专利名称：熊果酸在制备减肥和改善脂肪肝功效的保健品中的应用的制作方法肥胖作为一种发病率高，危害性大的综合症，已经日益引起人们的关注。世界卫生组织(WHO)调查表明2005年全球有16亿人超重，至少4亿人肥胖。2002年中国营养调查表明，我国成人超重率为22. 8%，肥胖率为7. 1 %，与1992年调查资料相比，成人超重率上升39 %，肥胖率上升97 %。肥胖严重危害着人类的健康和生活质量，研究表明BMI (Body Mass hdex，体质指数)大于32即可使预期寿命平均减少6-7年，导致死亡率的加倍。肥胖还可引起一系列代谢系统的紊乱，其中肥胖所致脂肪肝的发病率正逐年上升，肥胖人群中脂肪肝的发病率高达60%，已成为中国重大的公共卫生问题。目前针对肥胖的治疗药物和保健品种类繁多，大致分为五种类型，包括食欲抑制型、增加能量消耗型、抑制肠道消化吸收型、中草药和复方制剂型以及其他治疗肥胖的类型。尤其是大多数都有不同程度的副作用，绝大多数的食欲抑制药及增加能量消耗的减肥药都可以产生不同程度的中枢神经系统兴奋作用，表现出易激惹症状、失眠、欣快感等。易感者及长期用药可发生依赖性，造成滥用，成瘾者突然停药会出现戒断症状，尤以苯丙胺易成瘾，故苯丙胺和含有苯丙胺的复合制剂不可用于减肥。目前，奥利司他是我国唯一批准上市的OTC减肥药，但是其副作用也不容忽视，主要表现在胃肠道不良反应及肝毒性等，故不适用于肥胖伴脂肪肝的患者。另外，单纯靠节食或减肥药快速降低体重还会打破机体正常的代谢系统，从而造成营养失调性脂肪肝，加重脂肪肝的病情。脂肪肝尚无特效的治疗方法，目前以去除病因为主，坚持合理饮食和生活方式，积极治疗危险因素，如肥胖，胰岛素抵抗，脂代谢紊乱等。药物治疗主要是根据脂肪肝的病因和病情选择使用，例如合并高脂血症的脂肪肝患者原则上应使用降脂药，但许多降血脂药可促使血脂更集中于肝脏进行代谢，反而可能促进脂质在肝内的蓄积，并进一步损害肝功能。目前常用的降脂药有他汀类和贝特类药物，其中贝特类药物对脂肪肝的疗效尚存在争议，而他汀类药物治疗最常见的肝脏问题为血清转氨酶增高，此外横纹肌溶解也是他汀治疗最为严重的并发症。因此，目前急需一种综合治疗肥胖及合并高甘油三酯血症的脂肪肝的安全有效的防治方法。熊果酸(ursolic acid，UA)又名乌苏酸，是一种非极性的五环三萜酸，广泛存在于女贞子，乌梅，山楂，桅子，猕猴桃等天然植物中，它具有广泛的生物学活性，包括抗炎，保肝，降脂，调节免疫和抗癌等。国内外研究报道，熊果酸在小鼠经口急性毒性LD50为9. 26g/ kg，大鼠每天口服熊果酸500毫克每公斤体重30天，对大鼠的生长、血象、心电图、肝肾功能都没有显著影响，对大鼠的心、肝、脾、肺、肾、胃等重要脏器、组织亦无明显病理改变。临床实验成人(60kg体重)每天口服熊果酸剂量IMmg，102例患者服用后未见明显的毒副反应。用药期间进行心电图、肾功能、血常规、尿常规检查，未发现异常改变。动物灌服临床剂量的208倍X30天，镜检脑、心、肺、肝、肾、脾、胃、睾丸、小肠、膀胱等脏器，未见有明显损害改变。证明熊果酸属低毒物质，可用于保健品的开发。