专利名称：三肽类似物,其制备方法,含它们的药物组合物及其用途的制作方法 多肽类化合物是海洋生物活性成分之一，具有结构新颖，作用专一，活性显著的特点。经过多年的探索和积累，发现海洋多肽类化合物的生物活性主要集中于抗肿瘤和抗真菌方面。它们常常含有结构特异的氨基酸或氨基酸衍生物，形成特殊的线状或环状结构，具有广泛和强效的生物活性。Hemiasterlin是从自巴布亚新几内亚海绵Cymbastela sp.中分离得到的抗有丝分裂三肽，具有很强的细胞毒性，它可能是通过抑制纺锤体微管动力学产生细胞毒性，从而引起细胞凋亡。发明目的本发明的目的是寻找新的抗肿瘤多肽类化合物或其先导化合物。发明简述本发明人经研究现已发现式(I)的三肽类似物A-B-C(I)或其立体异构体具有良好的抗肿瘤活性，因此式(I)三肽类似物或其立体异构体有可能作为药物用于治疗癌症。本发明涉及式(I)三肽类似物或其立体异构体，其包括A-B-C(I)其中A为L-型或D-型芳香性天然或非天然氨基酸，芳香性部分选自有一个或多个取代基的吲哚环、苯环、萘环、蒽环、菲环、四氢喹啉环、四氢异喹啉环、苯并四氢异喹啉环，取代基包括但不限于卤素、硝基、羟基、甲氧基、亚甲二氧基、氨基、胺甲基、N，N-二(C1-C4直链或支链烷基)胺甲基、C3-C7环胺甲基、C3-C7含氮、氧、硫杂原子的环胺甲基、磺酸甲基、磷酸酯甲基。氨基酸中的氨基部分可被取代，取代基包括但不限于C1-C4直链或支链烷基、C3-C7环烷基、各种氨基保护基，氨基保护基包括苄基、取代苄基、叔丁氧羰基、苯氧羰基、苄氧羰基、芴甲氧羰基、C1-C5羧酯基、C1-C4直链或支链烷基、C3-C7环烷基；B为选自Gly、Ala、Val、Leu、Nle、Ile、Pro、Tle、MeVal的天然或非天然亲脂性氨基酸；C为C1-C4直链或支链烷基取代的γ-氨基丁酸、C1-C4直链或支链烷基取代的γ-氨基丁烯酸及其插烯同系物、一个或多个取代基的3-氨基苯甲酸、1-(C1-C4直链或支链烷基取代的3-氨基环己烯)甲酸，或为C1-C4直链或支链烷基取代的γ-氨基丁酸、C1-C4直链或支链烷基取代的γ-氨基丁烯酸及其插烯同系物、一个或多个取代基的3-氨基苯甲酸、1-(C1-C4直链或支链烷基取代的3-氨基环己烯)甲酸与天然或非天然亲脂性氨基酸形成的二肽，氨基上的氢可被C1-C4直链或支链烷基取代或不被取代；苯环上的取代基包括但不限于卤素、硝基、羟基、羧基、三氟甲基、亚甲二氧基、亚甲二硫基、C1-C6直链或支链烷基、C3-C7环烷基、C1-C5烷氧基、氨基、C1-C5酰胺基，亲脂性氨基酸可为下列氨基酸Gly、Ala、Val、Leu、Nle、Ile、Pro、Tle、MeVal。本发明涉及含至少一个式(I)三肽类似物或其立体异构体，及药用载体或赋形剂的药物组合物，A-B-C(I)其中A为L-型或D-型芳香性天然或非天然氨基酸，芳香性部分选自有一个或多个取代基的吲哚环、苯环、萘环、蒽环、菲环、四氢喹啉环、四氢异喹啉环、苯并四氢异喹啉环，取代基包括但不限于卤素、硝基、羟基、甲氧基、亚甲二氧基、氨基、胺甲基、N，N-二(C1-C4直链或支链烷基)胺甲基、C3-C7环胺甲基、C3-C7含氮、氧、硫杂原子的环胺甲基、磺酸甲基、磷酸酯甲基。氨基酸中的氨基部分可被取代，取代基包括但不限于C1-C4直链或支链烷基、C3-C7环烷基、各种氨基保护基，氨基保护基包括苄基、取代苄基、叔丁氧羰基、苯氧羰基、苄氧羰基、芴甲氧羰基、C1-C5羧酯基、C1-C4直链或支链烷基、C3-C7环烷基；B为选自Gly、Ala、Val、Leu、Nle、Ile、Pro、Tle、MeVal的天然或非天然亲脂性氨基酸；C为C1-C4直链或支链烷基取代的γ-氨基丁酸、C1-C4直链或支链烷基取代的γ-氨基丁烯酸及其插烯同系物、一个或多个取代基的3-氨基苯甲酸、1-(C1-C4直链或支链烷基取代的3-氨基环己烯)甲酸，或为C1-C4直链或支链烷基取代的γ-氨基丁酸、C1-C4直链或支链烷基取代的γ-氨基丁烯酸及其插烯同系物、一个或多个取代基的3-氨基苯甲酸、1-(C1-C4直链或支链烷基取代的3-氨基环己烯)甲酸与天然或非天然亲脂性氨基酸形成的二肽，氨基上的氢可被C1-C4直链或支链烷基取代或不被取代；苯环上的取代基包括但不限于卤素、硝基、羟基、羧基、三氟甲基、亚甲二氧基、亚甲二硫基、C1-C6直链或支链烷基、C3-C7环烷基、C1-C5烷氧基、氨基、C1-C5酰胺基，亲脂性氨基酸可为下列氨基酸Gly、Ala、Val、Leu、Nle、Ile、Pro、Tle、MeVal。