专利名称：一种具有抗氧化作用的刺五加叶提取物的制作方法目前，大量资料已经证明炎症、肿瘤、衰老、血液病、以及心、肝、肺、皮肤等各方面疑难疾病的发生机理与体内自由基产生过多或清除自由基的能力下降有着密切的关系。由于抗氧化剂对由自由基引起的机体损伤有干扰作用，而被公认为是一种新的治疗途径，在预防医学领域里，对抗氧化剂研究兴趣空前高涨。合成的抗氧化剂虽然抗氧化性能较好，但有一定的副作用。所以，开发研究抗氧化作用的天然药物是目前研究的重中之重。五加科植物刺五加Acanthopanax senticosus (Rupr. Et Maxim. ) Harms,别名五加皮、刺拐棒(中国东北)，俗名Cimijia，科属五加科五加属，使用部位根和根状茎，生于山坡林中及路旁灌丛中；药圃常有栽培。分布于华中、华东、华南和西南。根皮祛风湿、强筋骨，泡酒制五加皮酒(或制成五加皮散)。根皮含刺五加总苷、刺五加多糖、黄酮类化合物、挥发油、鞣质、棕桐酸、亚麻仁油酸、维生素A，B1。刺五加叶皂苷(ASS)对大鼠心肌缺血再灌注损伤具有明显保护作用，刺五加茎叶的乙醇提取液对胶原肾上腺素诱导的小鼠血栓形成有显著保护作用，刺五加提取物能扩张脑血管，改善大脑供氧量，刺五加叶皂苷(ASS) 对实验性大鼠脑缺血具有明显的保护作用，对II型糖尿病大鼠有显著降血糖作用，刺五加叶皂苷抗肝癌。近年来，刺五加不但药用，还拓宽至保健品、饮料、酒类等行业，并大量出口到日本、韩国、东南亚、欧洲、北美洲等许多国家和港澳台市场。由于刺五加资源连年无序采挖，产量逐年大幅减少，今年东北已无大货供应国内外市场，为保护刺五加资源，已研究天然林下刺五加栽培，目的是能够使刺五加回归原始环境，在天然林中大量繁衍发展，以满足医药和保健品广泛的开发对刺五加大量的需要。经查阅大量文献发现国内外对五加科植物刺五加叶的相关研究鲜见报道。通过本文的研究，为深入研究五加科植物刺五加提供了理论依据。本发明涉及五加科植物刺五加叶提取物体外抗氧化活性筛选，为其在食品、药品等领域开发新的天然抗氧化剂提供参考依据。
I、一种具有抗氧化作用的刺五加叶提取物的制备方法，其特征在于包括以下步骤(I)将刺五加叶粉末，用重量为刺五加叶粉末10倍量的50%乙醇溶液浸泡 10h-12h后，依次用10倍量、8倍量、6倍量50%乙醇溶液超声提取3次，每次30min-40min， 温度为30°C，功率为80W;(2)将(I)中3次滤液合并，上大孔树脂柱,依次用水、10%、30%乙醇洗脱大孔树脂柱，收集30%乙醇洗脱溶液，浓缩至无醇味，蒸干，得到刺五加叶提取物，备用。2、一种具有抗氧化作用的刺五加叶提取物的用途，其特征在于该提取物用于制备具有抗氧化作用的药物制剂。根据本发明，本发明中的“ ％ ”是重量百分比。4I. 3 试剂DPPH溶液，蒸馏水，无水乙醇，甲醇，ABTS,过硫酸钾，铁氰化钾，磷酸盐缓冲液(PH =6. 6)，三氯乙酸，三氯化铁，抗坏血酸(以下用Vc表示)(上海惠世生化试剂有限公司，批号080408), Folin-Ciocalteu 试剂，无水碳酸钠。2实验方法与步骤2. I药材组分的提取将刺五加叶粉末3. Okg，用重量为刺五加叶粉末10倍量的50%乙醇溶液浸泡IOh 后，依次用10倍量、8倍量、6倍量50%乙醇溶液超声提取3次，每次30min，温度为30°C，功率为80W ;将3次滤液合并，上大孔树脂柱,依次用水、10%、30%乙醇洗脱大孔树脂柱，收集 30%乙醇洗脱溶液，浓缩至无醇味，蒸干，得到刺五加叶提取物，备用。 