专利名称：芍药苷的医药新用途的制作方法 腹部手术是外科最常见的手术，一般手术后病人的肠功能比较虚弱，手术后肠功能的恢复对病人的康复，包括疾病的痊愈，减少肠粘连等并发症，均具有重要意义。恢复手术后的肠功能，主要是恢复一定强度的肠蠕动，但由于手术后不能进食，因此胃的过早蠕动，可能会因胃内无食物而引起上腹不适。文献报道，腹部手术后发生不同程度肠粘连的比例高达80-90％[Menies D，Ellis H.Intestinal obstruction from adhesion how bigis the problem.Ann R Coll Surg Engl，1990，7260]，手术后渗出的纤维蛋白，10小时起开始形成纤维粘连，而肠粘连的发生，与手术后的腹腔渗出及肠蠕动过弱有关，减少渗出或改善蠕动，将可减少粘连的发生。目前，胃肠动力药物，对胃肠特别是胃的作用过强，不适于手术后胃肠功能的恢复。可防治粘连药物有非甾体类抗炎药和甾体类抗炎药，甾体类抗炎药如地塞米松能减轻炎性反应，减少炎性物质及纤维蛋白渗出，但同时地塞米松也容易引起消化系统并发症和伤口愈合迟缓等副作用；甾体类抗炎药物在减少渗出，抑制肠粘连发生的同时，严重影响腹腔内手术部位及腹壁切口的愈合；非甾体抗炎药可减少渗出，但现在临床使用剂量常常引起胃肠道不良反应；促进纤维蛋白溶解吸收的药物有东菱克栓酶等，应用时有出血倾向副作用。促进肠蠕动药物能促进肠蠕动，减少粘连发生，但不能减轻炎性反应，减少炎性物质及纤维蛋白渗出。因此寻找一种既有利于术后肠功能的恢复、防止肠粘连又能克服现有药物的治疗缺陷成为当下医学研究的重要课题之一。芍药苷是从赤芍、白芍、牡丹皮中提取得到的，成无定形粉末，具吸湿性，有镇静、解痉、抗炎、抗应激性溃疡病、扩张冠脉血管、对抗急性心肌缺血以及抑制血小板聚集等多方面的作用，但关于芍药苷具有预防和治疗术后恢复肠功能及预防肠粘连的作用未见报道；鉴于此，本发明人通过大量的实验研究，提供了芍药苷在制备预防或治疗术后肠功能恢复及预防肠粘连的药物中的应用。
本发明提供了芍药苷在制备治疗或预防术后肠功能恢复的药物中的应用。
本发明提供了芍药苷在预防术后肠粘连的药物中的应用。
本发明提供了由芍药苷和药学上可接受的的载体或辅料组成的用于预防或治疗术后肠功能恢复及预防肠粘连的药物组合物。
本发明提供的芍药苷在用于术后肠功能恢复及预防肠粘连时，其给药方式为为静脉给药(包括静脉注射和静脉滴注)。
本发明提供的芍药苷在用于术后肠功能恢复及预防肠粘连时，其给药剂量范围为50-5000mg，优选为100-2500mg。
我们药理研究发现，芍药苷静脉给药对急性炎症渗出具有明显的抑制作用，对胃排空无明显影响，可明显加快肠蠕动减慢模型动物的肠蠕动。手术后前期(手术后1-3天)静脉给予芍药苷，可明显缩短手术后肠鸣音恢复时间，排气和排便时间提前，表明芍药苷能减轻炎性反应，减少炎性渗出，促进肠蠕动恢复。本发明芍药苷具有疗效好，副作用低等优点。
本发明通过下列试验来证实芍药苷具有预防或治疗术后肠功能恢复及预防肠粘连的作用。

制备例1制备芍药苷取赤芍10kg，70％乙醇分别回流提取3次，每次1.5h，每次30L，合并提取液，过滤，减压回收至干，残渣以适量水加热溶解，抽滤，滤液加入一预先装填好的大孔吸附树脂柱上(干膏和树脂的比例为15∶20)，慢慢滴加完后，先用水洗脱至还原糖的反应呈阴性(Molish反应检测)，改用20％浓度的乙醇洗脱，合并洗脱液，减压回收至干，得赤芍总苷530g，加入一预先装填好的硅胶柱，用氯仿-甲醇(1∶10)洗脱，合并洗脱液，减压回收至干，其中芍药苷含量为91.4％。
