专利名称：一种冬凌草提取物在制备治疗抗脑缺血药物中的应用的制作方法冬凌草为唇形科香茶菜属植物碎米桠Rabdosia rubescens (Hems. 1) Hara的地上 草质部分，河南是主产区。冬凌草味苦，性微寒，具清热解毒，消炎止痛及抗肿瘤之功效。河 南民间用于治疗咽喉肿痛、食管癌等已有五十余年历史，临床报道其水及醇提取物对食管 癌、贲门癌、肝癌、乳腺癌有一定疗效。近年来的药理研究充分证明，冬凌草有良好的消炎、 抗菌、镇痛作用，可有效地抑制甲型、乙型溶血性链球菌、金黄色葡萄球菌等。脑缺血属于中医“缺血中风”的范围，缺血性脑血管疾病是威胁人类健康与生存的 主要疾病之一，是中老年人常见病，具有高发病率、高患病率、高死亡率、高致残率、高复发 率的特点，是目前重点防治的一种疾病。脑梗死时血管狭窄或闭塞，导致脑组织局部的缺血 或坏死，其发病机理属中医“血瘀”范畴，中医历来主张使用以“活血化瘀”为主的治则来治 疗本病，应用“活血化瘀”方药治疗脑缺血取得了较好的效果，得到了广泛的肯定。本研究所用冬凌草是河南道地药材，又名冰凌草(Rabdosia rubescens (Hamst))， 系唇形科香茶菜属植物，味甘苦，性微寒。全草为民间常用草药，具有清热解毒、消炎止痛、 健胃活血等功效。化学成份分析证实冬凌草含有从单萜、倍半萜、二萜、三萜、挥发油、甙类 及多糖等一系列物质。从冬凌草叶的提取物中分离出五种二萜类化合物，即冬凌草甲、乙、 丙、丁及戊素，为其主要抗癌活性成份。主要的药理作用是抗肿瘤作用(抗细胞增殖作用、 抑制癌细胞DNA、RNA和蛋白质的合成及抗突变作用)、0 -受体阻断作用及抗菌消炎作用 (冬凌草醇提物对金黄色葡萄球菌及甲型链球菌有明显抗菌作用，对大肠杆菌的作用则很 弱，对白色葡萄球菌、乙型链球菌、弗氏痢疾杆菌表现出较强的抗菌作用，对伤寒杆菌、痢疾 杆菌、变形杆菌作用也较强。冬凌草鲜叶的水提物具有广谱的抗菌活性，对革兰氏阳性菌和 革兰氏阴性菌均有抑制作用，对革兰氏阳性菌的抗菌活性要比对革兰氏阴性菌的高；对枯 草芽孢杆菌和绿脓杆菌具有杀灭作用。其次，冬凌草醇提取物对大鼠棉球肉芽肿有抑制作 用，对小鼠有镇痛作用)。临床上冬凌草对食管癌、贲门癌、结肠癌、肝癌有一定疗效，还可与常用化疗药物 联合使用，如PN(平阳霉素+消瘤芥)、顺钼等，有增效作用。另外，冬凌草对化脓性扁桃体 炎，急、慢性咽喉炎及慢性气管炎等有也良好的功效。现代研究还发现该化合物或制剂具有 持久而缓和的中枢抑制、降低血压、双向调节等作用。另外，冬凌草素还可降低肝微粒体细 胞色素P-450含量，抑制苯巴比妥钠及强致癌物三氯联苯的诱导作用，P-450可激活多种致 癌物(如亚硝胺、黄曲霉素及多环芳香烃类)与核酸等大分子物质发生作用而引起癌变。冬凌草长期以来作为一种有良好活性但低毒性的抗肿瘤植物，在近20多年内受 到国内外学者的关注。但直到目前，还没有发现其对脑缺血的任何报道。
针对上述情况，为克服现有技术之缺陷，本发明之目的就是提供一种冬凌草提取 物在制备治疗抗脑缺血药物中的应用，可有效解决抗脑缺血药物的制备，实现冬凌草提取 物在制备治疗抗脑缺血药物中的应用问题，其解决的技术方案是取冬凌草药材，放入溶剂内浸泡，提取两次，合并两次提取液，水浴浓缩干燥，得脂 溶性提取物(或称冬凌草脂溶性部位提取物)，该提取物可有效用于制备治疗抗脑缺血，所 说的溶剂为体积浓度95%的乙醇或甲醇、丙酮、乙酸乙酯的一种，该脂溶性提取物的制备方 法是取冬凌草药材，加10倍冬凌草药材重量的溶剂中浸泡30min，提取lh，回收提取 液；药渣再加8倍冬凌草药材重量的溶剂，提取lh，得药渣提取液，合并提取液，回收溶剂 后，水浴浓缩干燥，得冬凌草脂溶性提取物，该提取物可有效解决抗脑缺血药物的制备，制 备方法简单，易于生产，是冬凌草医用价值上的创新，经济和社会效益巨大。作详细说明。 