专利名称：具有抗癫痫作用的活蝎活性蛋白、制备方法及其应用的制作方法 现有的用于抗癫痫的药物，一般都是化合物，服用后会有很大的毒副作用。而传统的中草药因毒副作用小已经被医疗界所公认，但传统的中草药在抗癫痫领域尚未得到开发。如蝎子这种中药材，全蝎可以作为名贵中药在各种领域应用，但还不能将其有效成分提取出来作为药物治疗某种疾病。而蝎子治疗疾病的主要有效成分是蝎子体内的活性蛋白，研究发现，这种活性蛋白提取出来以后可以明显延长小鼠的癫痫发作潜伏期，具有抗癫痫的作用。
本发明的目的在于开发活蝎在抗癫痫领域的应用，提供一种切实有效的抗癫痫药物蛋白。研究发现PTZ的毒性可以诱发癫痫，而脑组织的PKC(磷酸激酶C)本身具有抗癫痫的作用。其原理为PKC是G蛋白偶联受体的胞内重要信息物质，它主要使大量底物磷酸化而参与机体内广泛的生理效应。经研究发现，蝎子活性蛋白本身虽无PKC活性，但其能够进入脑内起作用，能促进脑组织PKC活性的激活。经过试验发现，蝎蛋白酒和蝎蛋白粉均能使小鼠脑内兴奋性氨基酸NMDA受体的结合减少，使磷酸激酶C(PKC)活性增强。根据上述的研究，蝎子的药用有效成分活性蛋白具有抗癫痫作用，蝎子活性蛋白提取物均可以用作抗癫痫的药物。而且，其毒副作用小，不会对人体产生其它危害。本发明提供一种具有抗癫痫的活蝎活性蛋白，其是用注射器直接从消毒后的活蝎体内的蛋白囊内抽取蛋白原液，并将上述提取的蛋白原液经分离后得到的具有抗癫痫作用的活性蛋白。上述的该蛋白原液是从位于活蝎腹部第三腹节的中间位置的体内蛋白囊内提取的。也可以从位于活蝎后腹部第五节的中间位置的体内蛋白囊抽取，该两处均具有存放蛋白原液的蛋白囊。上述的该提取的蛋白原液的分离方法是在蛋白原液中加少量的无菌蒸馏水和10％无菌葡萄糖液体，充分摇允，在0～3摄氏度冷藏静止2小时，抽取上清液并冷冻干燥，得到冻干活性蛋白粉。也可以是在蛋白原液中加入提取的活蝎自体、体内、体外消化液，充分摇匀，在0～3摄氏度冷藏静止2小时，抽取上清液并冷冻干燥，得到冻干活性蛋白粉。
上述取得的活蝎活性蛋白可以用于人体抗癫痫症状的治疗，可以口服，其中口服为每人每天1.2～3.3克，分两次服用。
用上述方法得到的活蝎活性蛋白可以作为抗癫痫药物使用，其具有无毒性、安全的优点。


