专利名称：：抗－磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗体的制作方法：发明领域本发明涉及一种抗-磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗体，一种含有该抗体作为活性成分的细胞生长抑制剂和抗癌药物。相关技术描述磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC3)是存在于细胞表面上的硫酸乙酰肝素蛋白多糖的磷脂酰肌醇蛋白聚糖家族中的一种。一些人认为GPC3可能与发育中的细胞分裂或癌细胞生长有关，然而，其功能目前仍没有得以较好的阐明。人们已发现某种类型的结合于GPC3的抗体通过抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)活性以及补体-依赖的细胞毒性(CDC)活性具有细胞生长-抑制活性(国际专利申请WO2003/000883)。此外，已表明GPC3在体内裂解并以GPC3的分泌形式分泌到血液中，且利用能够检测分泌形式GPC3的抗体可以进行肿瘤诊断(国际专利申请WO2004/022739，WO03/100429和WO2004/018667)。当开发基于抗体的细胞毒性活性的抗癌药物时，优选使用具有高ADCC活性或CDC活性的抗体。因此，具有高细胞毒性活性的GPC3抗体已被期待作为识别GPC3的抗体。本发明的目的是提供一种与传统抗体相比具有较高ADCC活性和CDC活性的抗-GPC3抗体。发明概述本发明人成功获得了与常规的抗-磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗体相比具有较高细胞毒性活性的抗体。此外，他们分析了这种抗体的表位并成功确定了由具有高细胞毒性活性的抗体识别的GPC3上的区域。一方面，本发明提供了含有具有下述(1)-(12)任一项的CDRs1，2和3的重链可变区的抗体(1)含有SEQIDNO123所示氨基酸序列的CDR1，含有SEQIDNO124所示氨基酸序列的CDR2，以及含有SEQIDNO125所示氨基酸序列的CDR3；(2)含有SEQIDNO109所示氨基酸序列的CDR1，含有SEQIDNO110所示氨基酸序列的CDR2，以及含有SEQIDNO111所示氨基酸序列的CDR3；(3)含有SEQIDNO106所示氨基酸序列的CDR1，含有SEQIDNO107所示氨基酸序列的CDR2，以及含有SEQIDNO108所示氨基酸序列的CDR3；(4)含有SEQIDNO132所示氨基酸序列的CDR1，含有SEQIDNO133所示氨基酸序列的CDR2，以及含有SEQIDNO134所示氨基酸序列的CDR3；(5)含有SEQIDNO106所示氨基酸序列的CDR1，含有SEQIDNO135所示氨基酸序列的CDR2，以及含有SEQIDNO136所示氨基酸序列的CDR3；(6)含有SEQIDNO126所示氨基酸序列的CDR1，含有SEQIDNO127所示氨基酸序列的CDR2，以及含有SEQIDNO128所示氨基酸序列的CDR3；(7)含有SEQIDNO129所示氨基酸序列的CDR1，含有SEQIDNO130所示氨基酸序列的CDR2，以及含有SEQIDNO131所示氨基酸序列的CDR3；(8)含有SEQIDNO103所示氨基酸序列的CDR1，含有SEQIDNO104所示氨基酸序列的CDR2，以及含有SEQIDNO105所示氨基酸序列的CDR3；(9)含有SEQIDNO118所示氨基酸序列的CDR1，含有SEQIDNO121所示氨基酸序列的CDR2，以及含有SEQIDNO122所示氨基酸序列的CDR3；(10)含有SEQIDNO115所示氨基酸序列的CDR1，含有SEQIDNO116所示氨基酸序列的CDR2，以及含有SEQIDNO117所示氨基酸序列的CDR3；(11)含有SEQIDNO112所示氨基酸序列的CDR1，含有SEQIDNO113所示氨基酸序列的CDR2，以及含有SEQIDNO114所示氨基酸序列的CDR3；或(12)含有SEQIDNO118所示氨基酸序列的CDR1，含有SEQIDNO119所示氨基酸序列的CDR2，以及含有SEQIDNO120所示氨基酸序列的CDR3；在另一个方面，本发明提供了含有具有如下(1)-(13)任一项的CDRs1，2和3的轻链可变区的抗体(1)含有SEQIDNO143所示氨基酸序列的CDR1，含有SEQIDNO144所示氨基酸序列的CDR2，以及含有SEQIDNO158所示氨基酸序列的CDR3；(2)含有SEQIDNO143所示氨基酸序列的CDR1，含有SEQIDNO144所示氨基酸序列的CDR2，以及含有SEQIDNO145所示氨基酸序列的CDR3；(3)含有SEQIDNO140所示氨基酸序列的CDR1，含有SEQIDNO141所示氨基酸序列的CDR2，以及含有SEQIDNO142所示氨基酸序列的CDR3；(4)含有SEQIDNO167所示氨基酸序列的CDR1，含有SEQIDNO168所示氨基酸序列的CDR2，以及含有SEQIDNO169所示氨基酸序列的CDR3；(5)含有SEQIDNO170所示氨基酸序列的CDR1，含有SEQIDNO144所示氨基酸序列的CDR2，以及含有SEQIDNO171所示氨基酸序列的CDR3；(6)含有SEQIDNO159所示氨基酸序列的CDR1，含有SEQIDNO160所示氨基酸序列的CDR2，以及含有SEQIDNO161所示氨基酸序列的CDR3；(7)含有SEQIDNO162所示氨基酸序列的CDR1，含有SEQIDNO147所示氨基酸序列的CDR2，以及含有SEQIDNO163所示氨基酸序列的CDR3；(8)含有SEQIDNO164所示氨基酸序列的CDR1，含有SEQIDNO165所示氨基酸序列的CDR2，以及含有SEQIDNO166所示氨基酸序列的CDR3；(9)含有SEQIDNO137所示氨基酸序列的CDR1，含有SEQIDNO138所示氨基酸序列的CDR2，以及含有SEQIDNO139所示氨基酸序列的CDR3；(10)含有SEQIDNO155所示氨基酸序列的CDR1，含有SEQIDNO156所示氨基酸序列的CDR2，以及含有SEQIDNO157所示氨基酸序列的CDR3；(11)含有SEQIDNO149所示氨基酸序列的CDR1，含有SEQIDNO150所示氨基酸序列的CDR2，以及含有SEQIDNO151所示氨基酸序列的CDR3；(12)含有SEQIDNO146所示氨基酸序列的CDR1，含有SEQIDNO147所示氨基酸序列的CDR2，以及含有SEQIDNO148所示氨基酸序列的CDR3；或(13)含有SEQIDNO152所示氨基酸序列的CDR1，含有SEQIDNO153所示氨基酸序列的CDR2，以及含有SEQIDNO154所示氨基酸序列的CDR3；优选地，本发明的抗体选自如下(1)-(13)的任一项(1)包括具有分别含有SEQIDNO123，124和125所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的重链可变区以及具有分别含有SEQIDNO143，144和158所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的轻链可变区的抗体；(2)包括具有分别含有SEQIDNO109，110和111所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的重链可变区以及具有分别含有SEQIDNO143，144和145所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的轻链可变区的抗体；(3)包括具有分别含有SEQIDNO106，107和108所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的重链可变区以及具有分别含有SEQIDNO140，141和142所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的轻链可变区的抗体；(4)包括具有分别含有SEQIDNO132，133和134所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的重链可变区以及具有分别含有SEQIDNO167，168和169所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的轻链可变区的抗体；(5)包括具有分别含有SEQIDNO106，135和136所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的重链可变区以及具有分别含有SEQIDNO170，144和171所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的轻链可变区的抗体；(6)包括具有分别含有SEQIDNO126，127和128所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的重链可变区以及具有分别含有SEQIDNO159，160和161所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的轻链可变区的抗体；(7)包括具有分别含有SEQIDNO129，130和131所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的重链可变区以及具有分别含有SEQIDNO162，147和163所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的轻链可变区的抗体；(8)包括具有分别含有SEQIDNO129，130和131所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的重链可变区以及具有分别含有SEQIDNO164，165和166所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的轻链可变区的抗体；(9)包括具有分别含有SEQIDNO103，104和105所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的重链可变区以及具