2. 2DPPH法测定抗氧化活性2. 2. I样品溶液的制备准确称取干燥至恒重的刺五加叶提取物30mg，用无水乙醇定容于IOmL容量瓶中， 配成浓度为3mg/mL的样品母液,将样品母液用无水乙醇逐级稀释成浓度为O. 000mg/ml,O.018mg/mL,O. 037mg/mL,O. 075mg/mL,0. 15mg/mL,0. 31mg/mL,0. 62mg/mL,I. 25mg/mL 的样品溶液待用。2. 2. 2DPPH溶液的制备精密称取DPPH样品O. Olg，加入无水乙醇定容至50ml容量瓶中，得到DPPH母液 (浓度O. 2mg/mL)。从母液中移取10mL，用无水乙醇定容置50mL容量瓶中，得到DPPH溶液 (浓度O. 04mg/mL)，整个过程都需要避光。2. 2. 3样品测定刺五加叶提取物样品溶液按表I加入反应液，摇勻后于室温避光静置30min,在 515nm处测定吸光度值。用Vc作对照。表I刺五加叶提取物溶液加样表
A3mL无水乙醇+3mlDPPH 溶液B3mL样品溶液+3πιΠ3ΡΡΗ 溶液C3mL样品溶液+3ml无水乙醇 DPPH 清除率％= (A_B+C)/A*100
2. 3ABTS法测定抗氧化活性2. 3. I样品溶液的制备精确称取干燥至恒重的刺五加叶提取物30mg，用水定容于IOmL容量瓶中，配成浓度为3mg/mL的样品母液，将样品母液用水逐级稀释成浓度O. 000mg/ml,0. 018mg/mL,
O.037mg/mL, O. 075mg/mL, 0. 15mg/mL, 0. 31mg/mL, 0. 62mg/mL, I. 25mg/mL,的样品溶液待用。2. 3. 2ABTS+ 溶液的制备5mL, 14mM的ABTS和5mL，4. 9mMk2S208混合产生ABTS+，黑暗中静止16h，使用之前用乙醇稀释成备用的ABTS+，要求其在734nm波长下的吸光度为O. 70 ±0. 02。2. 3. 3样品测定取3ml样品溶液加入158 μ LABTS+(Asample)，用乙醇做空白，158 μ LABTS+和3ml水为标准液(Acontrol), 6min后在734nm波长下测定吸光度,用Vc作对照。清除率(%) = [ (Acontrol-Asample) /Acontrol] X 100%2. 4半数抑制率的计算半数抑制率(IC5tl)指清除率为50%时所需抗氧化剂的浓度，根据不同浓度抗氧化剂的清除率作曲线求出。3结果与讨论3. I 结果3. I. IDPPH法测定抗氧化活性见表2。表2.不同浓度下刺五加叶提取物DPPH法清除自由基活性
浓度(mg/mL)刺五加叶
_提取物


本发明所属保健食品加工技术领域，本发明涉及一种具有抗氧化作用的刺五加叶提取物。将刺五加叶粉末，用重量为刺五加叶粉末10倍量的50％乙醇溶液浸泡10h-12h后，依次用10倍量、8倍量、6倍量50％乙醇溶液超声提取3次，每次30min-40min，温度为30℃，功率为80W；将3次滤液合并，上大孔树脂柱，依次用水、10％、30％乙醇洗脱大孔树脂柱，收集30％乙醇洗脱溶液，浓缩至无醇味，蒸干，得到刺五加叶提取物，备用。本发明产品可用于食品、药品等领域开发新的天然抗氧化剂，本发明产品利于工业化生产。