一种从猪小肠中提取肝素钠并联产蛋白粉的方法[0002]肝素钠是从动物内脏中提取的硫酸氨基葡聚糖的钠盐，属粘多糖类物质，可以用作抗凝血药。临床研究表明，肝素钠具有抗凝血作用外，还具有其他多种生物活性和临床用途，治疗急性静脉血栓和急性冠脉综合证、心绞痛、心肌梗塞、抗血栓、降血脂，可抑制体内体外血栓和动静血栓的形成，而又不影响血小板聚集和纤维蛋白原与血小板的结合，还用于减少癌症相关的静脉血栓的复发。[0003]我国肝素钠产品不仅需满足国内市场日益增长的需求，同时世界出口中也占首位。按国家市场的需求量，美国年需求8000亿单位，欧洲市场需求25000亿单位，南美市场大概需求6000亿单位。[0004]目前国内外一般是以猪小肠和牛肺为基础原料提取肝素钠。动物肺脏中虽然肝素钠含量高，但由于其组织特异性，存在大量杂质蛋白，肺组织肥大细胞中的蛋白与肝素钠结合非常牢固，导致不易分离提纯，而难以利用。我国肝素钠生产多以猪小肠粘膜作为原料，曾经有人发表过的发明专利中公开了一种利用猪小肠生产肝素钠的制备方法，在酶解步骤中，肠粘膜与水的重量比为1:7~9，用水量之大，不实用于大规模生产，同时，生产过程中滤渣被排弃，既污染环 境又浪费资源。该方法加入蛋白酶，加热升温后再加入盐进行盐解，这一过程使蛋白质被分解。实际上，在滤渣中含有可供我们利用的蛋白粉，该蛋白粉含有丰富的蛋白质、氨基酸、钙、磷、纤维素以及其他一些常量和微量元素，作为动物饲料易被消化吸收，是一种动物所必需的营养物质。
[0005]本发明的目的在于克服现有技术中所存在的上述不足，提供一种利用猪小肠提取肝素钠并联产蛋白粉的方法，既降低生产成本，又减少污染。[0006]为了实现上述发明目的，本发明提供了以下技术方案: 一种从猪小肠中提取肝素钠并联产蛋白粉的方法，包括以下步骤:
(1)酶解和盐解
收集好猪小肠新鲜的粘膜，将粘膜粉碎，打进分解罐中，测定肠粘膜重量，加入水搅拌均匀，调试好PH8.0~8.5，再按粘膜重量百分比为8%~15%的食用盐搅拌均匀后，升温到28°C~32°C加入粘膜重量百分比为0.05%~0.08%的2079碱性蛋白酶，升温到45°C~48°C再加入粘膜重量百分比为0.03%~0.06%的2079碱性蛋白酶，搅拌均匀，再调pH至
8.5，调解盐浓度在波美3.8~4.8升温至48°C~52°C保温2.5~3.0小时；
(2)分离蛋白粉
保温时间到后，快速升温至90°C~95°C，保温10~20分钟，分层过滤，滤渣经过电压、烘干得到蛋白粉，滤液为肝素钠溶液；
(3)提取肝素钠
吸附:收集步骤(2)中所有肝素钠滤液，打进吸附罐，加入离子交换水，调整盐浓度为波美2.0~2.5，pH7.72~8.0温度50°C~55°C，加入树脂进行离子交换，交换时间为10~12小时，交换吸附完的树脂用45°C~50°C温水进行清洗，用波美5度盐水清洗树脂5~10分钟；
洗脱:用波美20~22度的盐水搅拌洗脱第一次，洗脱3~4小时，洗脱温度为40°C~50°C，盐水和树脂的体积比例I~3:1 ;再用波美17~19度盐水进行搅拌第二次洗脱，洗脱2~3小时，洗脱温度为40°C~50°C，盐水和树脂的体积比例I~3:1 ;
沉淀、干燥:将两次洗脱液合并后，用食用酒精沉淀10~12小时，固液分离后将固形物干燥得肝素钠粗品。
[0007]上述方法，酶解和盐解同时进行，并且优选了盐解、酶解的条件，在上述条件下，能确保肝素钠的提取率不受影响，并且能同时从猪小肠中分离较大量的蛋白粉。
