专利名称：一种牦牛肝脏中过氧化氢酶提取的方法过氧化氢酶(HydrogenPeroxidase),又称触酶(Catalase，CAT),分子量为 225000 250000道尔顿，是广泛存在于动物、植物和微生物体内的氧化还原酶，以过氧化氢为专一底物催化分解为水和氧，是一种重要的生物酶制剂产品。目前，过氧化氢酶作为一种生物酶制剂产品，在食品、医药、纺织、造纸、环保等领域被广泛应用。随着我国食品安全为问题的日益严峻，过氧化氢作为一种无毒、无害的消毒剂，在我国食品杀菌用量越来越大，过氧化氢酶也伴随着过氧化氢的使用，市场需求量逐步增加。现市售CAT产品基本为动物肝过氧化氢酶和微生物过氧化氢酶共存，微生物发酵生产CAT基本由国外知名大公司生产，市售价格较高，而且均不属于食品级过氧化氢酶。肝脏提取CAT在国内已经工业化，但是传统提取工艺中加入有机溶剂和无机盐，使后续酶的纯化难度增加，产品纯度不高，酶活不稳定，得率低且生产周期长，此外传统干燥技术对酶蛋白破坏严重，生产产品也不属于食品级过氧化氢酶。因此，本专利通过改进传统生产工艺，最终得到产物得率高，酶活高的粉末状的食品级过氧化氢酶产品。
本发明的目的是公开一种以牦牛肝脏为原料提取过氧化氢酶的方法。本发明目的是通过如下方法实现的。本发明的制备方法包括如下步骤(1)原料的选择选用屠宰场收集的新鲜牦牛肝脏为原料。(2)原料的预处理将新鲜的牦牛肝脏人工去除白色组织，用绞肉机将其反复绞碎 3次，再用间隙为0. 5 Imm的胶体磨将其磨成肝浆备用。(3)过氧化氢酶的提取将制备好的肝浆与去离子水以1:4 1:8的比例混合，pH 调节至5. 0 7. 0，将混合后的液体置于恒温真空提取罐中，恒温提取温度为20 40°C，罐内压力0. 08 0. 09 MPa，提取时间为30 60min。(4)过氧化氢酶的分离采用碟片式离心机对提取液中杂质进行分离，离心机的转速为4000 5000 r/min，将分离所得清液备用。(5)过氧化氢酶的纯化采用一道膜分离对提取液中分子量大于为30万道尔顿以上的杂质进行剔除。采用二道膜分离对一道透过液中分子量大于20万道尔顿的物质进行浓缩。(6)过氧化氢酶的干燥采用冷冻喷雾干燥技术对过氧化氢酶进行干燥，冷冻喷雾干燥剂的喷雾冷冻温度为-20 -30°C，冷阱温度为-60 -65°C，真空度为15 17MPa，冷风量为5 5. 3m3/min。本发明方法与现有技术相比还具有以下优点(1)本发明在原料的预处理工艺中，采用了胶体磨破碎技术，能够将牦牛肝脏破碎到适当的破碎度，能够更加有效的将过氧化氢酶溶出。(2)本发明在过氧化氢酶提取工艺中，采用了恒温真空提取技术，能够更加有效的将肝浆中的过氧化氢酶提取出来。(3)本发明在过氧化氢酶的纯化工艺中，采用了膜分离技术，能够更加有效的收集过氧化氢酶，同时，与传统的纯化工艺相比，减少了化学试剂的使用，极大的降低了生产成本，提高了产品的使用安全度。(4)本发明在过氧化氢酶的干燥中，采用了冷冻喷雾干燥技术，本技术兼有喷雾干燥和冷冻干燥的特点，能使制备好的过氧化氢酶具有较好的复水性及较高的酶活力。通过上述工艺，制备出高纯度的过氧化氢酶，酶活力达到50000 U/mg。将本工艺制备出的高纯度过氧化氢酶进行食品级检测，检测结果符合符合食品级要求，检测结果见表1。表1过氧化氢酶指标检测结果


本发明公开一种牦牛肝脏中过氧化氢酶的提取方法，属于酶制品技术领域。氧化氢酶市售价格较高，且不属于食品级过氧化氢酶，本方法采用胶体磨对牦牛肝脏进行破碎，恒温真空提取罐对过氧化氢酶进行提取，碟片离心机对过氧化氢酶进行分离，膜分离技术对过氧化氢酶进行纯化，喷雾冷冻干燥机对过氧化氢酶进行干燥，制备出高纯度的食品级过氧化氢酶，其酶活力达到50000U/mg。本发明方法在提取过程中减少了化学试剂的使用，提高了产品的使用安全性，可满足食品工业对过氧化氢酶的需求。