠水溶液加入到50 ii g的对轻基苯甲酸甲酯、100 ii g的对轻基苯甲酸丙酯、50 ii g的聚氧乙烯硬脂酸醚(polyoxyethylene-20-stearyl ether)(布里杰-78)以及Img的生长抑素-14中制备了处于滴眼剂形式的生长抑素药物组合物。最后，将溶液通过0. 22 ii m无菌过滤器过滤。实例11 :含有生长抑素-14脂质体的滴眼剂。将生长抑素药物组合物制备在每mL含有20mg的磷脂酰胆碱和2. 7mg的生长抑素-14的0. 9%的氯化钠中。简言之，在搅拌下将磷脂酰胆碱缓慢加入到含有生长抑素-14的0. 9%氯化钠水溶液中。将该组合物进一步搅拌15分钟直到形成一种脂质体悬浮液。然后将脂质体通过具有400nm孔径的聚碳酸酯滤器、200nm孔径的滤器、以及最后通过具有IOOnm孔径的滤器十次而逐步挤出。最后，将溶液通过0. 22 y m无菌过滤器过滤。实例12 :含有生长抑素-14纳米囊的滴眼剂。制备了 Ig的在二氯甲烷中的分子量为5000的聚乳酸-羟基乙酸共聚物(50 50)的10%溶液。将生长抑素-14(IOOmg)溶解在ImL的水中。将该生长抑素溶液加入到该聚合物溶液中并且使用一个超声波探头将其乳化。然后，将该纳米乳通过0. 22 y m无菌过滤器过滤。然后使用超声波探头将生成的纳米乳分散到1%聚(乙烯醇)溶液中以降低粒径直到获得一种纳米乳。在40%乙醇水溶液中提取纳米囊并且通过切向流超滤将它们纯化。最后，将含有生长抑素(16mg)的70mg的纳米囊分散于IOOmL I. 4%聚(乙烯醇)水溶液中。实例13 :含有生长抑素-14的眼膏。通过将符合美国药典的50mL的白凡士林加入到200mg的生长抑素-14中制备了处于眼膏形式的生长抑素药物组合物。
实例14 :用生长抑素和奥曲肽的局部眼部治疗在预防在糖尿病大鼠中的视网膜神经退行性病变的效果。将60mg/Kg链脲佐菌素(STZ)施用到斯普拉-道来大鼠(Sprague Dawley rat)中。正如在表I中详述,将这些动物分成4个组


肽的局部眼用制剂以及它们用于治疗和/或局部预防眼病，优选眼后段疾病的用途。