[0008]优选的，上述提取肝素钠并联产蛋白粉的方法，步骤(1)中肠粘膜与水的重量比为1:1~3。上述比例范围，在生产量较大的情况下，可明显节约用水。
[0009]优选的，上述提取肝素钠并联产蛋白粉的方法，步骤(2)中所述过滤的方法为:将步骤(1)所得产品上层用60-100目尼龙布过滤后，滤渣用体积比为1:1的75°C~85°C水清洗，滤液用的60-100目尼龙布过滤；将步骤(1)所得的产品下层用的60-100目尼龙布过滤；合并所有滤渣，滤渣经过电压、烘干得蛋白粉，滤液为肝素钠溶液。上述过滤方法，有利于肝素钠与蛋白粉更好分离，并且能达到较高的收率。
[0010]优选的，上述提取肝素钠并联产蛋白粉的方法，步骤(3)中所述树脂为罗马哈斯98树脂，罗马哈斯98树脂再生吸附力强。所述罗马哈斯98树脂的用量每根猪小肠用20g~30g,优选的，每根猪小肠用20g树脂，此用量下既不浪费树脂，又能保证树脂能充分吸附肝素钠。
[0011]优选的，沉淀干燥中使用的食用酒精与洗脱液的体积比2~4:1，在此比例范围能，能更充分地将肝素钠沉淀出来。
[0012]优选的，沉淀干燥中干燥的温度为80°C~85°C，干燥时间12~15小时；上述干燥条件有利于确保肝素钠的活性，温度控制在85°C内干燥不损害基因。
[0013]与现有技术相比，本发明的有益效果:
现有技术从猪小肠中提取肝素钠，采用酶解法，提取一亿个单位的肝素钠需要1700~1750根猪小肠；采用盐解法，提取一亿个单位的肝素钠需要1700~1800根猪小肠。本发明采用酶解和盐解相结合同时进行，能确保肝素钠的提取率不受影响，按照本发明的方法，提取一亿个单位的肝素钠只需要1500~1600根猪小肠，肝素钠的产率较高；并且能同时从猪小肠中提取较大量的蛋白粉粗品，提取蛋白粉蛋白含量在40%以上，同时，本发明还能联产蛋白粉，比单产方法设备利用率高、节约资源、可降低肝素钠、蛋白粉生产成本。充分利用猪小肠资源，增加猪小肠的附加值，同时，减少含蛋白废液废渣对环境污染，变废为宝。

[0014]下面结合试验例及对本发明作进一步的详细描述。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实施例，凡基于本
所实现的技术均属于本发明的范围。
[0015]实施例1
从猪小肠中提取肝素钠并联产蛋白粉的方法，采用以下步骤:
(1)酶解和盐解
取500根猪小肠洗净，收集其新鲜的粘膜550Kg，加入825Kg重量的水，搅拌均匀后，pH值为8.0，加入85Kg的食用盐，搅拌均匀后，升温至28°C，加入0.2kg2079碱性蛋白酶，升温至45°C，加入0.3kg 2079碱性蛋白酶，搅拌均匀，再调pH至8.5，调整盐度为波美度4.5，50°C保温2.5小时后，升温至95°C，保温10分钟。
[0016](2)分离蛋白粉
将步骤(1)所得的产品，用60目尼龙布过滤后，滤渣用1:1的85°C水清洗；再用的80目尼龙布过滤，压榨后得到180kg蛋白粉粗品，其蛋白粉含量为40%，合并过滤的滤液用于提取肝素钠。
[0017](3)提取肝素钠
吸附:将过滤得到的肝素钠溶液，调整PH值为8，盐度为波美度2.2、温度为55°C，放入IOkg罗马哈斯98树脂进行离子变换12小时，吸附完的树脂用50°C温水进行清洗，用波美5度盐水清洗10分钟。