本发明还涉及制备式(I)三肽类似物或其立体异构体的方法，其包括1)将化合物Boc-B-OH与C-OP在DMF-DCM，NMM，DCC-HOBt中反应，生成Boc-B-C-OP，其中B，C如上所述定义，P为C1-4烷基；2)将1)中所得产物在盐酸/二氧六环中脱去氨基保护基，生成HCl·B-C-OP；3)将2)中产物HCl·B-C-OP与Boc-A-OH在DMF，DCM，NMM，DCC-HOBt中反应，生成Boc-A-B-C-OP；4)将3)中产物Boc-A-B-C-OP在氢氧化锂/甲醇-四氢呋喃溶液中皂化，然后用柠檬酸酸化，生成Boc-A-B-C-OH； 5)将4)中产物Boc-A-B-C-OH如2)中所述进行反应，生成脱去氨基保护基的HCl·A-B-C-OH。本发明还涉及式(I)三肽类似物或其立体异构体在制备用于治疗癌症的药物中的用途。涉及的肿瘤细胞如成纤维细胞MRC5CV1、膀胱癌细胞T24、鼠白血病细胞L1210、鼠白血病细胞P388、人肺癌细胞A549、人结肠癌细胞HT29、人结肠癌细胞LOVO、猴肾成纤维细胞CV1、人乳腺癌细胞MCF7、人恶性胶质瘤/星形细胞瘤细胞U373、人卵巢癌细胞HEY、表皮样瘤细胞系KB、黑素瘤细胞B16、MDA-MB-435乳腺癌细胞、HeLa S3子宫颈癌细胞、人红白血病细胞K562、人卵巢癌细胞OVCA2780、人胃印戒癌细胞Kato-III等。
发明详述术语“C1-4烷基”指含1-4个碳原子的直链或支链烷基，如甲基，乙基，丙基，异丙基，丁基，仲丁基，异丁基，叔丁基。
本发明所用术语“式(I)三肽类似物立体异构体”是指其相应的D-或L-立体构型。
在本发明中使用的缩写具有下面的含义Ala-丙氨酸，Gly-甘氨酸，Ile-异亮氨酸，Nle-正亮氨酸，Tle-叔丁基甘氨酸，Leu-亮氨酸，Val-缬氨酸，MeVal-甲基缬氨酸，Phe-苯丙氨酸，Pro-脯氨酸，mAB-3-氨基苯甲酸，MAB-3-氨基-4-甲基苯甲酸，γ-Abu-γ-氨基丁酸，
BA-苯甲胺，BEA-苯乙胺，DEA-二乙胺，DCHA-二环己胺，Mpl-吗啡啉，NMM-N-甲基吗啡啉，Prd-哌啶，TEA-三乙胺，Thp-四氢吡咯，DCM-二氯甲烷，DMF-二甲基甲酰胺，DCC-二环己基碳二亚胺，HOBt-1-羟基苯并三唑，Boc-叔丁氧羰基，THF-四氢呋喃。
根据本发明，本发明化合物的可药用盐包括其无机或有机酸盐或碱盐，其包括但不限于三氟醋酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、硝酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、磷酸氢盐、乙酸盐、丙酸盐、丁酸盐、草酸盐、三甲基乙酸盐、己二酸盐、藻酸盐、乳酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、富马酸盐、苦味酸盐、天冬氨酸盐、葡萄酸盐、苯甲酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐和双羟萘酸盐；碱盐包括但不限于铵盐、碱金属盐如钠和钾盐、碱土金属盐如钙和镁盐、有机碱盐如二环己胺和N-甲基-D-葡糖胺盐、以及氨基酸盐如精氨酸和赖氨酸盐。