图1为本发明的动物试验白鼠癫痫潜伏期方差分析图；图2为本发明的动物试验白鼠癫痫发作等级方差分析图
实施例一蝎蛋白粉在抗癫痫中的作用试验(1)蝎蛋白粉的制备取蝎子活体成虫，准备1毫升微型注射器一只、含酒精55％的白酒、消毒棉签、150毫升透明容器和冰箱。
用蘸取55％的白酒的棉签取在蝎子腹部擦拭消毒，找准蝎子腹部第三腹节的中间位置，然后将1毫升的微型注射器的针头插入该位置内适当深度，插入时注意观察位于蝎子腹部的生殖器，当发现蝎子腹部的生殖器发生颤动时，说明针头已插入蛋白囊，这时开始抽取蛋白囊内的蛋白原液，抽出的蛋白原液呈天蓝色。
完成一只蝎子的蛋白液抽取后，按上述的步骤进行第二只蝎子的蛋白液抽取。
注射器容积抽满后将蛋白液放入透明容器内，并将该透明容器放入冰箱内冷藏，抽满注射器后再次将蛋白液放入透明容器内，逐个完成蛋白液抽取后，得到天蓝色的蛋白原液。
在该100毫升的蛋白原液中加入1毫升的无菌蒸馏水和0.5毫升的10％的无菌葡萄糖水溶液；充分的摇匀后在0～3摄氏度下冷藏静止2小时，这时容器中的蛋白液便分为两部分，上部分为澄清的透明液体，提取上部分的澄清液体，冷冻干燥得到冻干粉。
上述的蝎蛋白粉也可以用下述方法制得取蝎子活体成虫，准备1毫升微型注射器一只、含酒精55％的白酒、消毒棉签、150毫升透明容器和冰箱。
用55％的白酒对活蝎喷雾消毒，然后用同样的白酒对活蝎的后腹部进行擦拭消毒，找准蝎子后腹部第五节的中间位置，然后将1毫升的微型注射器的针头插入该位置内适当深度，插入时注意观察位于蝎子尾部的尾针的反应，当发现蝎子的尾针快速颤动时，说明针头已插入蛋白囊。这时开始抽取蛋白囊内的蛋白原液，在抽取活蝎活性蛋白分泌囊的原液时，要由轻到重压迫活蝎的前腹部，而后再从前至后按压活蝎腹部，边抽取边按压。抽出的蛋白原液呈天蓝色。
完成一只蝎子的蛋白原液抽取后，按上述的步骤进行第二只蝎子的蛋白分液的抽取，直至抽取完毕。
注射器容积抽满后将蛋白原液放入透明容器内，并将该透明容器放入冰箱内冷藏，抽满注射器后再次将蛋白原液放入透明容器内，逐个完成蛋白分液的抽取，上述的过程得到天蓝色蛋白原液。
将上述的蛋白分液进行分离，首先在蛋白原液中加入提取的活蝎自体、体内、体外消化分泌液，这种消化分泌液是这样提取的从活蝎生殖孔前的第三节中间位置，用注射器直接进针，向后平行插入抽取内部的自体、体内、体外消化分泌液，抽取时边抽取边从后向前有规律按压。加入上述消化分泌液后摇匀，在0～3摄氏度下冷藏静止2小时，这时容器中的蛋白原液便分为两层，上层为澄清的透明液体，提取上部分的澄清液体，冷冻干燥得到冻干粉。
(2)试验药液配制将上述的制备的蝎粉用蒸馏水溶解，分别制成高剂量蝎粉水溶液，每毫升含蝎粉55毫克；蝎粉中剂量水溶液，每毫升含蝎粉27.5毫克；蝎粉低剂量水溶液，每毫升含蝎粉13.75毫克。制作对比试验药液，空白对照组为蒸馏水；丙戊酸钠对照组使用每毫升9.25毫克的丙戊酸钠。
(3)选雄性小鼠40只，适应环境喂养3天后，随机分成5组，每组8只。用PTZ诱导癫痫，诱导时间定为上午9:00～12:00，腹部注射PTZ，每1千克重量用PTZ50毫克，观察发作潜伏期和发作等状况，发现各组小鼠潜伏期和发作情况无明显的差异。
(4)第二天上午8:00分别给各组小鼠喂药，第一组为服用蒸馏水的对照组，第二组为服用丙戊酸钠的对照组，第三组为服用蝎粉高剂量的实验组，第四组为服用蝎粉中剂量的实验组，第五组为服用蝎粉低剂量的实验组。其中第一组每只服用蒸馏水0.4毫升，第二组服用上述的丙戊酸钠水溶液0.4毫升，相当于每千克服用185毫克；第三组服用上述的蝎粉高剂量蒸馏水溶液0.4毫升，相当于每千克服用1000毫克；第四组服用上述的蝎粉中剂量蒸馏水溶液0.4毫升，相当于每千克服用500毫克；第五组服用上述的蝎粉低剂量水溶液0.4毫升，相当于每千克服用250毫克。连续喂服3天，于最后一次给药后的1小时，腹腔注射PTZ每千克50毫克，观察小鼠惊厥的潜伏期并按等级进行评分。结果见下表1、表2。
表1

表2

经双因素方差分析见图1和图2(方差分析图)所示，明显可以得出抗癫痫作用的比较结果。
丙戊酸钠＞蝎粉中剂量＞蝎粉低剂量＞蝎粉高剂量＞蒸馏水。
因此可以得出蝎粉具有较好的抗癫痫作用，蝎蛋白粉可以用作抗癫痫的药物使用。
根据动物试验和人类药物用量的相关性和对应关系，可以初步确定人类在使用蝎蛋白粉制做抗癫痫药物时，其口服用量可以掌握干粉剂量为，每人每天1.2～3.3克之间，分两次服用，服用该剂量的该抗癫痫活蝎蛋白不会对人体产生任何毒副作用。


本发明公开了一种具有抗癫痫作用的活蝎活性蛋白，其是用注射器直接从消毒后的活蝎体内的蛋白囊内抽取蛋白原液，并将上述提取的蛋白原液经分离后得到的具有抗癫痫作用的活性蛋白。该活蝎活性蛋白可以用来制造治疗人体癫痫症状的药物，用于口服，其中口服为每人每天1.2～3.3克干粉剂量，分两次服用。本发明的抗癫痫蛋白无毒副作用。