我们的研究首次证实了熊果酸 (ursolic acid,UA)能够有效降低饮食诱导肥胖大鼠的体重，改善高甘油三酯血症，治疗肥胖导致的脂肪肝，并进一步在体内验证了熊果酸能够促进甘油三酯在粪便中的排泄。目前尚未见应用熊果酸治疗肥胖及肥胖引起脂肪肝的报道，孙梅等采用泰脂安胶囊治疗高脂血症性脂肪肝取得较好效果，但泰脂安胶囊是女贞子叶的乙醇提取物，除含有少量的熊果酸外，还含有齐墩果酸等其它功效成分，其具体的有效成分无法确定。并且，市面上治疗肥胖或肥胖性脂肪肝的保健品大多具有一定肝肾毒性，不适用于肥胖伴脂肪肝人群。
本发明解决了目前针对肥胖和肥胖引起的脂肪肝药物副作用大，存在不同程度的肝脏毒性，且单纯减肥容易造成机体代谢紊乱导致营养失调性脂肪肝等问题，熊果酸不仅能够明显降低高脂饮食诱导肥胖大鼠的体重，还能有效改善肥胖引起的脂肪肝。为了达到上述目的，本发明采用如下技术方案本发明提供熊果酸在制备预防和治疗肥胖及肥胖引起的脂肪肝的保健品中的应用。实验证实98%的熊果酸纯品不仅能够明显降低体重，还能够改善其它肥胖并发的代谢性疾病，例如治疗肝脏脂肪变性，降低血中甘油三酯等。大鼠口服熊果酸的低、中、高剂量分别为每天50mg，IOOmg, 200mg每千克体重，其中每天200mg每千克体重的熊果酸效果显-frh-者O在高脂饮食诱导的肥胖大鼠中发现熊果酸(ursolic acid, UA)能够有效降低肥胖大鼠的体重，治疗肥胖性脂肪肝。对比于一般治疗肥胖或肥胖引起脂肪肝的方法，熊果酸的优势在于具有较好的综合治疗效果。它能够在不影响摄食中枢，即不影响摄食量的前提下促进甘油三酯的排泄，有效地降低了肥胖大鼠的体重。目前针对肥胖性脂肪肝的治疗方法，首要是降低体重，而通过节食或服用药物减肥的风险在于易造成营养失调性脂肪肝，从而加重脂肪肝病情。研究结果显示熊果酸能够同时达到减肥和治疗脂肪肝的目的，且具有较好的安全性，是不可多得的一种新型保健品。图1为肝脏油红0染色；A为基础对照组，B为模型对照组，C为熊果酸低剂量组， D为熊果酸中剂量组，E为熊果酸高剂量组。图 2 为肝脏 DGATl、FAS、SREBP-1C、CD36 蛋白表达的 western blot 结果，CON 表示基础对照组，FAT表示模型对照组，UAH表示熊果酸高剂量组；*表示和模型对照组相比ρ
<0. 05。图 3 为肝脏 PPAR-α、CPT-I、ATGL、HSL 蛋白表达的 western blot 结果，CON 表示基础对照组，FAT表示模型对照组，UAH表示熊果酸高剂量组；*表示和模型对照组相比ρ
<0. 05。图4为骨骼肌？ 々1^、？0(1、50)1蛋白表达的《68{61·!! blot结果，CON表示基础对
4照组，FAT表示模型对照组，UAH表示熊果酸高剂量组；*表示和模型对照组相比ρ < 0. 05。图5为骨骼肌p_AMPK、CPTl蛋白表达的western blot结果，CON表示基础对照组， FAT表示模型对照组，UAH表示熊果酸高剂量组；*表示和模型对照组相比ρ < 0. 05。



本发明提供熊果酸在制备防治肥胖及肥胖引起的脂肪肝保健品中的应用。在高脂饮食诱导的肥胖大鼠中发现熊果酸能够显著降低其体重，并有效改善了肥胖引起的脂肪肝。