专利名称：Cd34抗体包被支架的制备方法冠状动脉支架置入术后再狭窄一直是冠心病介入治疗研究中重中之重，其中以冠脉内支架药物涂层的研究尤为突出。本课题主要是针对现有药物涂层支架内皮修复时间过长，可能会过度抑制血管内皮细胞的自然生长，从而增加支架内血栓形成的风险提出的，目的是开发一种既可在支架外露时防止血栓形成，抑制内膜过度增生，又可促进内皮修复，防止再狭窄的新型支架。本课题采用高分子化学合成方法制备具有生物降解性和活性基团的聚乙二醇，脂肪族聚酯，聚氨基酸嵌段共聚物，并对金属血管支架表面进行化学处理，然后高分子接枝改性，采 用N-琥珀酰亚胺基-3- (2-吡啶二硫)-丙酸酯(STOP)方法制成内皮前体细胞CD34抗体洗脱支架。
I、生物可降解高分子与金属表面的接枝方法2、⑶34抗体支架的制备方法及体外再内皮化图I是经过球囊扩张后支架拐角处无裂纹、支架内表面涂层无撕裂及翘起的涂层支架扩张过程图。图2是化学偶联与物理吸附携带抗体稳定性比较的抗体释放曲线图 316L不锈钢裸支架_(美国强生公司)
普通光学显微镜(0LYMPAS，日本)
电子显微镜(0LYMPAS,日本)
台式低温高速离心机(日本HITACHI)
聚乙二醇(MPEG)(Aldrich公司)
丙交酯(LLA)(PURAC Biochem bv Gorinchem)
AG-2000A型材料万能试验机(日本岛津公司生产)
DSA10MK2型接触角测试仪(KRUSS)
原子力显微镜(国产)优良生物相容性的高分子聚乙二醇一聚乳酸一聚谷氨酸共聚物试样的合成、筛选、药物释放和支架涂层由长春市应用化学研究所协同协作。
I. 2实验方法I. 2. I支架表面改性将316L支架用强酸性水溶液处理使金属表面生成活性羟基，即可得到表面高分子接枝改性的金属血管支架。该支架可大大增加与涂敷高分子之间的强度。I. 2. 2支架表面脱脂将支架材料放入丙酮溶液超声洗涤3小时，去除表面的油污和杂质后晾干备用。I. 2. 3浸溃提拉法涂层
用注射器取一定浓度的高分子聚合物溶液浇铸于直径7. 5cm的培养皿中，控制升温度l°c /min。采用浸溃提拉法在材料表面涂膜。然后放入50C的烘箱中真空干燥24小时。I. 2. 4 接枝(I.将NH2-CH3-CH3-SH配成I %的乙醇溶液，然后将清洗过的支架放入乙醇溶液里，在室温下发生反应，通过巯基乙醇和不锈钢表面络合在表面引入羟基，然后用其表面的羟基引发环氧乙烷开环聚合，在表面接枝PEG，然后用PEG表面的羟基引发丙交酯聚合，这样就得到表面接枝PEG-PLLA两嵌段聚合物的支架材料。(2.然后再将两嵌段共聚物的端羟基转化为端氨基(PEG-PLLA-Nh2)；用PEG-PLLA-Nh2作为大分子引发剂开环聚合由谷氨酸苄酯制得的a-氨基酸-N-羧酸酐(NCA)得到了聚乙二醇-聚乳酸-聚谷氨酸苄酯的三嵌段共聚物(PEG-PLA-PBLG)。(3.氢化还原PEG-PLA-PBLG制得涂有聚乙二醇-聚乳酸-聚谷氨酸(PEG-PLA-PGL)的支架。具体条件为，三氟乙酸作为催化剂HBr/CH3C00H混合溶剂作为反应介质，，温度50摄氏度，时间为2小时，取出后测涂层附着力。用光学显微镜观察涂层支架扩展时的顺应性和涂层有无明显裂开、剥脱现象。I. 3测试方法I. 3. I涂层的结合强度采用拉伸法测试涂层与基体之间的结合强度，测试方法按照 GB-5210-85 进行。I. 3. 2接触角测试采用德国蔡司公司MH0-2高温显微镜附带接触角测试仪，测量温度为室温。用微型注射器，将溶滴在试样表面，注意液滴大小，使其直径约2_，迅速测接触角。2.实验结果考虑到临床应用的要求，支架表面的涂层聚合物应该是具有一定强度和弹性的。聚脂肪酸的参与提高了聚合物力学性能。很多研究结果表明，植入用冠脉支架具有复杂的网状结构，在OLYMPUS体式显微镜下发现，利用浸涂法制备的支架表面涂层，在支架提拉过程中，由于溶液浓度等外界原因会发生胶体堵塞支架空隙现象，而支架在经过离心处理后，内部没有明显堵塞，没有胶体粘连现象，可呈现完整光滑的网状结构。涂层结合力包括涂层与基体的结合力以及涂层本身所具有的内聚力。实验中采用强酸对支架基体表面进行化学改性处理，在试样表面形成均匀的蚀坑，使表面粗化，从而提高了粘接面积，增加了多聚物与支架基体的物理结合力。实验结果测试了浓度相同，不同酸处理时间对接触角影响(表I)及不同浓度的酸处理对接触角的影响(表2)。
表I酸处理反应时间对接触角平均值的影响


冠状动脉支架置入术后再狭窄是冠脉介入研究领域的难题。本课题采用高分子化学合成方法制备具有生物降解性和活性基团的聚乙二醇，脂肪族聚酯，聚氨基酸嵌段共聚物，并对金属血管支架表面进行化学处理及高分子接枝改性。通过异型双功能交联剂SPDP成功将CD34抗体包被到可降解多聚物聚乙二醇-聚乳酸-聚谷氨酸(PEG-PLA-PGL)上。包被有CD34抗体的多聚物血管支架上内皮祖细胞可以在其上稳定生长，并保持良好的细胞活性，随接触时间的延长，EPCs逐渐分化为血管内皮细胞，并形成良好的内皮细胞层，说明了CD34抗体包被支架能更有效的吸附内皮祖细胞，进而促进血管内皮修复，预防支架置入后再狭窄。