专利名称：一种提高猪圆环病毒2型全病毒灭活疫苗抗原量的方法猪圆环病毒2型(PCV2)是引起猪圆环病毒病(PCVD)的病原，包括猪断奶后多系统衰竭综合征(PMWS)、猪皮炎-肾病综合征(PDNS)、猪增生性坏死性肺炎(PNP)、猪先天性脑震颤(CT)、猪的流产与繁殖障碍等。目前，PCVD在我国的阳性率呈逐年上升的趋势，具有流行范围广、各生长阶段猪感染严重、保育猪发病率最高、混合感染突出等特点，严重威胁了我国养猪业的发展。PCV2疫苗的免疫能够提供很好的保护，而且效果明显，得到普遍认可，如明显降低死亡率、减少死淘率、提高生产成绩、降低药物治疗费用等。然而，在PCV2疫苗的研制过程中，遇到的主要问题是该病毒体外增殖能力差，培养物病毒含量低，病毒接种细胞不产生病变，病毒含量不易测定，病毒感染动物临床反应不一，免疫力评价困难。其中提高疫苗的抗原量是PCV2疫苗生产和应用的瓶颈，因此业内人士提出，通过驯化和筛选适应PCV2生长的细胞系、建立高密度培养技术等可望解决此类问题。但迄今为止，尚未见到相关成功的报道。目前，已有二件PCV2全病毒灭活疫苗获得中国专利(CN200810024423. 1和 CN200810079560. 5)。前者采用了 PCV2上海分离株SH，在PK-15细胞中大量增殖，经甲醛灭活加入白油佐剂进行乳化，制备常规的白油佐剂疫苗；故其疫苗抗原量提高受到限制。后者系从典型PCV2病猪体内分离出脏器组织，经研磨、过滤得到脏器组织提取物，加入甲醛灭活，以生理盐水稀释制成原始灭活疫苗，将该疫苗接种到健康猪体内促其发病或死亡后，采集脏器组织，经研磨、过滤，加入甲醛灭活，以生理盐水稀释制成PCV2灭活疫苗；故其疫苗抗原量确定困难、制备成本增高。
为了解决上述问题，本发明提供一种浓缩提高PCV2全病毒灭活疫苗抗原量的制作方法。实现上述目的具体技术解决方案如下1、一种提高PCV2全病毒灭活疫苗抗原量的制作方法，包括H(-15细胞增殖PCV2 培养灭活液取得、初效过滤、中效过滤、高效过滤。2、根据上述1所述提高PCV2全病毒灭活疫苗抗原量的制作方法，具体步骤和条件如下(1) PK-15细胞增殖PCV2培养灭活液取得在利用间接免疫荧光检测H(-15细胞增殖PCV2培养液TCID50之后，经终浓度30. 甲醛37°C灭活30h。( 初效过滤利用4层无菌纱布初步过滤PCV2细胞培养灭活液。其目的在于除去细胞培养物中大的颗粒杂质。(3)中效过滤将初效过滤液通过100KD的中空纤维超滤膜组件。其目的在于除去大分子量的蛋白质。(4)高效过滤将中效过滤液再通过6KD的中空纤维超滤膜组件。其目的在于浓缩全病毒抗原， 可达10倍浓缩。本发明的制作工艺简单、工艺稳定、易调控、成功率高。本发明方法的生产投资少， 且无三废问题。本发明的制作方法适合工业化生产，不受时间、地点的局限，可为大中型兽医生物制品生产企业采用。本发明通过将PCV2细胞培养灭活物经初效过滤一中效过滤一高效过滤三个阶段，达到10倍浓缩全病毒灭活疫苗的抗原量，这在当前尚未驯化筛选出适应PCV2生长的细胞系、实现建立高密度培养技术的情况下，本发明的制作方法无疑为PCV2全病毒灭活疫苗抗原量的提高提供了条件，从而为PCV2全病毒灭活疫苗的优质生产奠定了基础。本发明方法浓缩提高PCV2全病毒灭活疫苗的抗原量具有独特的先进性一、所用材料易得，所需设施简便。二、制作程序简单，生产成本低廉。三、浓缩比率高，且对经浓缩的PCV2抗原特性无任何影响。四、增强了疫苗的免疫效力，且无三废问题，具有社会和经济双重效益。本发明涉及一种提高猪圆环病毒2型(PCV2)全病毒灭活疫苗抗原量的制作方法。该方法的工艺过程主要包括细胞增殖PCV2培养灭活液的取得、4层无菌纱布的初效过滤、100KD中空纤维超滤膜组件的中效过滤和6KD中空纤维超滤膜组件的高效过滤。实验结果表明该方法可使PCV2全病毒灭活疫苗抗原量浓缩提高10倍，且对经浓缩的PCV2抗原特性无任何影响，增强了疫苗的免疫效力。因此，该方法具有制作简便、易生产、成本低廉、质量可控、浓缩比率高、实际效果好、且无三废问题等优点。