根据本发明，式(I)三肽类似物或其立体异构体可按本领域已知方法、文献方法或下面所示的反应路线1制备 反应路线1在反应路线1中，化合物Boc-B-OH(B如上所定义)与C-OP(C如上所定义，P为C1-4烷基，其可选自甲基，乙基，异丙基，丁基，仲丁基，异丁基，叔丁基，优选甲基和乙基)在DMF-DCM，NMM，DCC-HOBt中反应，生成Boc-B-C-OP。将Boc-B-C-OP经4摩尔盐酸/二氧六环脱保护基，生成HCl·B-C-OP。将HCl·B-C-OP与Boc-A-OH(A如上所定义)在DMF-DCM，NMM，DCC-HOBt中反应，生成Boc-A-B-C-OP。将Boc-A-B-C-OP经1摩尔氢氧化锂/甲醇-四氢呋喃皂化，生成Boc-A-B-C-OH。将Boc-A-B-C-OH经4摩尔盐酸/二氧六环脱保护基，生成HCl·A-B-C-OH。
根据本发明，式(I)三肽类似物的立体异构体包括D-和/或L-构型。
根据本发明，式(I)三肽类似物及其立体异构体在人癌症细胞筛选中显示较好的抑制细胞生长的活性。
本发明涉及含有作为活性成分的有效剂量的至少一种式(I)三肽类似物和/或其立体异构体以及常规药物赋形剂或辅剂的药物组合物。通常本发明药物组合物含有0.1～90％的式(I)三肽类似物和/或其立体异构体。药物组合物可根据本领域已知的方法制备。用于此目的时，如果需要，可将式(I)三肽类似物和/或其立体异构体与一种或多种固体或液体药物赋形剂和/或辅剂结合，制成可作为人用的适当的施用形式或剂量形式。
本发明式(I)三肽类似物及其立体异构体或含有它的药物组合物可以单位剂量形式给药，给药途径可为肠道或非肠道，如口服、肌肉、皮下、鼻腔、口腔粘膜、皮肤、腹膜或直肠等。给药剂型例如片剂、胶囊、滴丸、气雾剂、丸剂、粉剂、溶液剂、混悬剂、乳剂、颗粒剂、脂质体、透皮剂、口含片、栓剂、冻干粉针剂等。可以是普通制剂、缓释制剂、控释制剂及各种微粒给药系统。为了将单位给药剂型制成片剂，可以广泛使用本领域公知的各种载体。关于载体的例子，如稀释剂与吸收剂，如淀粉、糊精、乳糖、甘露醇、蔗糖、葡萄糖、硫酸钙、氯化钠、尿素、碳酸钙、白陶土、微晶纤维素、硅酸铝等；湿润剂与粘合剂，如水、甘油、聚乙二醇、乙醇、丙醇、淀粉浆、糊精、糖浆、蜂蜜、葡萄糖溶液、阿拉伯胶浆、明胶浆、羧甲基纤维素钠、紫胶、甲基纤维素、磷酸钾、聚乙烯吡咯烷酮等；崩解剂，如干燥淀粉、海藻酸盐、琼脂粉、褐藻淀粉、碳酸氢钠与枸橼酸、碳酸钙、聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯、十二烷基磺酸钠、甲基纤维素、乙基纤维素等；崩解抑制剂，如蔗糖、三硬脂酸甘油酯、可可脂、氢化油等；吸收促进剂，如季铵盐、十二烷基硫酸钠等；润滑剂，如滑石粉、二氧化硅、玉米淀粉、硬脂酸盐、硼酸、液体石蜡、聚乙二醇等。还可以将片剂进一步制成包衣片，如糖包衣片、薄膜包衣片、肠溶包衣片，或双层片和多层片。为了将给药单元制成丸剂，可以广泛使用本领域公知的各种载体。关于载体的例子是，例如稀释剂与吸收剂，如葡萄糖、乳糖、淀粉、可可脂、氢化植物油、聚乙烯吡咯烷酮、Gelucire、高岭土、滑石粉等；粘合剂如阿拉伯胶、黄蓍胶、明胶、乙醇、蜂蜜、米糊或面糊等；崩解剂，如琼脂粉、干燥淀粉、海藻酸盐、十二烷基磺酸钠、甲基纤维素、乙基纤维素等。为了将给药单元制成栓剂，可以广泛使用本领域公知的各种载体。关于载体的例子是，例如聚乙二醇、卵磷脂、可可脂、高级醇、高级醇的酯、明胶、半合成甘油酯等。为了将给药单元制成胶囊，将有效成分式(I)三肽类似物或其立体异构体与上述的各种载体混合，并将由此得到的混合物置于硬胶囊或软胶囊中。也可将有效成分式(I)三肽类似物或其立体异构体制成微囊剂，混悬于水性介质中制成混悬剂，亦可装入硬胶囊中或制成注射剂应用。为了将给药单元制成注射用制剂，如溶液剂、乳剂、冻干粉针剂和混悬剂，可以使用本领域常用的所有稀释剂，如水、乙醇、聚乙二醇、1，3-丙二醇、乙氧基化的异硬脂醇、多氧基化的异硬脂醇、聚氧乙烯山梨醇脂肪酸酯等。另外，为了制备等渗注射液，可以向注射用制剂中添加适量的氯化钠、葡萄糖或甘油，此外，还可以添加常规的助溶剂、缓冲剂、pH调节剂等。
