专利名称：一种利用血红铆钉菇液体发酵生产菌丝体的方法血红铆钉燕rutilus ),东北地区俗称红蘑等,是一种好气性真菌，在6 30°C下均可生长繁殖，最适在28°C下生长，为菌根性食用菌，即生于土壤而与树木形成外生菌根的食用菌。菌根性食用菌种类十分丰富，已知352种，占食菌总数的53.6%。真菌多糖具有很强的抗肿瘤活性，对癌细胞有很强的抵抗力，用人工液体发酵生产的血红铆钉菇发酵液制成的血红铆钉菇制剂主要用于治疗神经衰弱、失眠、耳鸣、眩晕、四肢麻木、癫痫以及心脑血管等疾病。血红铆钉菇在我国主要分布于黑龙江、吉林、河南、山西、青海、云南、内蒙古、西藏及台湾等地。血红铆钉菇是东北地区重要的野生食用菌之一，但人们对血红铆钉菇的培养条件了解有限，在人工条件下无法使其生成子实体，导致其开发利用受到限制。但可以通过液体发酵的方式获取血红铆钉菇菌丝体，进而从中提取多糖等有效组分，并进一步开发利用。笔者对血红铆钉菇菌丝体液体发酵条件进行了考察和优化，以期获得最高产量的血红铆钉菇菌丝体，为进一步深入提取多糖等活性物质提供原料，也为进一步扩大培养奠定理论基础。本专利以血红铆钉菇为出发菌株，对影响液体发酵生产菌丝体的培养时间、接种量、培养基pH、培养基装液量进行研究。
本发明提供了一种利用血红铆钉菇液体发酵生产菌丝体的方法，本专利以血红铆钉菇为出发菌株，对影响液体发酵生产菌丝体的培养时间、接种量、培养基pH、培养基装液量进行研究。I. 一种利用血红铆钉燕液体发酵生产菌丝体的方法,其特征在于发酵时,在500mL三角瓶中装入一定体积的发酵培养基，接入一定量的的血红铆钉菇种子液接入发酵培养基中，分别在不同的PH值条件下发酵培养一定的时间。2.步骤I所述的发酵培养基蔗糖30 g/L，蛋白胨3 g/L,MgSO4 O. 50 g/L, K2HPO4I.50 g/L, KH2PO4 O. 20 g/L, ZnSO4 0. 03 g/L, MnSO4 0. 03 g/L，pH值根据发酵条件选定。3.步骤I所述的种子培养液的制备方法为将在PDA斜面培养基上培养的菌丝体接种到液体发酵培养基培养6 d，制成种子培养液。4.步骤I所述的最佳培养时间为8 d。5.步骤I所述的最佳接种量为12%。6.步骤I所述的最佳培养基pH值为9. 5。7.步骤I所述的最佳装液量为250 mL/500 mL。图I培养时间对血红铆钉菇菌丝体产量的影响； 图2接种量对血红铆钉菇菌丝体产量的影响； 图3 pH值对血红铆钉菇菌丝体产量的影响；
图4装液量对血红铆钉菇菌丝体产量的影响。

下面的实施例对本发明作详细说明，但对本发明没有限制。本专利所用的菌株为血红铆钉菇，购买于中国林业微生物菌种保藏管理中心，编号为CFCC85918。实施例I
本实施例说明培养时间对血红铆钉菇菌丝体生长的影响，将种子培养液以2. 5% (V/V)的接种量接种于发酵培养基，PH值自然，于28°C，200 r/min振荡培养不同的时间，培养基装液量为200 mL/500 mL三角瓶，结果如图I所示。由图I可见，培养时间对血红铆钉菇菌丝体产量影响很大，在:T 8 d的培养期间内，菌丝体的产量随着培养时间的增加而呈上升趋势，在第8天时达到最大值，5. 8 g/L，而此后继续增加培养时间，菌丝体产量并无明显增加，因此确定血红铆钉菇菌丝体的最佳培养时间至少应为8 d0实施例2
本实施例说明接种量对血红铆钉菇菌丝体生长的影响，分别以不同接种量的种子培养液接种于优化培养基，PH值自然，于28°C，200 r/min振荡培养8 d。培养基装液量为200mL/500 mL三角瓶，结果如图2所示。由图2可见，血红铆钉菇菌丝体产量在液体种子接种量为1%_18%时随接种量增加而呈上升趋势，此后继续增加接种量，菌丝体产率也有上升，但上升幅度并不明显，因此适于血红铆钉菇菌丝体生产的种子培养液接种量应在12%以上较为合适。实施例3
本实施例说明培养基PH值对血红铆钉菇菌丝体生长的影响，种子培养液以12% (V/V)的接种量接种于优化培养基，分别调不同的pH值，于28°C，200 r/min振荡培养8 d。培养基装液量为200 mL/500 mL三角瓶，结果如图3所示。由图3可见，培养基的起始pH值在6. 5^10. O变化时，菌丝体产量随pH值的增加而呈上升趋势，在pH值为9. 5时有最大值；而当培养基的起始pH值大于9. 5时，菌丝体的产量开始降低。说明培养基的PH值在9. 5时，菌丝体生长量达最大值6. 3 g/L。实施例4
本实施例说明培养基装液量对血红铆钉菇菌丝体生长的影响，种子培养液以12% (V/V)的接种量接种于优化培养基，在28°C，培养基起始pH值为9. 5，200 r/min振荡培养8 d，结果如图4所示。装液量对菌丝体产量的影响间接体现溶解氧对菌丝体生产的影响。由图4可见，当装液量在10(T250 mL/500 mL三角瓶时，菌丝体的产量呈上升趋势；当装液量超过250mL/500 mL三角瓶时，菌丝体的产量 明显呈现下降趋势。说明装液量过高，培养体系中的溶解氧供应不足进而影响了菌丝体的产量。因此，装液量为250 mL/500 mL三角瓶对菌丝体的生长较为有利,此时菌丝体产量可达6. 4 g/L ο


本发明提供了一种利用血红铆钉菇液体发酵生产菌丝体的方法，本发明以血红铆钉菇为出发菌株，对影响液体发酵生产菌丝体的培养时间、接种量、培养基pH、培养基装液量进行研究。