有分别含有SEQIDNO137，138和139所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的轻链可变区的抗体；(10)包括具有分别含有SEQIDNO118，121和122所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的重链可变区以及具有分别含有SEQIDNO155，156和157所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的轻链可变区的抗体；(11)包括具有分别含有SEQIDNO115，116和117所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的重链可变区以及具有分别含有SEQIDNO149，150和151所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的轻链可变区的抗体；(12)包括具有分别含有SEQIDNO112，113和114所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的重链可变区以及具有分别含有SEQIDNO146，147和148所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的轻链可变区的抗体；(13)包括具有分别含有SEQIDNO118，119和120所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的重链可变区以及具有分别含有SEQIDNO152，153和154所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的轻链可变区的抗体；在另一个方面，本发明提供了含有具有如下(1)-(7)任一项的重链可变区的抗体(1)包括SEQIDNO84所示氨基酸序列的重链可变区；(2)包括SEQIDNO85所示氨基酸序列的重链可变区；(3)包括SEQIDNO86所示氨基酸序列的重链可变区；(4)包括SEQIDNO87所示氨基酸序列的重链可变区；(5)包括SEQIDNO88所示氨基酸序列的重链可变区；(6)包括SEQIDNO89所示氨基酸序列的重链可变区；或(7)包括SEQIDNO90所示氨基酸序列的重链可变区。在另一个方面，本发明提供了具有包含SEQIDNO92所示氨基酸序列的轻链可变区的抗体。优选地，本发明的抗体选自如下(1)-(7)任一项的抗体(1)包括含有SEQIDNO84所示氨基酸序列的重链可变区以及含有SEQIDNO92所示氨基酸序列的轻链可变区的抗体；(2)包括含有SEQIDNO85所示氨基酸序列的重链可变区以及含有SEQIDNO92所示氨基酸序列的轻链可变区的抗体；(3)包括含有SEQIDNO86所示氨基酸序列的重链可变区以及含有SEQIDNO92所示氨基酸序列的轻链可变区的抗体；(4)包括含有SEQIDNO87所示氨基酸序列的重链可变区以及含有SEQIDNO92所示氨基酸序列的轻链可变区的抗体；(5)包括含有SEQIDNO88所示氨基酸序列的重链可变区以及含有SEQIDNO92所示氨基酸序列的轻链可变区的抗体；(6)包括含有SEQIDNO89所示氨基酸序列的重链可变区以及含有SEQIDNO92所示氨基酸序列的轻链可变区的抗体；以及(7)包括含有SEQIDNO90所示氨基酸序列的重链可变区以及含有SEQIDNO92所示氨基酸序列的轻链可变区的抗体。在另一个方面，本发明提供了含有具有如下(1)-(15)任一项的CDRs1，2和3的轻链可变区的抗体(1)含有SEQIDNO174所示氨基酸序列的CDR1，含有SEQIDNO144所示氨基酸序列的CDR2，以及含有SEQIDNO158所示氨基酸序列的CDR3；(1)含有SEQIDNO175所示氨基酸序列的CDR1，含有SEQIDNO144所示氨基酸序列的CDR2，以及含有SEQIDNO158所示氨基酸序列的CDR3；(3)含有SEQIDNO176所示氨基酸序列的CDR1，含有SEQIDNO144所示氨基酸序列的CDR2，以及含有SEQIDNO158所示氨基酸序列的CDR3；(4)含有SEQIDNO177所示氨基酸序列的CDR1，含有SEQIDNO144所示氨基酸序列的CDR2，以及含有SEQIDNO158所示氨基酸序列的CDR3；(5)含有SEQIDNO178所示氨基酸序列的CDR1，含有SEQIDNO144所示氨基酸序列的CDR2，以及含有SEQIDNO158所示氨基酸序列的CDR3；(6)含有SEQIDNO179所示氨基酸序列的CDR1，含有SEQIDNO144所示氨基酸序列的CDR2，以及含有SEQIDNO158所示氨基酸序列的CDR3；(7)含有SEQIDNO180所示氨基酸序列的CDR1，含有SEQIDNO144所示氨基酸序列的CDR2，以及含有SEQIDNO158所示氨基酸序列的CDR3；(8)含有SEQIDNO181所示氨基酸序列的CDR1，含有SEQIDNO144所示氨基酸序列的CDR2，以及含有SEQIDNO158所示氨基酸序列的CDR3；(9)含有SEQIDNO182所示氨基酸序列的CDR1，含有SEQIDNO144所示氨基酸序列的CDR2，以及含有SEQIDNO158所示氨基酸序列的CDR3；(10)含有SEQIDNO183所示氨基酸序列的CDR1，含有SEQIDNO144所示氨基酸序列的CDR2，以及含有SEQIDNO158所示氨基酸序列的CDR3；(11)含有SEQIDNO184所示氨基酸序列的CDR1，含有SEQIDNO144所示氨基酸序列的CDR2，以及含有SEQIDNO158所示氨基酸序列的CDR3；(12)含有SEQIDNO185所示氨基酸序列的CDR1，含有SEQIDNO144所示氨基酸序列的CDR2，以及含有SEQIDNO158所示氨基酸序列的CDR3；(13)含有SEQIDNO186所示氨基酸序列的CDR1，含有SEQIDNO144所示氨基酸序列的CDR2，以及含有SEQIDNO158所示氨基酸序列的CDR3；(14)含有SEQIDNO187所示氨基酸序列的CDR1，含有SEQIDNO144所示氨基酸序列的CDR2，以及含有SEQIDNO158所示氨基酸序列的CDR3；或(15)含有SEQIDNO188所示氨基酸序列的CDR1，含有SEQIDNO144所示氨基酸序列的CDR2，以及含有SEQIDNO158所示氨基酸序列的CDR3。在另一个方面，本发明提供了选自抗体如下(1)-(15)的抗体(1)包括具有分别含有SEQIDNO123，124和125所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的重链可变区以及具有分别含有SEQIDNO174，144和158所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的轻链可变区的抗体；(2)包括具有分别含有SEQIDNO123，124和125所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的重链可变区以及具有分别含有SEQIDNO175，144和158所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的轻链可变区的抗体；(3)包括具有分别含有SEQIDNO123，124和125所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的重链可变区以及具有分别含有SEQIDNO176，144和158所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的轻链可变区的抗体；(4)包括具有分别含有SEQIDNO123，124和125所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的重链可变区以及具有分别含有SEQIDNO177，144和158所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的轻链可变区的抗体；(5)包括具有分别含有SEQIDNO123，124和125所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的重链可变区以及具有分别含有SEQIDNO178，144和158所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的轻链可变区的抗体；(6)包括具有分别含有SEQIDNO123，124和125所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的重链可变区以及具有分别含有SEQIDNO179，144和158所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的轻链可变区的抗体；(7)包括具有分别含有SEQIDNO123，124和125所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的重链可变区以及具有分别含有SEQIDNO180，144和158所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的轻链可变区的抗体；(8)包括具有分别含有SEQIDNO123，124和125所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的重链可变区以及具有分别含有SEQIDNO181，144和158所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的轻链可变区的抗体；(9)包括具有分别含有SEQIDNO123，124和125所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的重链可变区以及具有分别含有SEQIDNO182，144和159所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的轻链可变区的抗体；(10)包括具有分别含有SEQIDNO123，124和125所