此外，如需要，也可以向药物制剂中添加着色剂、防腐剂、香料、矫味剂、甜味剂或其它材料。
实施例下面的实例及生物活性实验用来进一步说明本发明，但这并不意味着对本发明的任何限制。
实施例化合物熔点由RY-1型熔点仪测定，温度未经校正；1H NMR图谱由Bruker ARX 400型或US Varian Unity Inova 600型核磁仪测定；FAB质谱由Zabspect高分辨磁质谱仪测定；元素分析由CarloErba 1106型元素分析仪测定；紫外光谱由UV-260紫外可见分光光度计测定；红外光谱由Magna IRTM 550红外仪测定。实施例制备所用反应试剂均为商品化产品。
实施例1L-N-Ac-β-Nal-Val-mAB(QTP-007)N-乙酰-(2-萘甲基)丙氨酸乙酯的制备2-溴甲基萘的制备2-甲基萘71克(0.5mol)用400毫升四氯化碳溶解，加入N-溴代丁二酰亚胺(NBS)89克(0.5mol)，搅拌，NBS不溶解。假如偶氮二异丁腈2.5克，油浴缓慢加热，～95℃时，反应液剧烈沸腾，上冲，立即停止加热，水浴冷却，反应立即缓和，继续油浴加热，液面上有泡沫状物质悬浮。补加偶氮二异丁腈8.5克，回流3.5小时(98℃±3)。反应液于冰水浴中冷却，滤除白色固体(丁二酰亚胺)，四氯化碳洗两次。滤液浓缩，得黄色液体，冰浴，析出黄色结晶。滤集得淡黄色结晶78.2克(70.7％)，m.p.48～51℃。
N-乙酰-(2-萘甲基)丙二酸二乙酯的制备将钠8.14(0.354mol)克在400毫升绝对无水乙醇中回流(98±3℃)，至钠完全溶解。冷却至室温(为白色混浊液体)后，加入乙酰氨基丙二酸二乙酯76.9克(0.354mol)，搅拌溶解。加入2-溴甲基萘78.2克(0.354mol)，反应液中逐渐出现固体，油浴回流(100℃±3)3小时。减压蒸出乙醇约300毫升后，于冰水浴条件下，加入500毫升水，立即有淡黄色固体析出。滤集结晶，水洗三次，室温干燥，称重得103.3克(81.7％)，m.p.123～125℃。TLC检测石油醚-乙酸乙酯(3∶1)，Rf＝0.30。
N-乙酰-(2-萘甲基)丙二酸单乙酯的制备N-乙酰-(2-萘甲基)丙二酸二乙酯50.0克(0.14mol)，用450毫升乙醇溶解，室温滴加6N氢氧化钠30毫升，TLC监测至初始反应物消失(2.5小时)。冰水浴条件下，滴加6N盐酸(～30毫升)调pH～3，得白色混悬液。浓缩得白色糊状雾，加入420毫升水，抽滤，得白色粉状固体，水洗四次，室温干燥。称重得35.82克(77.2％)。
N-乙酰-(2-萘甲基)丙氨酸乙酯的制备N-乙酰-(2-萘甲基)丙氨酸乙酯17.9克(0.054mol)用150毫升二氧六环溶解，油浴回流(108℃±3)3.5小时。反应液浓缩得黄色油状液体，加入100毫升乙酸乙酯和100毫升水，振摇分液，乙酸乙酯层分别用饱和碳酸氢钠、饱和氯化钠洗两次，乙酸乙酯层用无水硫酸钠干燥。滤除干燥剂，滤液浓缩，得黄色油状液体，放置，有结晶析出。滤集结晶，石油醚洗两次，室温干燥。称重得12.7克(82.3％)，m.p.123～125℃。TLC检测石油醚∶乙酸乙酯(1∶1)，Rf＝0.56。
拆分称量N-乙酰-(2-萘甲基)丙氨酸乙酯11.0克(38.6mmol)，于研钵中研成细粉，混悬于280毫升水中(含氯化钠2.0克)，水浴(37℃±1)，饱和碳酸氢钠调pH7.60，溶液呈白色混悬状。加入枯草杆菌蛋白酶A～2.0毫克，pH值迅速下降，用0.5N氢氧化钠调pH7.60左右。2.5小时后，pH值下降缓慢，补加α-糜蛋白酶～5毫克，pH值迅速下降，继续用0.5N氢氧化钠调pH7.40左右。5.5小时后，pH值基本保持恒定，继续搅拌1.0小时。反应液用乙酸乙酯萃取至紫外灯下(λ＝254nm)无吸收为止，乙酸乙酯层用饱和氯化钠洗两次，无水硫酸钠干燥。滤除干燥剂，滤液浓缩，得无色块状结晶5.38克(97.8％)(D-N-乙酰-(2-萘甲基)丙氨酸乙酯)，m.p.149.0～149.5℃，[α]D25＝-11.8°(C＝2，MeOH∶DMF＝1∶2)；水层于冰水浴中用浓盐酸调pH～2，滴加过程中不断析出白色固体，滤集得白色针状结晶3.85克(77.6％)(L-N-乙酰-(2-萘甲基)丙氨酸)，m.p.183～184.0℃，[α]D25＝+37.7°(C＝2，MeOH∶DMF＝1∶2)。
