一种氧化石墨烯小檗碱结合物及其制备方法[0002]石墨烯由单层碳原子排列组合而成，是世界上最薄的二维材料。近几年，石墨烯作为一种新兴的研究热点，其结构、理化性质、制备方法和应用的研究文章纷纷见诸各学科的高端杂志，对于探究石墨烯的性质及应用起到极大的推动作用。作为化学法制备石墨烯的前驱物——氧化石墨烯，由于表面及边缘上大量含氧基团的引入，易于修饰与功能化，且化学稳定性高。功能化氧化石墨烯和石墨烯衍生物/复合物成为近年来科研工作者的热点。[0003]对石墨烯进行功能化，引入新的官能团之后，会赋予石墨烯新的性质，改善其分散性和水溶性,进而拓宽其应用领域。聚乙二醇(polyethylene glycol, PEG)具有良好的生物相容性、亲水性，被广泛用来制备各种片剂、栓剂及滴眼液，和修饰药物载体。是一种水溶性高分子材料，具备良好的生物相容性。经聚7 二醇修饰，氧化石墨烯能稳定存在于生理环境，并可避免网状内皮系统的摄取，从而发挥长循环作用，可携带药物到达相应的组织和器官。[0004]小檗碱又称黄连素。一种常见的异喹啉生物碱，分子式C20H18N04。临床上主要用于治疗治疗胃肠炎、细菌性痢疾等疾病。大量的研究表明，小檗碱在体内外均具有一定程度的抗肿瘤活性。[0005]氧化石墨烯和PEG修饰氧化石墨烯是一种成本低廉的纳米载体材料，可以通过hummers法等方法制备。张帅等利用聚乙二醇修饰的石墨烯材料探究了该材料在细胞和动物体内的行为，如细胞毒性、动物体内血液循环及生物分布等，并利用该材料对小鼠肿瘤进行了荧光成像和光热治疗，见文献(张帅，刘庄。石墨烯基纳米材料的合成、表征及在生物中的应用。[D]2012，苏州大学)。程兴英等将抗肿瘤药物盐酸多柔比星装载到氧化石墨烯上，载药率高，并有缓释性能，见文献(徐兴英，程江峰。氧化石墨烯的制备及其对盐酸多柔比星的高效装载和缓释性能[J]。2011,`32(5):472-477)。
[0006]小檗碱作为一种季铵类化合物，由于口服吸收的阻碍，口服给药血药浓度无法达到有效浓度，因此将小檗碱进行必要的化学修饰并制成靶向制剂将可以解决血药浓度问题，并且可以克服小檗碱对正常组织不必要的毒副作用。[0007]本发明制备了一种氧化石墨烯小檗碱结合物，用GO作为载体材料，盐酸小檗碱主要通过J1-Ji作用装载在GO上，形成纳米级氧化石墨烯-小檗碱(GO-Ber)复合物。
[0008]这种新型的氧化石墨烯小檗碱结合物，也可用G-P作为载体材料，盐酸小檗碱主要通过J1-Ji作用装载在G-P上，形成纳米级PEG修饰的氧化石墨烯-小檗碱(G-P-Ber)复合物。
[0009]GO-Ber制备方法如下:[0010]将配置好的含 5 % DMSO 的 0.1mg / ml GO 水溶液 3ml 与 5 % DMSO 的 0.8mg /ml Ber的水溶液3ml混合均匀，置于摇床中(摇速:IOOrpm)，于25°C恒温条件下孵育24h，5000rpm离心lh,沉淀用少量去离子水洗后即得。
[0011 ] G-P-Ber制备方法如下:
[0012]将配置好的0.1mg / ml G-P水溶液3ml与0.8mg / ml Ber的水溶液3ml混合均匀，置于摇床中(摇速:IOOrpm)，于25°C恒温条件下孵育24h，5000rpm离心lh，沉淀用少量去离子水洗后即得。
[0013]制备得到的GO-Ber和G-P-Ber都是纳米级，载药率高。在体外释药实验良好，并且有缓释性能。并且我们在研究中发现不同PH下的释放有差别，这种PH依赖的特点对于肿瘤治疗有重大意义，可以预见用这种新型的纳米制剂，在成功解决小檗碱口服吸收差靶向性差上有巨大的潜力。



[0014]图1是G-P、GO、Ber, GO-Ber和G-P-Ber的紫外可见光谱图。
[0015]图2是GO-Ber和G-P-Ber在不同PH下的累积释放曲线图。
[0016]图3a和图3b分别是GO-Ber和G-P-Ber的TEM图谱。

[0017]对G-P、GO、Ber、GO-Ber 和 G-P-Ber 在 200_800nm进行紫外分析，G-P 和 GO 在 350nm处吸收相对弱，而G-P-Ber、GO-Ber和Ber在350nm均有明显吸收(如图1)，证明GO-Ber和G-P-Ber的形成。对GO-Ber和`G-P-Ber进行TEM分析，图3a和3b明显可见被氧化的GO边缘褶皱，GO(GP)阴影表示负载在其上的Ber.[0018]实施例1
[0019]GO-Ber制备方法:将配置好的含5% DMSO的0.1mg / ml GO水溶液3ml与5%DMSO的0.8mg / ml Ber的水溶液3ml混合均匀，置于摇床中(摇速:IOOrpm),于25°C恒温条件下孵育24h，5000rpm离心lh，沉淀用少量去离子水洗后即得GO-Ber复合物。上清液定容至100mL测吸光度，得到游离Ber，进而求得载药率92.9%，粒径249.3±8.9nm。沉淀装入半透膜中置于PH5.8和7.4的磷酸盐缓冲液中释放(如图2)，累积释放分别为90.3%和37.7%。
[0020]实施例2
[0021]G-P-Ber制备方法:将配置好的0.1mg / ml G-P水溶液3ml与0.8mg / ml Ber的水溶液3ml混合均匀，置于摇床中(摇速:100rpm)，于25°C恒温条件下孵育24h，5000rpm离心lh，沉淀用少量去离子水洗后即得G-P-Ber复合物。上清液定容至100mL测吸光度，得到游离Ber，进而求得载药率60.9%，粒径252.0±8.2nm。沉淀装入半透膜中置于PH5.8和7.4的磷酸盐缓冲液中释放(如图2)，累积释放分别为88.4%和54.4%。