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的重链可变区以及具有分别含有SEQIDNO183，144和158所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的轻链可变区的抗体；(11)包括具有分别含有SEQIDNO123，124和125所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的重链可变区以及具有分别含有SEQIDNO184，144和158所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的轻链可变区的抗体；(12)包括具有分别含有SEQIDNO123，124和125所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的重链可变区以及具有分别含有SEQIDNO185，144和158所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的轻链可变区的抗体；(13)包括具有分别含有SEQIDNO123，124和125所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的重链可变区以及具有分别含有SEQIDNO186，144和158所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的轻链可变区的抗体；(14)包括具有分别含有SEQIDNO123，124和125所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的重链可变区以及具有分别含有SEQIDNO187，144和158所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的轻链可变区的抗体；和(15)包括具有分别含有SEQIDNO123，124和125所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的重链可变区以及具有分别含有SEQIDNO188，144和158所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的轻链可变区的抗体。在另一方面，本发明提供了具有选自如下(1)-(15)的轻链可变区的抗体(1)含有SEQIDNO191所示氨基酸序列的轻链可变区；(2)含有SEQIDNO192所示氨基酸序列的轻链可变区；(3)含有SEQIDNO193所示氨基酸序列的轻链可变区；(4)含有SEQIDNO194所示氨基酸序列的轻链可变区；(5)含有SEQIDNO195所示氨基酸序列的轻链可变区；(6)含有SEQIDNO196所示氨基酸序列的轻链可变区；(7)含有SEQIDNO197所示氨基酸序列的轻链可变区；(8)含有SEQIDNO198所示氨基酸序列的轻链可变区；(9)含有SEQIDNO199所示氨基酸序列的轻链可变区；(10)含有SEQIDNO200所示氨基酸序列的轻链可变区；(11)含有SEQIDNO201所示氨基酸序列的轻链可变区；(12)含有SEQIDNO202所示氨基酸序列的轻链可变区；(13)含有SEQIDNO203所示氨基酸序列的轻链可变区；(14)含有SEQIDNO204所示氨基酸序列的轻链可变区；和(15)含有SEQIDNO205所示氨基酸序列的轻链可变区。在另一个方面，本发明提供了具有选自如下(1)-(15)的轻链可变区以及选自如下(1)-(7)的重链可变区的抗体其中所述轻链可变区选自(1)含有SEQIDNO191所示氨基酸序列的轻链可变区；表3表3中的简写具有与上面相同的含义。表3表3中的简写具有与上面相同的含义。表3表3中的简写具有与上面相同的含义。优选地，本发明的抗体能够结合于含有磷脂酰肌醇蛋白聚糖3的氨基酸残基537-563序列的肽。更优选地，本发明的抗体不结合于含有磷脂酰肌醇蛋白聚糖3的氨基酸残基550-563序列的肽。优选地，本发明的抗体能够结合于含有磷脂酰肌醇蛋白聚糖3的氨基酸残基544-553序列的肽或含有磷脂酰肌醇蛋白聚糖3的氨基酸残基546-551序列的肽。在另一个方面，本发明提供了一种能够结合于与第二抗体能够结合的表位的抗体，其中所述第二抗体包括具有分别含有SEQIDNO123，124和125所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的重链可变区以及具有分别含有SEQIDNO143，144和158所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的轻链可变区。即，本发明的抗体能够与第二抗体竞争结合于GPC3。在一优选的实施方案中，本发明的抗体能够结合于磷脂酰肌醇蛋白聚糖3并具有抗磷脂酰肌醇蛋白聚糖3表达细胞的高CDC活性和/或具有抗磷脂酰肌醇蛋白聚糖3表达细胞的高ADCC活性。在另一个方面，本发明提供了编码本发明抗体的重链可变区或轻链可变区的多核苷酸。优选地，本发明的多核苷酸具有SEQIDNOs11-21，33-43，55-59，65-70和77-83所示的序列。在另一个方面，本发明提供了含有本发明抗体作为活性成分的细胞-生长抑制剂和抗癌药物。优选地，本发明的抗癌药物用于治疗肝细胞瘤。在另一方面，本发明提供了含有磷脂酰肌醇蛋白聚糖3的氨基酸残基524-563序列，磷脂酰肌醇蛋白聚糖3的氨基酸残基537-563序列，磷脂酰肌醇蛋白聚糖3的氨基酸残基544-553序列或磷脂酰肌醇蛋白聚糖3的氨基酸残基546-551的氨基酸序列的肽。图1显示了抗-GPC3抗体与CHO细胞的结合活性，CHO细胞表达全长的GPC3，HepG2和HuH-7，其通过流式细胞术进行评价。M1E7(实线)和M11F1(虚线)分别以5μg/mL的浓度使用。图2为显示通过竞争性ELISA对表位进行分类的结果的表。抗生物素酰化抗-GPC3抗体的结合的竞争性抑制的程度用百分比表示。根据竞争性抑制图谱将表位归类为a至e五个组。图3显示了通过Western印迹法评价抗-GPC3抗体是否结合于GPC3核心蛋白的40kDa可溶性形式的N-末端片段或其30kDa的C-末端片段的结果。发现L9G11结合于N-末端片段而M3C11结合于C-末端片段。图4显示了通过夹心ELISA检测GPC3的分泌形式存在于HepG2的培养上清液中的结果。强烈地检测到了结合于N-末端片段诸如M6B1、M18D4或M19B11的抗体的组合，且没有强烈地检测到结合于C-末端片段诸如M3C11、M13B3或M3B8的抗体。图5显示了使用抗-GPC3抗体的HepG2的培养上清液的免疫沉降以及GPC3分泌形式的检测结果。培养基作为对照(泳道1和3)且HepG2的培养上清液(泳道2和4)利用M1E7(泳道1和2)和M10D2(泳道3和4)被免疫沉降。通过结合于N-末端片段的M10D2检测分泌的GPC3。图6显示了通过Western印迹法利用GPC3的C-末端肽和GST的融合蛋白分析结合于GPC3的C-末端片段的抗体的表位的结果。GPC3核心蛋白的可溶性形式(泳道1)，GST(泳道2)，GC-1(泳道3)，GC-2(泳道4)，GC-3(泳道5)，GC-4(泳道6)和GC-5(泳道7)在还原条件下进行SDS电泳，并利用M3C11和M11F1通过Western印迹法进行检测。图7显示了评价抗-GPC3小鼠-人嵌合抗体对表达GPC3的CHO细胞的CDC活性的结果。图8显示了评价抗-GPC3小鼠-人嵌合抗体对表达GPC3的CHO细胞和HepG2的ADCC活性的结果。图9显示了利用获自效应细胞的小鼠骨髓评价GC33对人肝癌细胞系，HuH-7的ADCC活性的结果。图10显示了评价GC33抗体对用人肝细胞瘤移植的小鼠模型的抗肿瘤活性的结果。图11显示了评价小鼠-人嵌合抗体GC33对表达GPC3的CHO细胞的CDC活性的结果。图12显示了评价小鼠-人嵌合抗体GC33对HepG2的ADCC活性的结果。图13显示了用于分析GC33表位制备的GST-融合蛋白所包含的GPC3-衍生序列(GC-4，5，6，7，8，9，11，12，13和14)。图14显示了通过SDS-PAGE在还原条件下分离GST，GC-7，8，9，11，12，13和14后利用GC33进行Western印迹的结果。图15显示了通过ELISA评价人源化GC33对GPC3的结合活性的结果。图16显示了概括同种型的抗体组以及对获自用GPC3的可溶形式免疫的小鼠的克隆进行ELISA，BIAcore，FACS和表位分析和免疫沉淀试验的结果。图17显示了概括了同种型以及对获自用GC-3免疫的小鼠的克隆进行ELISA，BIAcore，FACS和表位分析的结果的抗体组。图18显示了通过ELISA评价修饰的抗体对GPC3核心蛋白的可溶性形式的结合活性的结果。用除了Cys和Met之外的17种氨基酸中的任一种取代位于人源化GC33轻链可变区中的CDR1内的Gly34。图19显示了评价小鼠-人嵌合抗体GC33，M3C11和M1E7对表达全长GPC3的CHO细胞的CDC活性的结果。图20显示了评价小鼠-人嵌合抗体GC33，M3C11和M1E7对表达全长GPC3的人肝细胞瘤细胞系SK-03的ADCC活性的结果。发明详述抗体本发明提供了如下(I)至(XI)中描述的抗体。(I)包括具有含有下列SEQIDNOs(1)至(12)任一项中所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的重链可变区的抗体(1)SEQIDNOs123，124和125(GC33)，(2)SEQIDNOs109，110和111(M11F1)，(3)SEQIDNOs106，107和108(M3B8)，(4)SEQIDNOs132，133和134(GC199)，(5)SEQIDNOs106，135和136(GC202)，(6)SEQIDNOs126，127和128(GC179)，(7)SEQIDNOs129，130和131(GC194)，(8)SEQIDNOs103，104和105(M13B3)，(9)SEQIDNOs118，121和122(L9G11)，(10)SEQIDNOs115，116和117(M6B1)，(11)SEQIDNOs112，113和114(M5B9)，以及(12)SEQIDNOs118，119和120(M10D2)。