L-N-乙酰-(2-萘甲基)丙氨酸的1H NMR(DMSO)δ7.3～8.1(m，4H，Ar-H)，5.8(d，1H，-NHCO-)，4.9(t，1H，-CHCH2-)，3.5～3.7(m，2H，-CH2CH-)，2.0(s，3H，-COCH3)。
水解对上述所得(L)-N-乙酰-(2-萘甲基)丙氨酸、(D)-N-乙酰-(2-萘甲基)丙氨酸乙酯用6N盐酸回流水解，得到(L)-(2-萘甲基)丙氨酸盐酸盐，[α]D25＝-8.0°(C＝2，1M HCl)；(D)-(2-萘甲基)丙氨酸盐酸盐，[α]D25＝+7.5°(C＝2，1M HCl)。
3-氨基苯甲酸甲酯盐酸盐的制备将无水甲醇30毫升用冰盐浴冷却至-10℃，滴加二氯亚砜7.8毫升，滴加过程中保持反应液内温-8～-10℃，滴加完毕后，加入3-氨基苯甲酸4.1克(30毫摩尔)，室温避光搅拌两天，得到浅紫色透明溶液。减压蒸去溶剂，得到浅紫色结晶。用无水乙醇-乙醚重结晶，得到类白色固体5.58克(99.2％)。TLC检测氯仿-甲醇-醋酸(16∶1∶0.5)，Rf＝0.86，FAB-MS[M+H]+＝152，m.p.195.0～200℃。
L-N-Ac-β-Nal-Val-mAB(QTP-007)的制备将3-氨基苯甲酸甲酯盐酸盐3.75克(20mmol)，溶于20毫升二氯甲烷中，冰浴搅拌下加入N-甲基吗啡啉2.22毫升(20mmol)，10分钟后，加入Boc-Val-OH 4.35克(20mmol)，溶解。加入HOBt 2.84克(21mmol)的DMF溶液6ml，冰浴10分钟后，加入DCC 4.33克(21mmol)。继续保持冰浴2小时后，室温反应12小时。浓缩，加入乙酸乙酯50毫升，水洗一次后，分别用10％柠檬酸、饱和碳酸氢钠和饱和氯化钠各洗三次，乙酸乙酯层用无水硫酸钠干燥5小时。滤除干燥剂，浓缩滤液，得黄色油状物。于冰水浴中，加入石油醚，刮出固体。取该固体0.35克(1mmol)，加入4M盐酸/二氧六环约5毫升，溶解，室温搅拌1小时。浓缩，得黄色油状液体。二氯甲烷溶解，冰浴搅拌下，加入N-甲基吗啡啉0.11毫升(1mmol)，10分钟后，加入L-N-乙酰-(1-萘甲基)丙氨酸0.26克(1mmol)，溶解。加入HOBt 0.14克(1.05mmol)的DMF溶液，冰浴10分钟，加入DCC 0.22克(1.05mmol)。冰浴2小时后，室温反应12小时。浓缩，加入乙酸乙酯10毫升，水洗后，分别用10％柠檬酸、饱和碳酸氢钠和饱和氯化钠各洗三次，乙酸乙酯层用无水硫酸钠干燥5小时。滤除干燥剂，浓缩滤液，得黄色油状物。加入石油醚20毫升，冰浴条件下研磨，得类白色固体。将此固体用甲醇-四氢呋喃5毫升溶解，冰水浴条件下，滴加1M氢氧化锂，30分钟后，室温反应10小时。冰水浴中，滴加0.5M盐酸水溶液，调节pH～3.0，乙酸乙酯提取三次(10毫升×3)，乙酸乙酯层用水、饱和氯化钠洗两次，用无水硫酸钠干燥。滤除干燥剂，浓缩滤液，得到呈白色固体的标题化合物。ESI-MS[M+H]+＝476.3，纯度95.0％。
