专利名称：一种肉苁蓉提取物提取方法及其应用的制作方法肉苁蓉具有补肝肾，益精血，润肠通便的功效，归肾、大肠经。从归经上看，肉苁蓉 对治疗大肠病变具有事半功倍的效果，但现代药理药效的研究主要集中在肉苁蓉的润肠通 便作用上，而对其他大肠病变的影响研究的很少，如肉苁蓉水提物可显著提高小鼠肠推进 度，缩短小鼠通便时间，抑制大肠对水分的吸收。关于肉苁蓉的药理药效文章很多，但均未涉及肉苁蓉的抗肠癌作用及其机制。肠 癌是大肠粘膜上皮起源的恶性肿瘤，是最常见的消化道恶性肿瘤之一，死亡率较高。手术切 除是肠癌最主要的治疗手段，然而术后肿瘤易复发和转移，因此选择合理有效的药物抑制 肿瘤细胞的增生、转移，对提高肠癌患者生存率极为有益。肠癌的动物模型有很多，其中以TGF-β 1-缺陷小鼠较为常见。TGF-β 1_缺陷小鼠 的Rag2基因敲除(Tgfbl 士Rag2-/_)，且缺少T细胞和B细胞，小鼠生长过程中盲肠和结肠 部位会发生炎症，引起细胞增生及不同程度的癌变。
本发明目的在于提供一种肉苁蓉提取物。本发明目的还在于提供上述肉苁蓉提取物的提取方法。本发明目的还在于提供上述肉苁蓉提取物的用途。一种肉苁蓉提取物提取方法，其特征在于，将干燥的肉苁蓉肉质茎磨成粉末，加 水，回流提取2小时，过滤，药渣再加水回流提取2次，每次回流提取1小时，合并3次提取 液，冰冻干燥仪干燥提取液，干燥后得到棕色粉末，即为肉苁蓉提取物。所述粉末与所加水的质量比为3 5，药渣与所加水的质量比为3 10。所述肉苁蓉提取物来源于列当科肉苁蓉属的荒漠肉苁蓉或管花肉苁蓉。所述的肉苁蓉提取物在制备治疗肠癌药物上的应用。所述的肉苁蓉提取物在制备治疗肠炎药物上的应用。所述的肉苁蓉提取物的肠道保健品。本发明的有益效果本发明的肉苁蓉提取物可激活免疫系统，增加免疫器官脾脏 的重量，治疗肠癌，减少肠道增生的发生，保护正常的肠道表皮细胞，减少肠道幽门杆菌感染。图IWestern blot检测iNOS表达电泳图谱。图2组织切片中增生的数目图。图3肉苁蓉提取物保护正常肠道表皮细胞柱形图。图4RAW^64. 7细胞M小时一氧化氮生成量柱形图。
液，备用。实施例2 肉苁蓉的药理实验用300ug/ml的肉苁蓉提取物水溶液饲喂肠癌模型小鼠3个月。实验结束后观察 脾脏变化，取小肠和大肠组织，10%福尔马林固定，石蜡包埋组织，H&E染色，显微镜下观察 组织癌变类型和数目。根据癌变的组织、形态及浸润程度分为3类增生，腺瘤，癌。增生的典型特征为黏 膜增厚，肠腺伸长，但上表皮细胞正常，并且有正常的杯状细胞结构。腺瘤的特征为肌层增 厚，杯状细胞减少，黏膜下层出现分化的肠腺。肠癌的特征为明显的肌层组织结构破坏，并 且肠腺上表皮细胞异常，出现核异型。实施例3 肉苁蓉提取物激活免疫系统实验用300ug/ml的肉苁蓉提取物水溶液饲喂肠癌模型小鼠3个月。比较喂药组和对 照组小鼠免疫器官变化并分离脾细胞；采用⑶49和F4/80抗体分别标记脾细胞中的NK细 胞和巨噬细胞。结果显示，喂药组小鼠的脾重量高于对照组，脾细胞数量也高于对照组，并且有显 著差异(见表1)；喂药组小鼠的NK细胞比例显著高于对照组，巨噬细胞的比例高于对照 组，但没有显著差异(见表2)。 表1肉苁蓉提取物对肠癌模型小鼠脾器官的影响
脾重量(g)脾细胞数(Million)
喂药组0.055±0.0227.095±1.3533对照组0.038±0.010 *2.941 士 1.492*P值0.04 (η= 12)0.002 (n=6)
注*表示显著性差异f)< 0. 05
表2肉苁蓉提取物对脾细胞组成的影响巨噬细胞百分比(％)自然杀死细胞(％)
pTf prf50.5 43.632.1 28.4*P值>0.05 (η=4)0.04 (n=4)注*表示显著性差异P < 0. 05实施例4 肉苁蓉提取物减少肠道增生的发生实验用300ug/ml的肉苁蓉提取物水溶液饲喂肠癌模型小鼠3个月。通过组织学分析喂药组和对照组肠道组织切片的癌变类型和数目。10倍视野下统计每只小鼠各种癌变类型 和数目。结果显示，喂药组小鼠的增生数目明显低于对照组(见图2)，并有显著差异，对腺 瘤和肠癌的发生也有抑制作用，但未见显著差异，可能与实验动物数量较小有关。实施例5 肉苁蓉提取物保护正常的肠道表皮细胞实验选用小鼠正常的表皮细胞MODE-K细胞系，用细胞因子模拟肠道中的损伤，FACS检 测加入肉苁蓉提取物后细胞的凋亡比例。结果表明，肉苁蓉可以保护正常的肠道表皮细胞生长(见图3)，并且在模拟的受 损环境下，肉苁蓉提取物可以保护细胞免于受损，在模拟的细胞受损的情况下，同时加 入肉苁蓉提取物时，可以将死亡细胞数减少到35%左右。这对于细胞修复和维持肠道的稳 态具有十分重要的意义。实施例6 肉苁蓉提取物减少肠道幽门杆菌感染实验用300ug/ml的肉苁蓉提取物水溶液饲喂肠癌模型小鼠6个星期。实验过程中间 隔5次收集喂药组和对照组小鼠粪便，应用16SrRNA寡核苷酸探针原位杂交法，检测粪便中 幽门杆菌的感染。结果显示在5次检测中，喂药组仅出现1次感染，对照组出现3次感染(见表3)。 表明肉苁蓉提取物可以有效减少肠道中幽门杆菌的感染，减少肠炎的发生。表316SrRNA检测小鼠模型肠道幽门杆菌感染


本发明公开了属于药用植物应用研究技术领域的一种肉苁蓉提取物提取方法及其应用。该提取物来源于列当科肉苁蓉属的荒漠肉苁蓉或管花肉苁蓉。将肉苁蓉的干燥肉质茎磨成粉末，通过回流提取、过滤、药渣再回流提取、冰冻干燥仪干燥得到棕色粉末，即为肉苁蓉提取物。本发明的肉苁蓉提取物可激活免疫系统，增加免疫器官脾脏的重量，治疗肠癌，减少肠道增生的发生，保护正常的肠道表皮细胞，减少肠道幽门杆菌感染。