在(1)至(12)所述的抗体中，优选(1)至(8)中所述的抗体，更优选(1)至(5)中所述的抗体，且尤其优选(1)中所述的抗体。(1)至(8)中所述的抗体识别磷脂酰肌醇蛋白聚糖3的C-末端肽(含有磷脂酰肌醇蛋白聚糖3的第374个氨基酸至第580个氨基酸的肽)；且可作为治疗抗体。此外，(9)至(12)中所述的抗体识别磷脂酰肌醇蛋白聚糖3的N-末端肽(含有磷脂酰肌醇蛋白聚糖3的第1个氨基酸至第373个氨基酸的肽)；且可作为诊断抗体。(II)包括具有含有下列SEQIDNOs(1)至(13)任一项中所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的轻链可变区的抗体(1)SEQIDNOs143，144和158(GC33)，(2)SEQIDNOs143，144和145(M11F1)，(3)SEQIDNOs140，141和142(M3B8)，(4)SEQIDNOs167，168和169(GC199)，(5)SEQIDNOs170，144和171(GC202)，(6)SEQIDNOs159，160和161(GC179)，(7)SEQIDNOs162，147和163(GC194(1))，(8)SEQIDNOs164，165和166(GC194(2))，(9)SEQIDNOs137，138和139(M13B3)，(10)SEQIDNOs155，156和157(L9G11)，(11)SEQIDNOs149，150和151(M6B1)，(12)SEQIDNOs146，147和148(M5B9)，以及(13)SEQIDNOs152，153和154(M10D2)。在(1)至(13)所述的抗体中，优选(1)至(8)中所述的抗体，更优选(1)至(5)中所述的抗体，且尤其优选(1)中所述的抗体。(1)至(8)中所述的抗体识别磷脂酰肌醇蛋白聚糖3的C-末端肽(含有磷脂酰肌醇蛋白聚糖3的第374个氨基酸至第580个氨基酸的肽)；且可作为治疗抗体。此外，(9)至(13)中所述的抗体识别磷脂酰肌醇蛋白聚糖3的N-末端肽(含有磷脂酰肌醇蛋白聚糖3的第1个氨基酸至第373个氨基酸的肽)；且可作为诊断抗体。(III)选自下面(1)至(13)所述抗体的抗体(1)包括具有含有SEQIDNO123，124和125所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的重链可变区以及具有含有SEQIDNO143，144和158所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的轻链可变区的抗体(GC33)；(2)包括具有含有SEQIDNO109，110和111所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的重链可变区以及具有含有SEQIDNO143，144和145所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的轻链可变区的抗体(M11F1)；(3)包括具有含有SEQIDNO106，107和108所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的重链可变区以及具有含有SEQIDNO140，141和142所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的轻链可变区的抗体(M3B8)；(4)包括具有含有SEQIDNO132，133和134所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的重链可变区以及具有含有SEQIDNO167，168和169所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的轻链可变区的抗体(GC199)；(5)包括具有含有SEQIDNO106，135和136所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的重链可变区以及具有含有SEQIDNO170，144和171所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的轻链可变区的抗体(GC202)；(6)包括具有含有SEQIDNO126，127和128所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的重链可变区以及具有含有SEQIDNO159，160和161所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的轻链可变区的抗体(GC179)；(7)包括具有含有SEQIDNO129，130和131所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的重链可变区以及具有含有SEQIDNO162，147和163所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的轻链可变区的抗体(GC194(1))；(8)包括具有含有SEQIDNO129，130和131所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的重链可变区以及具有含有SEQIDNO164，165和166所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的轻链可变区的抗体(GC194(2))；(9)包括具有含有SEQIDNO103，104和105所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的重链可变区以及具有含有SEQIDNO137，138和139所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的轻链可变区的抗体(M13B3)；(10)包括具有含有SEQIDNO118，121和122所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的重链可变区以及具有含有SEQIDNO155，156和157所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的轻链可变区的抗体(L9G11)；(11)包括具有含有SEQIDNO115，116和117所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的重链可变区以及具有含有SEQIDNO149，150和151所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的轻链可变区的抗体(M6B1)；(12)包括具有含有SEQIDNO112，113和114所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的重链可变区以及具有含有SEQIDNO146，147和148所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的轻链可变区的抗体(M5B9)；(13)包括具有含有SEQIDNO118，119和120所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的重链可变区以及具有含有SEQIDNO152，153和154所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的轻链可变区的抗体(M10D2)；在(1)至(13)所述的抗体中，优选(1)至(8)中所述的抗体，更优选(1)至(5)中所述的抗体，且尤其优选(1)中所述的抗体。(1)至(8)中所述的抗体识别磷脂酰肌醇蛋白聚糖3的C-末端肽(含有磷脂酰肌醇蛋白聚糖3的第374个氨基酸至第580个氨基酸的肽)；且可作为治疗抗体。此外，(9)至(13)中所述的抗体识别磷脂酰肌醇蛋白聚糖3的N-末端肽(含有磷脂酰肌醇蛋白聚糖3的第1个氨基酸至第373个氨基酸的肽)；且可作为诊断抗体。(IV)具有下列(1)至(7)任一项所述重链可变区的抗体(1)包括SEQIDNO84所示氨基酸序列的重链可变区(GC33VHver.a)；(2)包括SEQIDNO85所示氨基酸序列的重链可变区(GC33VHver.c)；(3)包括SEQIDNO86所示氨基酸序列的重链可变区(GC33VHver.f)；(4)包括SEQIDNO87所示氨基酸序列的重链可变区(GC44VHver.h)；(5)包括SEQIDNO88所示氨基酸序列的重链可变区(GC55VHver.i)；(6)包括SEQIDNO89所示氨基酸序列的重链可变区(GC66VHver.j)；和(7)包括SEQIDNO90所示氨基酸序列的重链可变区(GC77VHver.k)。(1)至(7)所述的抗体中，尤其优选的是(2)至(7)所述的抗体。(V)具有含有SEQIDNO90所示氨基酸序列的轻链可变区的抗体(GC33VLver.a)。(VI)选自下面(1)至(7)所述抗体的抗体(1)具有含有SEQIDNO84所示氨基酸序列的重链可变区(GC33VHver.a)和含有SEQIDNO92所示氨基酸序列的轻链可变区(GC33VLver.a)的抗体，(2)具有含有SEQIDNO85所示氨基酸序列的重链可变区(GC33VHver.c)和含有SEQIDNO92所示氨基酸序列的轻链可变区(GC33VLver.a)的抗体，(3)具有含有SEQIDNO86所示氨基酸序列的重链可变区(GC33VHver.f)和含有SEQIDNO92所示氨基酸序列的轻链可变区(GC33VLver.a)的抗体，(4)具有含有SEQIDNO87所示氨基酸序列的重链可变区(GC33VHver.h)和含有SEQIDNO92所示氨基酸序列的轻链可变区(GC33VLver.a)的抗体，(5)具有含有SEQIDNO88所示氨基酸序列的重链可变区(GC33VHver.i)和含有SEQIDNO92所示氨基酸序列的轻链可变区(GC33VLver.a)的抗体，(6)具有含有SEQIDNO89所示氨基酸序列的重链可变区(GC33VHver.j)和含有SEQIDNO92所示氨基酸序列的轻链可变区(GC33VLver.a)的抗体，和(7)具有含有SEQIDNO90所示氨基酸序列的重链可变区(GC33VHver.k)和含有SEQIDNO92所示氨基酸序列的轻链可变区(GC33VLver.a)的抗体。