依据与实施例相同或相似的方法制备得到了以下化合物L-N-Ac-β-Nal-Val-Val-mAB(QTP-001)分子量574.6纯度95％L-N-Ac-α-Nal-Val-Val-mAB(QTP-002)分子量574.6纯度95％L-N-Ac-β-Nal-Val-Leu-mAB(QTP-003)分子量588.6纯度95％L-N-Ac-α-Nal-Leu-Leu-mAB(QTP-004)分子量602.6纯度92％L-N-Ac-α-Nal-Pro-mAB(QTP-005)分子量473.3纯度85％L-N-Ac-β-Nal-Leu-Val-mAB(QTP-006)分子量574.6纯度92％L-N-Ac-β-Nal-Val-mAB(QTP-007)分子量475.3纯度95％L-N-Ac-α-Nal-Val-mAB(QTP-008)分子量475.3纯度92％L-N-Ac-β-Nal-Leu-mAB(QTP-009)分子量489.3纯度90％L-N-Ac-α-Nal-Va1-Leu-mAB(QTP-010)分子量574.6纯度91％L-N-Ac-α-Nal-Leu-mAB(QTP-011)分子量489.3纯度88％L-N-Ac-β-Nal-Leu-Leu-mAB(QTP-012)分子量602.6纯度85％L-N-Ac-α-Nal-Gly-mAB(QTP-025)分子量433.3纯度98％L-N-Boc-(p-Mm)Phe-Pro-mAB HCl(QTP-026) 分子量616.8纯度85％L-N-Boc-(p-Mm)Phe-Val-mAB HCl(QTP-027) 分子量618.8纯度88％L-N-Boc-(p-Pym)Phe-Val-mAB HCl(QTP-028) 分子量602.8纯度80％L-N-Boc-(p-DiEm)Phe-Val-mAB HCl(QTP-029) 分子量604.8纯度80％D-N-Boc-(p-DiEm)Phe-Val-mAB HCl(QTP-030) 分子量604.8纯度85％L-N-Boc-(p-DiMm)Phe-Gly-mAB HCl(QTP-031) 分子量571.3纯度85％L-N-Ac-β-Nal-Val-Val-MAB(QTP-032)分子量588.6纯度90％L-N-Ac-α-Nal-Val-Val-MAB(QTP-033)分子量588.6纯度90％L-N-Ac-β-Nal-Val-Leu-MAB(QTP-034)分子量616.6纯度85％L-N-Ac-α-Nal-Pro-MAB(QTP-035)分子量487.3纯度85％L-N-Ac-β-Nal-Val-MAB(QTP-036)分子量489.3纯度90％L-N-Ac-α-Nal-Val-MAB(QTP-037)分子量489.3纯度92％L-N-Ac-β-Nal-Leu-MAB(QTP-038)分子量503.3纯度85％L-N-Ac-α-Nal-Leu-MAB(QTP-039)分子量503.3纯度85％L-N-Ac-α-Nal-Gly-MAB(QTP-040)分子量447.3纯度95％L-N-Boc-(p-Mm)Phe-Pro-MAB HCl(QTP-041)分子量630.8纯度80％L-N-Boc-(p-Pym)Phe-Val-MAB HCl(QTP-042)分子量616.8纯度85％D-N-Boc-(p-DiEm)Phe-Val-MAB HCl(QTP-043)分子量630.8纯度85％L-N-Boc-(p-DiMm)Phe-Gly-MAB HCl(QTP-044)分子量585.3纯度85％L-N-Boc-(p-Chfm)Phe-Pro-MAB HCl(QTP-045)分子量580.3纯度80％L-N-Ac-α-Nal-Gly-ABE(QTP-046)分子量445.3纯度95％L-N-Boc-Tic-Tle-ABE(QTP-047)分子量473.6纯度90％实施例2L-N-Boc-(p-Mm)Phe-Pro-(m)Abu(QTP-024)L-N-Boc-(对-吗啉甲基)苯丙氨酸盐酸盐的制备将L-N-Ac-PheOEt白色结晶10克(43.5毫摩尔)溶于80毫升氯甲醚中，冰水浴控制反应液内温0℃，加入新炒制的氯化锌25克(180毫摩尔)，搅拌，使氯化锌分散均匀。保持反应液内温0℃，反应50小时。减压抽尽溶剂后，冰水浴条件下加入水100毫升，乙酸乙酯萃取(25毫升×4)液合并后，分别用饱和碳酸氢钠、饱和氯化钠、水洗三次，乙酸乙酯层用无水硫酸钠进行干燥。