选取冬凌草的地上草质部分，购自河南济源市。取该取冬凌草20克，加200克95 % 的乙醇，浸泡30min，提取lh，过滤得提取液，药渣再加160克的95%的乙醇，提取lh，过滤 得药渣提取液，合并两次的提取液，回收乙醇后，水浴浓缩，干燥，得冬凌草提取物，冬凌草 提取物经多次多批多种不同的量按上述方法提取均取得了相同或相近似的结果，该方法稳 定可靠，其冬凌草提取物有效用于制备治疗抗脑缺血的药物，并经反复多次多批动物实验， 充分证明了冬凌草脂溶性提取物具有抗脑缺血作用，实现了冬凌草提取物在制备治疗抗脑 缺血药物中的应用，有关动物实验资料如下1.药品试剂冬凌草提取物试剂，冬凌草为唇形科香茶菜属植物碎米桠Rabdosia rubescens (Hems. l)Hara的地上草质部分，购自济源市；取冬凌草药材，加10倍量95%的乙 醇，浸泡30min，提取lh，回收药液；药渣再加8倍量95%的乙醇，提取lh ；合并提取液，回收 乙醇后水浴浓缩干燥，干燥物加水制成冬凌草提取物试剂；地塞米松磷酸钠注射液生产，批号0907183 ；江苏涟水制药有限公司生产；养血 清脑颗粒，由天津天士力制药股份有限公司生产，批号Z10960082 ；N0S测试盒，南京建成 生物工程研究所提供，批号20100626 ；NO测试盒，南京建成生物工程研究所提供，批号 20100626 ；ATP检测试剂盒，由南京建成生物工程研究所提供，批号20100114,20100613 ；考 马斯亮蓝测试盒，南京建成生物工程研究所提供，批号20100626 ；尼莫地平片，西安博爱制 药有限责任公司提供，批号090117 ；华佗再造丸，广州奇星药业有限公司提供，批号7438。1.2实验动物小白鼠，清洁级，昆明种，由河北省实验动物中心提供，18 22g，雌雄各半，合格 证号912102 ；动物合格证编号28 32g，雄性，合格证号1006019。1.3实验仪器自动血液流变仪(LBY-N6B&LBY-N6K)，北京普利生仪器有限公司生产；UV-2000紫 外可见分光光度计，尤尼柯(上海)仪器有限公司生产；TGL-16G台式离心机，上海安亭科学仪器厂生产；电子分析天平，奥豪斯(上海)公司生产；DZKW-4型电子恒温水浴锅，北京 永光明医疗仪器厂生产；DY89-1型电动玻璃勻浆机，宁波新芝生物科技有限公司生产；可 调式移液器，上海雷勃分析仪器有限公司生产。2.实验方法与结果2. 1对小鼠常压耐缺氧的影响取昆明种小鼠50只，雌雄各半，体重19 22g，随机分为5组，每组10只，分别灌 服大、中、小剂量的冬凌草醇提物混悬液(0. 2g/ml,0. lg/ml、0. 05g/ml,0. 2ml/10g)，养血清 脑颗粒混悬液(0. lg/ml,0. 2ml/10g)及同体积的生理盐水(0. 2ml/10g)。每天给药1次，连 续给药5天。末次给药1小时后，将小鼠置于经容量标定的150mL广口瓶中，瓶内置10g钠 石灰用以吸附二氧化碳，瓶盖迅速涂以凡士林密封，使之不漏气，立即计时，以呼吸停止为 指标，记录小鼠在密闭磨口瓶内的存活时间。结果见表1。表1冬凌草、凌霄花对小鼠常压耐缺氧的影响(X±S~)本发明涉及一种冬凌草提取物在制备治疗抗脑缺血药物中的应用，可有效解决抗脑缺血药物的制备，实现冬凌草提取物在制备治疗抗脑缺血药物中的应用问题，取冬凌草药材，放入溶剂内浸泡，提取两次，合并两次提取液，水浴浓缩干燥，得脂溶性提取物，可有效用于制备治疗抗脑缺血，所说的溶剂为体积浓度95％的乙醇或甲醇、丙酮、乙酸乙酯的一种，其制备方法是取冬凌草药材，加10倍溶剂浸泡30min，提取，回收提取液；药渣再加8倍溶剂，提取，得药渣提取液，合并提取液，回收溶剂后，水浴浓缩干燥，得冬凌草脂溶性提取物，该提取物可有效解决抗脑缺血药物的制备，制备方法简单，易于生产，是冬凌草医用价值上的创新，经济和社会效益巨大。