(1)至(7)所述的抗体中，尤其优选的是(2)至(7)所述的抗体。(VII)下列(15)至(7)任一项所述的抗体(1)包括具有含有SEQIDNOs174，144和158所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的轻链可变区的抗体，(2)包括具有含有SEQIDNOs175，144和158所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的轻链可变区的抗体，(3)包括具有含有SEQIDNOs176，144和158所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的轻链可变区的抗体，(4)包括具有含有SEQIDNOs177，144和158所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的轻链可变区的抗体，(5)包括具有含有SEQIDNOs178，144和158所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的轻链可变区的抗体，(6)包括具有含有SEQIDNOs179，144和158所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的轻链可变区的抗体，(7)包括具有含有SEQIDNOs180，144和158所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的轻链可变区的抗体，(8)包括具有含有SEQIDNOs181，144和158所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的轻链可变区的抗体，(9)包括具有含有SEQIDNOs182，144和158所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的轻链可变区的抗体，(10)包括具有含有SEQIDNOs183，144和158所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的轻链可变区的抗体，(11)包括具有含有SEQIDNOs184，144和158所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的轻链可变区的抗体，(12)包括具有含有SEQIDNOs185，144和158所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的轻链可变区的抗体，(13)包括具有含有SEQIDNOs186，144和158所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的轻链可变区的抗体，(14)包括具有含有SEQIDNOs187，144和158所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的轻链可变区的抗体，和(15)包括具有含有SEQIDNOs188，144和158所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的轻链可变区的抗体。(1)至(15)所述的抗体中，优选(15)中所述的抗体。(VIII)下列(1)至(15)任一项所述的抗体(1)包括具有含有SEQIDNOs123，124和125所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的重链可变区以及具有含有SEQIDNO174，144和158所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的轻链可变区的抗体，(2)包括具有含有SEQIDNOs123，124和125所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的重链可变区以及具有含有SEQIDNO175，144和158所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的轻链可变区的抗体，(3)包括具有含有SEQIDNOs123，124和125所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的重链可变区以及具有含有SEQIDNO176，144和158所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的轻链可变区的抗体，(4)包括具有含有SEQIDNOs123，124和125所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的重链可变区以及具有含有SEQIDNO177，144和158所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的轻链可变区的抗体，(5)包括具有含有SEQIDNOs123，125和125所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的重链可变区以及具有含有SEQIDNO178，155和158所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的轻链可变区的抗体，(6)包括具有含有SEQIDNOs123，124和125所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的重链可变区以及具有含有SEQIDNO179，144和158所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的轻链可变区的抗体，(7)包括具有含有SEQIDNOs123，124和125所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的重链可变区以及具有含有SEQIDNO180，144和158所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的轻链可变区的抗体，(8)包括具有含有SEQIDNOs123，124和125所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的重链可变区以及具有含有SEQIDNO181，144和158所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的轻链可变区的抗体，(9)包括具有含有SEQIDNOs123，124和125所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的重链可变区以及具有含有SEQIDNO182，144和158所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的轻链可变区的抗体，(10)包括具有含有SEQIDNOs123，124和125所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的重链可变区以及具有含有SEQIDNO183，144和158所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的轻链可变区的抗体，(11)包括具有含有SEQIDNOs123，124和125所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的重链可变区以及具有含有SEQIDNO184，144和158所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的轻链可变区的抗体，(12)包括具有含有SEQIDNOs123，124和125所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的重链可变区以及具有含有SEQIDNO185，144和158所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的轻链可变区的抗体，(13)包括具有含有SEQIDNOs123，124和125所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的重链可变区以及具有含有SEQIDNO186，144和158所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的轻链可变区的抗体，(14)包括具有含有SEQIDNOs123，124和125所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的重链可变区以及具有含有SEQIDNO187，144和158所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的轻链可变区的抗体，和(15)包括具有含有SEQIDNOs123，124和125所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的重链可变区以及具有含有SEQIDNO188，144和158所示氨基酸序列的CDRs1，2和3的轻链可变区的抗体。(1)至(15)所述的抗体中，优选(15)中所述的抗体。