滤除干燥剂，滤液浓缩，得到淡黄色油状液体。加入少量乙醚，于冰水浴中析出白色针状结晶。取该结晶1.0克(3.52毫摩尔)，无水乙醇3.5毫升溶解，加入吗啡啉0.70毫升(7.04毫摩尔)，室温反应过夜。滤除固体，浓缩滤液，加入水10毫升，乙酸乙酯萃取(10毫升×3)，乙酸乙酯层分别用水、饱和氯化钠洗两次，无水硫酸钠干燥。滤除干燥剂，滤液浓缩，得到无色粘稠液体，放置后析出白色固体。m.p.78～81℃。该白色固体用6M盐酸水溶液回流6小时，浓缩，得到白色固体。取该白色固体0.34克(1.0毫摩尔)，用水-二氧六环(1∶1)10毫升溶解，加入碳酸钾0.30克(2.2毫摩尔)，溶解，加入叔丁氧酐0.24克(1.1毫摩尔)。室温反应22小时。浓缩反应液，加入水10毫升，乙醚萃取(10毫升×4)。水相于冰水浴条件下，用柠檬酸酸化至pH～2.0，用正丁醇萃取(15毫升×4)，正丁醇层用水洗两次，浓缩，得到油状液体，加入乙醚，冰水浴条件下刮出固体，[α]D25＝+17.5°(C＝0.6，95％EtOH)。元素分析(％)C 56.54，H 7.67，N 6.72。ESI-MS[M+H]+＝365。
4-氨基丁酸甲酯盐酸盐的制备将无水甲醇50毫升用冰盐浴冷却至-10℃，滴加二氯亚砜13毫升，滴加过程中保持反应液内温-8～-10℃，滴加完毕后，加入3-氨基苯甲酸5.16克(50毫摩尔)，室温搅拌两天，得到无色透明溶液。减压蒸去溶剂，得到白色结晶。用无水乙醇-乙醚重结晶，得到白色固体7.63克(99.3％)，m.p.73～75℃，FAB-MS[M+H]+＝118。
L-N-Boc-(p-Mm)Phe-Pro-(m)Abu(QTP-024)的制备
将4-氨基丁酸甲酯盐酸盐1.54克(10mmol)，溶于10毫升二氯甲烷中，冰浴搅拌下加入N-甲基吗啡啉1.11毫升(10mmol)，10分钟后，加入Boc-Pro-OH 2.17克(10mmol)，溶解。加入HOBt 1.42克(10.5mmol)的DMF溶液2ml，冰浴10分钟后，加入DCC 2.21克(10.5mmol)。继续保持冰浴2小时后，室温反应12小时。浓缩，加入乙酸乙酯20毫升，水洗一次后，分别用10％柠檬酸、饱和碳酸氢钠和饱和氯化钠各洗三次，乙酸乙酯层用无水硫酸钠干燥5小时。滤除干燥剂，浓缩滤液，得黄色油状物。于冰水浴中，加入石油醚，刮出固体2.4克(76.3％)。取该固体0.32克(1mmol)，加入4M盐酸/二氧六环约5毫升，溶解，室温搅拌1小时。浓缩，得黄色油状液体。二氯甲烷溶解，冰浴搅拌下，加入N-甲基吗啡啉0.22毫升(2mmol)，10分钟后，加入L-N-Boc-(对-吗啉甲基)苯丙氨酸盐酸盐0.40克(1mmol)，溶解。加入HOBt 0.14克(1.05mmol)的DMF溶液，冰浴10分钟，加入DCC 0.22克(1.05mmol)。冰浴2小时后，室温反应12小时。浓缩，加入乙酸乙酯10毫升，水洗后，分别用10％柠檬酸、饱和碳酸氢钠和饱和氯化钠各洗三次，乙酸乙酯层用无水硫酸钠干燥5小时。滤除干燥剂，浓缩滤液，得黄色油状物。加入石油醚20毫升，冰浴条件下研磨，得类白色固体。将此固体用甲醇-四氢呋喃5毫升溶解，冰水浴条件下，滴加1M氢氧化钠，30分钟后，室温反应3小时。冰水浴中，滴加0.5M盐酸水溶液，调节pH～3.0，正丁醇提取三次(10毫升×3)，正丁醇层用水、饱和氯化钠洗两次，浓缩，得到白色固体。ESI-MS[M+]＝546，纯度88％。
