一种高表达安丝菌素p-3的方法

刘彦君, 王群

2012年10月17日

2012年7月18日

2012年7月18日

上海交联药物研发有限公司, 苏州康聚生物科技有限公司

C12R1/01GK102732581SQ20121024940

菌素 安丝 表达

1.一种珍贵橙色束丝放线菌发酵产生安丝菌素P-3的方法，包括如下步骤 用珍贵橙色束丝放线菌CPCC 260982在液体发酵培养基中培养，液体发酵培养基中含有2-10%的碳源、1-5%的氮源和0. 1-2%的短链脂肪醇；发酵过程的pH值为6. 5-7. 5 ;温度为26-30 0C ;溶氧控制20%以上； 所述的碳源选自葡萄糖、果糖、淀粉、蔗糖、麦芽糖、麦芽提取物或甘油中的一种或两种以上； 所述的氮源选自蛋白胨、牛肉汤、酵母提取物、KNO3、大豆粉、大豆胨、玉米浆、棉籽饼粉或棉籽饼浸出粉中的一种或两种以上； 所述的短链脂肪醇选自正丙醇、异丙醇、正丁醇或异丁醇2.根据权利要求I所述的一种珍贵橙色束丝放线菌发酵产生安丝菌素P-3的方法，其、特征在于所述的在液体发酵培养基中培养，培养条件是通气浸没培养3.根据权利要求I所述的一种珍贵橙色束丝放线菌发酵产生安丝菌素P-3的方法，其特征在于pH值为7.04.根据权利要求I所述的一种珍贵橙色束丝放线菌发酵产生安丝菌素P-3的方法，其特征在于温度为28°C5.根据权利要求I所述的一种珍贵橙色束丝放线菌发酵产生安丝菌素P-3的方法，其特征在于溶氧优选控制30%以上6.根据权利要求I至5任一所述的一种珍贵橙色束丝放线菌发酵产生安丝菌素P-3的方法，其特征在于所述的液体发酵培养基中还含有0. 01-0. 2%的微量元素，所述的微量元素选自CoCl2、FeSO4或MgSO4中的一种或两种以上7.根据权利要求I至5任一所述的一种珍贵橙色束丝放线菌发酵产生安丝菌素P-3的方法，其特征在于所述的液体发酵培养基中含有0. 5-1. 5%的酵母提取物、1-5%的可溶性淀粉、0. 5-1. 5%葡萄糖、0. 1-1%的果糖、0. 5-4%的麦芽提取物、0. 5-3%的大豆粉、0. 05-0. 2%的K2HP04、0. 5% 的碳酸钙、0. 0005-0. 005% 的 FeSO4 7H20、0. 01-0. 1% 的 MgSO4 .7H20、0. 1-2% 的异丁醇、0. 005-0. 05%的酪氨酸8.根据权利要求I至5任一所述的一种珍贵橙色束丝放线菌发酵产生安丝菌素P-3的方法，其特征在于所述的液体发酵培养基中含有0. 5%的酵母提取物、2%的可溶性淀粉、0.5%的葡萄糖、0. 5%的果糖、1%的麦芽提取物、2%的大豆粉、0. 05%的K2HP04、0. 5%的碳酸钙、0. 001% 的 FeSO4 7H20、0. 05% 的 MgSO4 7H20、0. 3% 的异丁醇，pH7. O9.根据权利要求I至5任一所述的一种珍贵橙色束丝放线菌发酵产生安丝菌素P-3的方法，其特征在于所述的液体发酵培养基中含有0. 5%的酵母提取物、2%的可溶性淀粉、0.5%的葡萄糖、1%的麦芽提取物、1%的大豆粉、0. 05%的K2HP04、0. 5%的碳酸钙、0. 001%的FeSO4 7H20、0. 05% 的 MgS047H20、0. 3% 的异丁醇、pH7. O10.根据权利要求I至5任一所述的一种珍贵橙色束丝放线菌发酵产生安丝菌素P-3的方法，其特征在于该方法，还包括如下步骤 发酵前培养配制种子培养基，采用甘油融化接种于种子培养基并进行培养操作，获得一级种子，经二次培养得到二级种子，二级种子接种到液体发酵培养基进行发酵； 所述的种子培养基的组分及重量百分比为甘油1%;葡萄糖1%;蛋白胨1%;酵母提取物 0. 5% ；pH 7. 2 ；所述的甘油融化接种是指_70°C保存的甘油种经融化后接种于种子培养基； 所述的培养操作是指在26-32°C环境下培养24-72h ； 所述的二次培养是指取一级种子按0. 5-3. 0%的接种量接种于种子培养基并进行培养操作11.根据权利要求10所述的一种珍贵橙色束丝放线菌发酵产生安丝菌素P-3的方法，其特征在于当二级接种后培养24h至48h后补加葡萄糖、蛋白质类营养物、醇类或醛类，直至发酵结束12.根据权利要求I至5任一所述的一种珍贵橙色束丝放线菌发酵产生安丝菌素P-3的方法，其特征在于珍贵橙色束丝放线菌以2-5%的菌密度接种到所述的液体发酵培养基中13.根据权利要求I至5任一所述的一种珍贵橙色束丝放线菌发酵产生安丝菌素P-3的方法，其特征在于该方法，还包括如下步骤 从发酵液中纯化安丝菌素P-3 体积比为11 31的乙酸乙酯和乙酸丁酯混合对发酵液进行萃取，萃取比例为1 1，浓缩萃取安丝菌素的有机溶剂层，重结晶，用硅胶或氧化铝吸附层析后蒸馏得到安丝菌素P-3

本发明涉及一种微生物发酵技术领域，具体涉及一种从珍贵橙色束丝放线菌制备安丝菌素P-3的方法