(IX)下列(1)至(15)任一项所述的抗体(1)具有含有SEQIDNO191所示氨基酸序列的轻链可变区的抗体，(2)具有含有SEQIDNO192所示氨基酸序列的轻链可变区的抗体，(3)具有含有SEQIDNO193所示氨基酸序列的轻链可变区的抗体，(4)具有含有SEQIDNO194所示氨基酸序列的轻链可变区的抗体，(5)具有含有SEQIDNO195所示氨基酸序列的轻链可变区的抗体，(6)具有含有SEQIDNO196所示氨基酸序列的轻链可变区的抗体，(7)具有含有SEQIDNO197所示氨基酸序列的轻链可变区的抗体，(8)具有含有SEQIDNO198所示氨基酸序列的轻链可变区的抗体，(9)具有含有SEQIDNO199所示氨基酸序列的轻链可变区的抗体，(10)具有含有SEQIDNO200所示氨基酸序列的轻链可变区的抗体，(11)具有含有SEQIDNO201所示氨基酸序列的轻链可变区的抗体，(12)具有含有SEQIDNO202所示氨基酸序列的轻链可变区的抗体，(13)具有含有SEQIDNO203所示氨基酸序列的轻链可变区的抗体，(14)具有含有SEQIDNO204所示氨基酸序列的轻链可变区的抗体，(15)具有含有SEQIDNO205所示氨基酸序列的轻链可变区的抗体，(1)至(15)所述的抗体中，优选(15)所述的抗体。(X)具有选自下面(1)至(15)所述轻链可变区以及(1)至(7)所述重链可变区的抗体(1)含有SEQIDNO191所示氨基酸序列的轻链可变区，(2)含有SEQIDNO192所示氨基酸序列的轻链可变区，(3)含有SEQIDNO193所示氨基酸序列的轻链可变区，(4)含有SEQIDNO194所示氨基酸序列的轻链可变区，(5)含有SEQIDNO195所示氨基酸序列的轻链可变区，(6)含有SEQIDNO196所示氨基酸序列的轻链可变区，(7)含有SEQIDNO197所示氨基酸序列的轻链可变区，(8)含有SEQIDNO198所示氨基酸序列的轻链可变区，(9)含有SEQIDNO199所示氨基酸序列的轻链可变区，(10)含有SEQIDNO200所示氨基酸序列的轻链可变区，(11)含有SEQIDNO201所示氨基酸序列的轻链可变区，(12)含有SEQIDNO202所示氨基酸序列的轻链可变区，(13)含有SEQIDNO203所示氨基酸序列的轻链可变区，(14)含有SEQIDNO204所示氨基酸序列的轻链可变区，和(15)含有SEQIDNO205所示氨基酸序列的轻链可变区，且重链可变区选自下述(1至(7)(1)含有SEQIDNO84所示氨基酸序列的重链可变区，(2)含有SEQIDNO85所示氨基酸序列的重链可变区，(3)含有SEQIDNO86所示氨基酸序列的重链可变区，(4)含有SEQIDNO87所示氨基酸序列的重链可变区，(5)含有SEQIDNO88所示氨基酸序列的重链可变区，(6)含有SEQIDNO89所示氨基酸序列的重链可变区，和如上所述抗体中，抗体优选地具有含有SEQIDNO205所示氨基酸序列的轻链可变区和含有SEQIDNO90所示氨基酸序列的重链可变区。(XI)抗体，其中上述(I)至(X)任一项的氨基酸序列中的一或多个氨基酸已被取代、缺失、添加和/或插入，且其具有相当于任一(I)至(X)所述抗体的活性。在本发明中，相当于(I)至(X)任一项所述抗体的活性是指与人磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗体的结合活性或对表达人磷脂酰肌醇蛋白聚糖3的细胞的细胞毒性活性(例如，HepG2或表达人磷脂酰肌醇蛋白聚糖3的重组CHO细胞，等)是相当的。人源化抗体本发明抗体的一个优选实施方案是结合于磷脂酰肌醇蛋白聚糖3的人源化抗体。人源化抗体可通过利用已知的方法制备。人源化抗体也称为改造的人抗体，其通过将非-人哺乳动物的抗体例如小鼠抗体的互补决定区(CDR)移植到人抗体的CDR中进行制备。制备这种抗体的常规重组DNA技术也是已知的(参见欧洲专利申请EP125023和国际专利申请WO96/02576)。具体地，例如，在其中CDR获自小鼠抗体的情况下，通过PCR方法利用几个寡核苷酸作为引物来合成被设计用于将小鼠抗体的CDRs与人抗体的框架区(FR)连接的DNA序列，引物已被制备使得具有与CDR和FR的两个末端彼此重叠的部分(参见国际专利申请WO98/13388中所述的方法)。对于与CDR相连接的人抗体的框架区而言，选择允许互补决定区形成良好的抗原结合位点的那些。必要时，可取代抗体可变区的框架区中的氨基酸使得改造的人抗体的互补决定区可形成合适的抗原结合位点(Sato，K.等，CancerRes.(1993)53，851-856)。人抗体的C区域可用作嵌合抗体或人源化抗体的C区域，例如，Cγ1，Cγ2，Cγ3和Cγ4可用于H链中，并且Cκ和Cλ可用于L链中。人抗体的C区也可被修饰以提高抗体的稳定性或其产量。用于人源化的人抗体可以是人抗体的任意同种型，例如，IgG，IgM，IgA，IgE和IgD，优选为IgG，更优选为IgG1或IgG3，且尤其优选为IgG1。当抗体用作具有高细胞毒性活性的抗癌药物时，本发明的IgG1是有效的(Chemicalimmunology，6588(1997))。此外，制备人源化抗体后，可变区(例如，FR)或保守区中的氨基酸可以被另一个氨基酸取代。人源化抗体中CDR的来源没有特别限制，且CDR可获自任意的动物。例如，可以利用获自小鼠抗体、大鼠抗体、兔抗体、骆驼抗体等的序列。优选小鼠抗体的CDR序列。对于抗体的人源化而言，当其保持原始抗体激动剂活性时通常难以进行人源化。然而在本发明中，成功获得了具有相当于原始小鼠抗体的激动剂活性的人源化抗体。由于人源化抗体在人体中的抗原性降低了，因此可用于将其施用于人用于治疗目的。本发明中人源化抗-磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗体的优选实例包括，例如，具有SEQIDNO84(GC33VHver.a)，SEQIDNO85(GC33VHver.c)，SEQIDNO86(GC33VHver.f)，SEQIDNO87(GC33VHver.h)，SEQIDNO88(GC33VHver.i)，SEQIDNO89(GC33VHver.j)或SEQIDNO90(GC33VHver.k)所述的重链可变区的抗体或具有SEQIDNO92所示轻链可变区(GC33VLver.a)的抗体。尤其优选的实例包括具有SEQIDNO84(GC33VHver.a)，SEQIDNO85(GC33VHver.c)，SEQIDNO86(GC33VHver.f)，SEQIDNO87(GC33VHver.h)，SEQIDNO88(GC33VHver.i)，SEQIDNO89(GC33VHver.j)或SEQIDNO90(GC33VHver.k)所示重链可变区和具有SEQIDNO92所示轻链可变区(GC33VLver.a)的抗体。此外，人源化抗-磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗体的优选实例包括具有含有SEQIDNO90所示氨基酸序列的重链可变区和含有SEQIDNO205所示氨基酸序列的轻链可变区的抗体。本发明抗体的优选实施方案为结合于下列(1)至(8)任一项阐述的抗体结合的表位的抗体(1)含有具有SEQIDNO62所示氨基酸序列的重链可变区和具有SEQIDNO73所示氨基酸序列的轻链可变区的抗体(GC33)，(2)含有具有SEQIDNO26所示氨基酸序列的重链可变区和具有SEQIDNO48所示氨基酸序列的轻链可变区的抗体(M11F1)，(3)含有具有SEQIDNO25所示氨基酸序列的重链可变区和具有SEQIDNO47所示氨基酸序列的轻链可变区的抗体(M3B8)，(4)含有具有SEQIDNO60所示氨基酸序列的重链可变区和具有SEQIDNO71所示氨基酸序列的轻链可变区的抗体(GC199)，(5)含有具有SEQIDNO61所示氨基酸序列的重链可变区和具有SEQIDNO72所示氨基酸序列的轻链可变区的抗体(GC202)，(6)含有具有SEQIDNO63所示氨基酸序列的重链可变区和具有SEQIDNO74所示氨基酸序列的轻链可变区的抗体(GC179)，(7)含有具有SEQIDNO64所示氨基酸序列的重链可变区和具有SEQIDNO75所示氨基酸序列的轻链可变区的抗体(GC194(1))，和(8)含有具有SEQIDNO64所示氨基酸序列的重链可变区和具有SEQIDNO76所示氨基酸序列的轻链可变区的抗体(GC294(2)。更优选为结合于(1)至(5)任一项所述抗体结合的表位的抗体，且尤其优选为结合于(1)所述抗体结合的表位的抗体。结合于上述任一项抗体结合的表位的抗体是有用的，因为其具有尤其高的细胞毒性。(1)至(7)任一项所述的抗体结合于人磷脂酰肌醇蛋白聚糖3的第524氨基酸到580氨基酸的区域。尤其是，其结合于第524氨基酸到第563氨基酸的区域。(1)至(5)任一项所述的抗体结合于人磷脂酰肌醇蛋白聚糖3的第537氨基酸到第563氨基酸的区域。(1)所述的抗体结合于人磷脂酰肌醇蛋白聚糖3的第544氨基酸到第553氨基酸的区域。尤其是，其结合于第546氨基酸到第551氨基酸的区域。识别上述表位的抗体具有高细胞毒性，因此可用于治疗诸如癌症的疾病。尤其是，结合于从第546氨基酸到第551氨基酸的区域的抗体由于其具有特别高的细胞毒性因此是有用的。因此，本发明包括结合于由人磷脂酰肌醇蛋白聚糖3的第524氨基酸至第580氨基酸的区域，优选第524氨基酸至第563氨基酸的区域，更优选地537氨基酸至第563氨基酸的区域，进一步优选地第544氨基酸至第553氨基酸的区域，特别优选地第546氨基酸到第551氨基酸的区域的表位的抗体。本发明另一个优选的实施方案是识别人磷脂酰肌醇蛋白聚糖3的第524个氨基酸到第563个氨基酸的区域且不识别第537氨基酸到第563氨基酸的区域的抗体。本发明进一步优选的实施方案是识别人磷脂酰肌醇蛋白聚糖3的第537个氨基酸到等563个氨基酸的区域且不识别第550氨基酸到第563氨基酸的区域的抗体。可通过本领域技术人员已知的方法，例如，通过下述实施例所述的Western印迹法进行抗体识别的表位的分析。可通过本领域技术人员公知的方法来获得识别上述区域作为表位的抗体。例如，其可通过制备含有基于人磷脂酰肌醇蛋白聚糖3的氨基酸序列的靶区域的氨基酸序列的肽以及利用肽作为免疫原制备抗体来获得，或通过常规方法制备抗体并测定获得抗体识别的表位，然后选择识别靶表位的抗体来获得。本发明抗-磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗体的优选实例为对表达磷脂酰肌醇蛋白聚糖3的细胞具有高ADCC活性的抗体或具有高CDC活性的抗体。这里所述的术语“高ADCC活性”或“高CDC活性”是指本发明的抗体比已知的抗-磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗体具有更高的ADCC活性或更高的CDC活性。