专利名称：补料发酵法生产谷氨酰胺转胺酶的制作方法微生物谷氨酰胺转胺酶(蛋白质-谷氨酸-谷氨酰胺转胺酶，Microbial Trans-glutaminase, EC 2.3.2. 13，简称MTG)是一种催化酰基转移反应的转移酶。它能催 化化蛋白质分子内、分子间发生交联、蛋白质和氨基酸之间的连接以及蛋白质分子内谷氨 酰胺基的水解反应，从而直接改变蛋白质本身以及蛋白质所附着的细胞、组织等的结构与 功能性质的特性，提高蛋白质的营养价值。因此，MTG在食品、纺织、生物制药等领域有着广 泛的应用前景。近年来，商业化谷氨酰胺转胺酶主要从动物组织中提取，价格昂贵。目前， 人们开始转向于研究利用微生物发酵来生产谷氨酰胺转胺酶，以满足市场对低成本高产量 的谷氨酰胺转胺酶的迫切需求。
本发明就是针对上述问题，提供一种补料发酵生产谷氨酰胺转胺酶的方法；该生 产方法通过分别在细胞生长阶段补充碳源和产酶阶段补充氮源的补料策略实现了吸水链 霉菌发酵生产谷氨酰胺转胺酶的高产。为实现本发明的上述目的，本发明如下技术方案，本发明的生产工艺是在吸水链 霉菌(Sti^ptomyces hygroscopicus)分批发酵研究的基础上，通过在菌体生长阶段指数流 加葡萄糖，进行高细胞密度培养，获得了较高的菌体量；待菌体生长进入产酶期后，通过补 加氮源，为产酶提供充足的氮源，其中通过流加蛋白质氮源，可以减少蛋白酶对成熟MTG的 分解，促进产酶。本发明的有益效果本发明的生产工艺通过分别在细胞生长阶段补充碳源和产酶阶段补充氮源的补 料策略实现了吸水链霉菌发酵生产谷氨酰胺转胺酶的高产。通过指数流加可以实现吸水 链霉菌细胞的高密度生长，通过在8-16h采用较高的的比生长速率(0. 15h-l)，后期降低比 生长速率(0. IOh-I)这种较优的葡萄糖流加速率组合，细胞干重可达到36g/L，在32h添加 50g/L的豆饼粉最终酶活可达到5. 79U/mL。指数流加的技术已经相对成熟，也便于实际操 作，另外豆饼粉价格较低，在实际发酵过程中也易于操作，因此对吸水链霉菌进行补料发酵 生产有很好的应用前景。补料发酵法生产谷氨酰胺转胺酶是涉及补料发酵生产谷氨酰胺转胺酶的方法，更具体地说，是涉及一种吸水链霉菌的补料发酵方法生产谷氨酰胺转胺酶。本发明提供一种补料发酵生产谷氨酰胺转胺酶的方法；该生产方法通过分别在细胞生长阶段补充碳源和产酶阶段补充氮源的补料策略实现了吸水链霉菌发酵生产谷氨酰胺转胺酶的高产。本发明的生产工艺是在吸水链霉菌(Streptomyces hygroscopicus)分批发酵研究的基础上，通过在菌体生长阶段指数流加葡萄糖，进行高细胞密度培养，获得了较高的菌体量；待菌体生长进入产酶期后，通过补加氮源，为产酶提供充足的氮源，其中通过流加蛋白质氮源，可以减少蛋白酶对成熟MTG的分解，促进产酶。