依据与实施例2相同或相似的方法制备得到了以下化合物L-N-Ac-α-NAla-Val-Abu(QTP-013)分子量441.4 纯度98％L-N-Ac-β-NAla-Val-Abu(QTP-014)分子量441.4 纯度95％L-N-Ac-α-NAla-Val-Val-Abu(QTP-015)分子量540.7 纯度90％L-N-Ac-β-NAla-Val-Val-Abu(QTP-016)分子量540.7 纯度90％L-N-Ac-α-NAla-Val-Leu-Abu(QTP-017)分子量554.7 纯度95％L-N-Ac-β-NAla-Val-Leu-Abu(QTP-018)分子量554.7 纯度90％L-N-Ac-α-NAla-Leu-Val-Abu(QTP-019)分子量554.7 纯度95％L-N-Ac-β-NAla-Leu-Val-Abu(QTP-020)分子量554.7 纯度95％L-N-Ac-α-NAla-Leu-Leu-Abu(QTP-021)分子量568.7 纯度90％L-N-Ac-β-NAla-Leu-Leu-Abu(QTP-022)分子量568.7 纯度95％L-N-Ac-α-Nal-Pro-Abu(QTP-023)分子量439.4 纯度88％L-N-Boc-(p-Mm)Phe-Pro-(m)Abu HCl(QTP-024)分子量650.7 纯度85％L-N-Boc-Phe-Tle-(m)Abu(QTP-048)分子量463.8 纯度95％L-N-Boc-(p-Chf)Phe-Val-Abu(QTP-049)分子量484.3 纯度90％L-N-Boc-Tic-Tle-Abu(QTP-050)分子量475.6 纯度95％其余各化合物可依据上述方法和途径制备而成。
实施例3MTT显色法检测体外抗癌活性。
肿瘤细胞悬液的制备取传代培养72小时的K562、OVCA2780、Kato-III细胞株，用0.4％台盼兰与细胞悬液1∶1(50μl加50μl)混匀，立即按白细胞计数法计数活细胞数，每毫升的活细胞数＝计数值×5000。然后用10％小牛血清RPMI1640液将细胞浓度调整到3.125×105个/毫升，备用。
加样培养在无菌条件下，向96孔细胞培养板中每孔加入以调整好的3.125×105个/毫升K562细胞悬液80μl和已设定好的本发明化合物浓度20μl，每个化合物浓度设3～6个复孔，然后置37℃，5％CO2，饱和湿度孵温箱中培养48小时，加0.25％MTT液20μl/孔，继续培养4小时，然后加入10％SDS100μl/孔，置孵温箱培养过夜。
OD值测定将上述含有培养物加入SDS在孵温箱中培养过夜的96孔板置多孔扫描分光光度计Multiskan MCC/340 MKII中，选用单波长570nm测定OD值，计算OD值的百分率及化合物IC50。
OD值(％)＝给化合组OD/溶剂对照组OD×100％IC50值是以化合物浓度对OD百分率的对数值做线性回归后得出的。化合物号 OD值(x±s)OVCA2780K562Kato-IIIQTP-0010.6303±0.02521.1628±0.05351.2093±0.0436QTP-0020.6705±0.01751.2180±0.07081.2403±0.1051QTP-0030.5930±0.02821.1588±0.07251.2423±0.0398QTP-0040.7128±0.01571.2448±0.03211.2573±0.0691QTP-0050.7183±0.06081.3068±0.03681.2234±0.0773QTP-0060.7070±0.03581.3495±0.02171.3458±0.0959QTP-0070.6835±0.03861.2345±0.08381.2780±0.6092QTP-0080.7165±0.02901.3155±0.03621.3095±0.0179QTP-0090.7025±0.13071.3075±0.05001.2908±0.0917QTP-0100.5800±0.04411.2688±0.01451.2093±0.0466QTP-0110.6700±0.10811.2588±0.02001.1928±0.0474QTP-0120.6860±0.04711.2233±0.06191.2178±0.024

本发明涉及具有抗肿瘤活性的三肽类似物，其制备方法，含它们的药物组合物及它们在治疗癌症中的用途。