已知的磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗体包括例如，国际专利申请WO2004/22739中所述的M3C11和M1E07。ADCC活性或CDC活性可通过本领域技术人员公知的方法进行测定。例如，可通过铬释放实验测定。用于测定ADCC活性的铬释放实验的具体条件没有特别限制，然而，例如可以利用下述实施例中所述的条件进行测定。表达磷脂酰肌醇蛋白聚糖3的细胞的实例包括，例如肝细胞瘤细胞系诸如HepG2，在其中插入了磷脂酰肌醇蛋白聚糖3编码基因的CHO细胞系等等。为测定ADCC活性，优选使用HepG2细胞系，且为测定CDC活性，优选使用表达GPC3的重组CHO细胞系。表达GPC3的重组CHO细胞系可以通过任意方法制备，其可以通过例如下述实施例所述方法进行制备。在抗-磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗体用作抗癌药物的情况下，优选其与含有具有SEQIDNO62所示氨基酸序列的重链可变区和具有SEQIDNO73所示氨基酸序列的轻链可变区的抗体(GC33)具有相同水平的ADCC活性。在抗-磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗体用作抗癌药物的情况下，优选其与含有具有SEQIDNO62所示氨基酸序列的重链可变区和具有SEQIDNO73所示氨基酸序列的轻链可变区的抗体(GC33)具有相同水平的CDC活性。此外，本发明包括具有磷脂酰肌醇蛋白聚糖3高结合活性的抗体。在本发明中，抗体对磷脂酰肌醇蛋白聚糖3的结合活性可通过利用本领域技术人员公知的方法进行测定。例如，可通过利用与BIAcore的表面等离子体共振进行测定。具体而言，磷脂酰肌醇蛋白聚糖3蛋白固定在传感器芯片上与抗体反应，并且可将抗体和磷脂酰肌醇蛋白聚糖3之间的相互作用计算为来自测定值的反应速度常数。此外，对于评价结合活性而言，可利用酶联免疫吸附测定(ELISA)，酶免疫分析法(EIA)，放射免疫测定法(RIA)或荧光抗体技术。例如，当利用酶免疫分析法时，将含有待测抗体的样品，例如，产生待测抗体的细胞培养上清液或纯化的抗体添加到已经涂布有与此待测抗体结合的抗原的平板上。然后，添加用酶诸如碱性磷酸酶标记的二级抗体，并且温育和冲洗该平板。然后，添加酶底物诸如p-硝基苯基磷酸盐并测定吸光度，由此可评价抗原结合活性。结合活性的上限没有特别限制。然而，例如，上限可被限定在本领域技术人员能够确定的技术上合理的范围之内。可以理解该技术上合理的范围可随技术的发展而进一步扩大。此外，在本发明中，待脱去酰氨基的氨基酸或邻近于待脱去酰氨基氨基酸的氨基酸可被另一个氨基酸取代，以例如抑制脱酰氨作用来增加抗体的稳定性。待脱去酰氨基的氨基酸包括，天冬酰胺和谷氨酰胺，优选天冬酰胺。邻近于天冬酰胺的氨基酸没有特别的限制且可以是任意的氨基酸。众所周知，天冬酰胺-甘氨酸序列对脱酰氨作用尤其敏感，因此，甘氨酸是优选作为邻近于天冬酰胺的氨基酸。用于取代的氨基酸没有特别的限制且可以是除了天冬酰胺和谷氨酰胺之外的任意氨基酸。优选为除了缬氨酸和脯氨酸之外的氨基酸。因此，在本发明中，当其中抗体被脱去酰氨基时，优选用除了天冬酰胺，谷氨酰胺，缬氨酸和脯氨酸之外的氨基酸进行取代。可参考例如国际专利申请WO03/057881进行通过氨基酸取代抑制脱酰氨作用。进行氨基酸取代来抑制脱酰氨作用时，优选保持取代之前的抗原结合活性。抗体稳定化的另一个实施方案包括用另一个氨基酸取代谷氨酸。此外，在本发明中，发现当抗体重链的第6个氨基酸为谷氨酸时，抗体可通过用谷氨酰胺取代谷氨酸被显著地稳定化。因此，本发明也涉及一种通过取代用谷氨酰胺取代抗体重链的第6位的谷氨酸来稳定抗体的方法。抗体的氨基酸编号是本领域技术人员公知的(例如，Kabat，E.A.等，″SequencesofProteinsofImmunologicalInterest″，USDept.HealthandHumanServices1983)。本发明的抗体可以是结合抗体，其中抗体与多种分子诸如聚乙二醇(PEG)、放射性物质和毒素相结合。这种结合抗体可通过对上述获得的抗体进行化学修饰来制备。现有技术中已形成了修饰抗体的方法。本发明的抗体包括这种结合的抗体。本发明的抗体也可以是双特异性抗体(参见，例如，JournalofImmunology，1994，152，5368-5374)。双特异性抗体可识别磷脂酰肌醇蛋白聚糖3和其它抗原，或可以识别GPC3分子上的不同表位。此外，本发明的抗体可携带融合于抗体的N-或C-末端的某些蛋白(ClinicalCancerResearch，2004，10，1274-1281)。本领域技术人员可方便地选择融合于抗体的蛋白。此外，本发明的抗体包括具有增强细胞毒性的抗体。具有增强细胞毒性的抗体的实例包括缺少海藻糖的抗体，具有附着于其糖链的二等分N-乙酰基氨基葡萄糖(GlcNAc)的抗体，以及具有通过取代Fc区域中的一或多个氨基酸获得的改变的Fcγ受体结合活性的抗体。这种具有增强细胞毒性的抗体可通过本领域已知的方法制备。制备抗体的方法可通过本领域技术人员公知的方法来制备结合于磷脂酰肌醇蛋白聚糖3的抗体。例如，可基本利用已知方法如下所述制备产生单克隆抗体所杂交瘤。也就是说，通过利用磷脂酰肌醇蛋白聚糖3蛋白或表达磷脂酰肌醇蛋白聚糖3的细胞作为致敏性抗原根据常规免疫方法免疫哺乳动物来制备杂交瘤。通过常规的细胞融合方法将由此获得的免疫细胞与已知的亲本细胞融合，然后通过常规筛选方法选择产生单克隆抗体的细胞。具体而言，可如下所述制备单克隆抗体。首先，基于磷脂酰肌醇蛋白聚糖3基因/SEQIDNOs3和4所示的氨基酸序列获得磷脂酰肌醇蛋白聚糖3蛋白，将其用作致敏抗原来获得抗体。更具体地说，将编码磷脂酰肌醇蛋白聚糖3的基因序列插入已知的表达载体系统中，并用载体转化合适的宿主细胞，然后通过已知的方法由宿主细胞或培养上清液纯化目的人磷脂酰肌醇蛋白聚糖3蛋白。随后，将这些纯化的3蛋白用作致敏性抗原。或者，磷脂酰肌醇蛋白聚糖3的部分肽可用作致敏抗原。在这种情况下，也可以根据人磷脂酰肌醇蛋白聚糖3的氨基酸序列通过化学合成来获得部分肽。由本发明的抗-磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗体识别的磷脂酰肌醇蛋白聚糖3分子上的表位不局限于特定的表位。抗-磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗体可识别任意的表位，只要该表位存在于磷脂酰肌醇蛋白聚糖3分子上。因此，任意的片段也可用作用于产生本发明的抗-磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗体的抗原，只要其含有存在于磷脂酰肌醇蛋白聚糖3分子上的表位。用致敏性抗原免疫的哺乳动物没有特别的限制，但是优选地考虑其与用于细胞融合的亲本细胞的相容性进行选择。例如，通常使用啮齿类动物，诸如小鼠，大鼠和仓鼠，兔或猴。根据已知的方法用致敏性抗原免疫动物。例如，通过一般方法进行免疫，其中哺乳动物用致敏性抗原进行腹膜内或皮下注射。具体而言，致敏性抗原用合适量的PBS(磷酸缓冲盐水)、生理盐水等稀释或悬浮在其中，必要时与产物混合合适量的标准佐剂诸如Freund’s完全佐剂，然后乳化溶液以及每4到21天施用于哺乳动物若干次。此外，当用致敏性抗原免疫后还可以使用合适的载体。如上所述免疫哺乳动物，然后确定血清中目的抗体增加的水平。随后，由哺乳动物收集免疫细胞，然后用于细胞融合。尤其优选的免疫细胞为脾细胞。作为与上述免疫细胞融合的亲本配对细胞，使用哺乳动物的骨髓瘤细胞。在这里优选使用的骨髓瘤细胞细胞系的实例包括各种已知的细胞系诸如P3(P3x63Ag8.653)(J.Immnol.(1979)123，1548-1550)，P3x63Ag8U.1(CurrentTopicsinMicrobiologyandImmunology(1978)81，1-7)，NS-1(Kohler.G.和Milstein，C.Eur.J.Immunol.(1976)6，511-519)，MPC-11(Margulies.D.H.等，Cell(1976)8，405-415)，SP2/0(Shulman，M.等，Nature(1978)276，269-270)，FO(deSt.Groth，S.F.等，J.Immunol.Methods(1980)35，1-21)，S194(Trowbridge，I.S.J.Exp.Med.(1978)148，313-323)以及R210(Galfre，G.等，Nature(1979)277，131-133)。上述免疫细胞与骨髓瘤细胞的细胞融合可基本上根据已知的方法例如Kohler和Milstein等的方法来进行。(Kohler.G.和Milstein，C.，MethodsEnzymol.(1981)73，3-46)。更具体地，上述细胞融合在标准的营养培养液中例如细胞-融合促进剂的存在下来进行。作为细胞-融合促进剂，例如，使用聚乙二醇(PEG)，日本仙台病毒(HVJ)。如需要，可添加佐剂诸如二甲亚砜来进一步提高融合效率。免疫细胞与骨髓瘤细胞的比例可适当地选择。例如，优选免疫细胞的数量大于骨髓瘤细胞的数量1到10倍。用于上述细胞融合的培养液包括，例如，适于上述骨髓瘤细胞系生长的RPMI1640培养液或MEM培养液，或用于此类细胞培养的标准培养液。此外，血清补充物诸如胎牛血清(FCS)可用于此混合物中。如下所述进行细胞融合。在上述培养液中充分地混合预先确定量的上述免疫细胞和骨髓瘤细胞，添加已被预加热为约37℃的PEG(例如，具有约1000到6000的平均分子量)溶液(30到60％(w/v)的常规浓度)，然后混合溶液，由此形成了目的融合细胞(杂交瘤)。随后，依次添加合适的培养液，然后重复通过离心除去上清液的步骤来除去不利于杂交瘤生长的用于细胞融合等的试剂。通过在标准选择培养溶液诸如HAT培养液(一种含有次黄嘌呤，氨基蝶呤和胸腺嘧啶的培养液)中培养杂交瘤筛选由此获得的杂交瘤。将在上述HAT培养液进行的培养持续足以使得除了目的杂交瘤之外的细胞(未融合的细胞)死亡的一段时间(通常，几天至几周)。随后，进行标准极限稀释法来筛选产生目的抗体的单克隆的杂交瘤。除用抗原免疫非-人动物来获得杂交瘤的方法之外，具有磷脂酰肌醇蛋白聚糖3结合活性的目的人抗体还可以通过用磷脂酰肌醇蛋白聚糖3体外致敏人淋巴细胞，以及使致敏的淋巴细胞与具有永久分裂潜能的人骨髓瘤细胞融合来获得(参见JP-B-1-59878)。