[0018]洗脱:用波美20度的食盐水搅拌洗脱第一次4小时，温度保持在40°C，食盐水和树脂的比例2:1 ;再用波美19`度食盐水进行搅拌第二次洗脱2小时，温度保持在40°C，盐水和树脂的比例1:1。
[0019]沉淀干燥:将两次洗脱液合并后，用食用酒精沉淀10小时，食用酒精与洗脱液的体积比4:1，再脱水、压干、85°C烘14小时得0.3043个亿单位肝素钠粗品。
[0020]实施例2
从猪小肠中提取肝素钠并联产蛋白粉的方法，采用以下步骤:
Cl)酶解和盐解
取1000根猪小肠洗净，收集其新鲜的粘膜llOOKg，加入2000Kg重量的水，搅拌均匀后，，调节pH值为8.5，加入180Kg的食用盐，搅拌均匀后，升温至32°C，加入0.4kg2079碱性蛋白酶，升温46°C，加入0.7Kg2079碱性蛋白酶，搅拌均匀，再调pH至8.5，调整盐度为波美度4.5，50°C保温1.5小时后调节pH值为8.5，再保温I小时，升温至95°C，保温10分钟；
(2)分离蛋白粉
将步骤(1)所得的产品，用60目尼龙布过滤后，滤渣用1:1的85°C水清洗；再用的80目尼龙布过滤后，压榨后得到480kg蛋白粉粗品，其蛋白粉含量为43%，合并过滤的滤液用于提取肝素钠；
(3)提取肝素钠
吸附:将过滤得到的肝素钠提取液，调整PH值为7.9，盐度为波美度2.2、温度为60°C，放入25kg罗马哈斯98树脂进行离子变换12小时。吸附完的树脂用50°C温水进行清洗，用波美5度盐水清洗10分钟；
洗脱:用波美20度的食盐水搅拌洗脱第一次4小时，温度保持在45°C，食盐水和树脂的比例3:2 ;再用波美19度食盐水进行搅拌第二次洗脱3小时，温度保持在40°C，盐水和树脂的比例2:1;。
[0021]沉淀干燥:将两次洗脱液合并后，用食用酒精沉淀12小时，食用酒精与洗脱液的体积比3:1，再脱水、压干、80°C烘13小时得0.6425个单位肝素钠粗品。
[0022]实施例3
从猪小肠中提取肝素钠并联产蛋白粉的方法，采用以下步骤:
Cl)酶解和盐解
取1500根猪小肠洗净，收集其新鲜的粘膜1650Kg，加入2500Kg重量的水，搅拌均匀后，调节PH值为8.0，加入250kg的食用盐，搅拌均匀后，升温至30°C，加入0.55kg2079碱性蛋白酶，升温至48°C，加入Ikg 2079碱性蛋白酶，搅拌均匀，再调pH至8.5，调整盐度为波美度4.2，52°C保温1.5小时后调节pH值为8.5，再保I小时，升温至90°C，保温8分钟；
(2)分离蛋白粉
将步骤(1)所得的产品，用60目尼龙布过滤后，滤渣用1:1的80°C水清洗；滤液最后用100目尼龙布过滤后，滤渣后压榨后得到529kg蛋白粉粗品，其蛋白粉含量为45%，合并过滤的滤液用于提取肝素钠；
(3)提取肝素钠
吸附:将过滤得到的肝素钠提取液，调整PH值为7.8，盐度为波美度2.0，温度为50°C，放入45kg罗马哈斯98树脂进行离子变换11小时。吸附完的树脂用50°C温水进行清洗，用波美5度盐水清洗8分钟。
[0023]洗脱:用波美20度的食盐水搅拌洗脱第一次3小时，温度保持在40°C，食盐水和树脂的比例1:1 ;再用波美18度食盐水进行搅拌第二次洗脱2小时，温度保持在45°C，盐水和树脂的比例3:1。
[0024]沉淀干燥:将两次洗脱液合并后，用食用酒精沉淀11小时，食用酒精与洗脱液的体积比2:1，再脱水、压干、80°C烘8小时得0.9923个单位肝素钠粗品。