在另一方法中，将磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗原施用于具有所有人抗体基因的转基因动物来获得产生抗-磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗体的细胞，然后进行无限增殖，且可从无限增殖化的产生抗-磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗体的细胞获得磷脂酰肌醇蛋白聚糖3的人抗体(参见国际专利申请WO94/25585，WO93/12227，WO92/03918和WO94/02602)。由此制备的产生单克隆抗体的杂交瘤可在标准培养溶液中传代培养，或可以在液氮中长时间保藏。由杂交瘤获得单克隆抗体的方法的一个实例包括培养杂交瘤和根据标准方法由培养上清液获得单克隆抗体。另一方法包括将杂交瘤施用于与杂交瘤相容的哺乳动物来使其增殖，以及由腹水中获得单克隆抗体。前一方法适于获得高纯度抗体，而后一方法适于抗体的批量生产。通过遗传工程方法由杂交瘤克隆抗体基因、将基因插入到合适的载体中、将载体引入到宿主体内、然后使宿主产生重组抗体也可以制备重组抗体(例如，参见Vandamme，A.M.等，Eur.J.Biochem.(1990)192，767-775，1990)。具体地说，由产生抗-磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗体的杂交瘤分离编码抗-磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗体的可变(V)区的mRNA。通过已知的方法诸如胍超离心法(Chirgwin，J.M.等，Biochemistry(1979)18，5294-5299)或AGPC法(Chomczynski，P.等，Anal.Biochem.(1987)162，156-159)分离mRNA，且制备总RNA，然后利用mRNA纯化试剂盒(Pharmacia)等制备目的mRNA。此外还可以利用QuickPrepmRNA纯化试剂盒(Pharmacia)直接制备mRNA。利用逆转录酶从由此获得的mRNA合成抗体V区的cDNA。可利用AMV逆转录酶第一链cDNA合成试剂盒(SEIKAGAKUCORPORATION)等合成cDNA。此外，例如5′-AmpliFINDERRACE试剂盒(Clontech)，利用PCR的5′-RACE法(Frohman，M.A.等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA(1988)85，8998-9002，Belyavsky，A.等，NucleicAcidsRes.(1989)17，2919-2932)可用于合成和扩增cDNA。从由此获得的PCR产物纯化目的DNA片段，然后连接于载体DNA。由产物制备重组载体，然后将载体导入到Ecoli等中，并筛选菌落，由此制备目的重组载体。然后通过已知的方法诸如二脱氧核苷酸链终止法测定目的DNA的核苷酸序列。获得编码目的抗-磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗体的V区的DNA之后，将此DNA整合到含有编码目的抗体的恒定区(C区)的DNA的表达载体中。为产生本发明所用的抗-磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗体，将抗体基因整合到表达载体中使基因在包括例如增强子和启动子的基因表达调控区域的调控下表达。然后，用表达载体转化宿主细胞，由此使宿主表达抗体。可通过将编码H链的多核苷酸或编码L链的多核苷酸整合到表达载体中，然后同时用载体转化宿主细胞，或通过将编码H链和L链的多核苷酸整合到单个表达载体中，然后用载体转化宿主细胞来表达抗体基因(参见国际专利申请WO94/11523)。多核苷酸在另一个方面，本发明提供了编码本发明抗体的重链可变区或轻链可变区的多核苷酸。优选地，本发明的多核苷酸具有SEQIDNOs11-21，33-43，55-59，65-70和77-83任一所示的核苷酸序列。此外，与上述多核苷酸在严谨条件下杂交以及编码具有相当于本发明抗体活性的抗体的多核苷酸也在本发明的范围内。本发明的多核苷酸没有特别的限制，只要其编码本发明的抗体即可。其是由大量核苷酸，诸如脱氧核糖核酸(DNA)或核糖核酸(RNA)组成的聚合物。其可含有除了天然存在的碱基之外的碱基。本发明的多核苷酸可用于通过遗传工程方法来产生抗体。此外，本发明的多核苷酸可用作探针来筛选具有相当于本发明抗体的功能的抗体。也就是说，编码本发明的抗体的多核苷酸或其部分片段可用作探针，通过诸如杂交技术、基因扩增技术(例如，PCR)来获得在严谨条件下杂交于多核苷酸以及编码具有相当于本发明抗体的活性的抗体的DNA。此类DNA也包括在本发明的多核苷酸之内。杂交技术(Sambrook，J.等，MolecularCloning2nded.，9.47-9.58，ColdSpringHarborLab.Press，1989)是本领域技术人员公知的。杂交条件的实例包括，例如，低度严谨条件。低度严谨条件是，杂交后进行冲洗时，例如，42℃，0.1xSSC和0.1％SDS的条件，优选50℃，0.1xSSC和0.1％SDS的条件。更优选的杂交条件的实例包括，例如，高度严谨条件。高度严谨条件是，例如，65℃，5xSSC和0.1％SDS的条件。在这些条件下，可预期在较高温度下有效地获得具有高同源性的多核苷酸。顺便提及，有很多影响杂交严谨性的因素，诸如温度和盐的浓度，且本领域技术人员可通过适当地选择这些因素来获得类似的严谨性。由通过这种杂交技术和基因扩增方法获得的多核苷酸编码的本发明抗体的抗体功能等同物通常与抗体具有氨基酸序列的高度同源性。本发明的抗体也包括与本发明抗体功能等同以及与抗体的氨基酸序列具有高度同源性的抗体。高度同源性是指通常在氨基酸水平具有至少50％或更高同一性，优选75％或更高的同一性，更优选85％或更高的同一性，且进一步更优选95％或更高的同一性。为测定多肽的同源性，可使用在文献(Wilbur，W.J.和Lipman，D.J.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA(1983)80，726-730)中所描述的算法。本发明也提供了含有本发明多核苷酸的载体。此载体可用于制备本发明的抗体。至于本发明的载体，当E.coli用作宿主时，例如，其没有特别的限制只要其具有用于在E.coli中扩增以在大量的E.coli(例如，JM109，DH5α，或XL1Blue)中产生和扩增载体的″ori″，以及具有用于选择转化的E.coli的标记基因(例如，可通过药物诸如氨苄青霉素，四环素，卡那霉素或氯霉素鉴定的耐药基因)。载体的实例包括M13-系列载体，pUC-系列载体，pBR322，pBluescript，pCR-Script等等。此外，pGEM-T，pDIRECT以及pT7也可用于亚克隆和提取如上所述的cDNA和载体。对于本发明的载体而言，表达载体是尤其有用的。例如，用于在E.coli中表达的表达载体应具有上述在E.coli扩增的特性。此外，当Ecoli，诸如JM109，DH5α，HB101，或XL1-Blue被用作宿主细胞时，载体必需具有一个启动子，例如，lacZ启动子(Ward等，Nature(1989)341，544-546；FASEBJ.(1992)6，2422-2427)，araB启动子(Better等，Science(1988)240，1041-1043)，T7启动子等等，其可在E.coli中有效地表达目的产物。这种载体的实例包括pGEX-5X-1(Pharmacia)，“QIAexpress系统”(Qiagen)，pEGFP，pET(在这种情况下，宿主优选为表达T7RNA聚合酶的BL21)等，以及如上所述的载体。此外，载体也可含有用于多肽分泌的信号序列。对于用于蛋白分泌的信号序列，当其中多肽在E.coli的周质中产生时，可使用pelB信号序列(LeiS.P.等，J.Bacteriol(1987)169，4379)。可通过利用，例如，氯化钙法和电穿孔法将载体导入到宿主细胞中。除E.coli之外，例如，获自哺乳动物的表达载体(例如，pcDNA3(Invitrogen)和pEGF-BOS(NucleicAcidsRes.(1990)18(17)，p5322)，pEF和pCDM8)，获自昆虫细胞的表达载体(例如，“Bac-到-BAC杆状病毒表达系统”(GIBCOBRL)和pBacPAK8)，获自植物的表达载体(例如，pMH1和pMH2)，获自动物病毒的表达载体(例如，pHSV，pMV和pAdexLcw)，获自逆转录病毒的表达载体(例如，pZIPneo)，获自酵母的表达载体(例如，“Pichia表达试剂盒”(Invitrogen)，pNV11和SP-Q01)以及获自枯草芽孢杆菌的表达载体(例如，pPL608和pKTH50)可用作本发明的载体。为在动物细胞诸如CHO细胞，COS细胞，NIH3T3细胞等中表达载体，载体中必须具有细胞中表达所需的启动子，诸如SV40启动子(Mulligan等，Nature(1979)277，108)，MMTV-LTR启动子，EF1α启动子(Mizushima等，NucleicAcidsRes.(1990)18，5322)，CMV启动子等等，且更优选地具有用于选择转化细胞的标记基因(诸如可通过药物诸如新霉素或G418鉴定的耐药基因)。具有这种特性的载体实例包括，例如，pMAM，pDR2，pBK-RSV，pBK-CMV，pOPRSV和pOP13。此外，为在细胞稳定地表达基因和同时扩增基因拷贝数，将具有DHFR基因的载体(例如，pCHOI，等等)导入到缺乏该核酸合成途径的CHO细胞中来弥补该缺陷，并且用氨甲喋呤(MTX)扩增。使用此外，为了基因的瞬时表达，利用在染色体上具有表示SV40T抗原的基因的COS细胞用具有SV40复制起点的载体(诸如pcD)实现转化。作为复制起点，可以使用获自多形瘤病毒，腺病毒，牛乳头瘤病毒(BPV)等的复制起点。此外，为在宿主细胞系统中扩增基因的拷贝数，表达载体可包括，选择性标记，氨基苷转移酶(APH)基因，胸苷激酶(TK)基因，E.coli黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖基转移酶(Ecogpt)基因，二氢叶酸还原酶(dhfr)基因等等。为制备