制备例2制备芍药苷取丹皮药材(产地铜陵)20kg，粉碎成粗粉，放入提取罐中；加200L的水沸提2次，每次2h，过滤后，减压浓缩至约30L；上大孔吸附树脂柱，用水充分洗脱至流出液为澄清且无还原糖反应后，再用40％乙醇洗脱；收集洗脱液，减压浓缩，氯仿萃取2次，回收氯仿，水溶液加入95％乙醇，使醇浓度为80％。放冷静置0.5h，滤去沉淀物，将滤液减压回收至干，即得丹皮总苷原料1kg。有效部位丹皮总苷中总苷含量为66％，主要成分芍药苷含量为42％。将丹皮总苷原料溶于无水乙醇，上氧化铝柱层析，用无水乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇、干燥，得精制丹皮总苷，再加入一预先装填好的硅胶柱，用氯仿-甲醇(1∶10)洗脱，合并洗脱液，减压回收至干，芍药苷含量为95.5％。
制备例 制备芍药苷冻干粉针在洁净条件下，取制备例所得芍药苷，溶于注射用水，加入低分子右旋糖苷，搅拌溶解，超滤，得到无热源的澄清液，每只，按冻干粉针工艺冻干，制成每支含的冻干粉针。
制备例 制备芍药苷注射液在洁净条件下，取制备例所得芍药苷，溶于注射用水，搅拌溶解，超滤，得到无热源的澄清液，按注射液制备工艺，制成一支，含芍药苷的注射液。
试验例1 芍药苷对正常小鼠小肠推动的影响1.1实验材料芍药苷按照制备例2制备；吗丁啉(10mg/粒，西安杨森制药有限公司，批号030214002)；清洁级昆明种小鼠，体重18g～22g，雌雄各半，山东绿叶制药股份有限公司实验动物中心提供，合格证号SYXK(鲁)20030020。
1.2实验方法与结果取小鼠80只，雌雄各半，禁食12小时，随机8组，分别为芍药苷5mg/kg组，芍药苷10mg/kg组，芍药苷20mg/kg组，芍药苷250mg/kg组，芍药苷500mg/kg组，芍药苷1000mg/kg组，吗丁啉组，空白对照组。芍药苷各静脉组给药后30分钟，分别灌服含5％活性炭混悬液，吗丁啉组灌服含1mg/ml吗丁啉的5％活性炭的混悬液，空白对照组同时灌服含5％活性炭混悬液。20分钟处死小鼠，剖腹取出肠管，测量幽门至活性炭前沿的距离作为“活性炭肠内推进距离”，测量幽门至盲肠的距离作为全肠长度，按下式计算活性炭推进率＝活性炭肠内推进距离(cm)/全肠长度(cm)·100％，各组活性炭推进率采用组间t检验，进行统计学处理。
表1结果表明，芍药苷10mg/kg静脉注射给药组明显加强正常小鼠小肠的活性炭推进率(与空白对照组比较，P＜0.05)，芍药苷20mg/kg、芍药苷250mg/kg、芍药苷500mg/kg、芍药苷1000mg/kg静脉注射给药，明显加强正常小鼠小肠的活性炭推进率(与空白对照组比较，P＜0.01)。
表1 芍药苷对正常小鼠小肠推进的影响

ΔΔP＜0.01；ΔP＜0.05，与空白对照组比较试验例2 芍药苷对蠕动减慢小鼠的小肠推动的影响2.1实验材料芍药苷按照制备例2制备吗丁啉(10mg/粒，西安杨森制药有限公司，批号030214002)消旋山莨菪碱片(青岛黄海制药厂，规格10mg/粒，批号030210)清洁级昆明种小鼠，体重18g～22g，雌雄各半，山东绿叶制药股份有限公司实验动物中心提供，合格证号SYXK(鲁)20030020。
2.2实验方法与结果取小鼠80只，雌雄各半，连续灌胃1.5mg/ml消旋山莨菪碱2天，体积0.4ml/天，禁食16小时，灌胃1.5mg/ml消旋山莨菪碱，体积0.4ml/只，随机分为8组，分别为芍药苷5mg/kg组，芍药苷10mg/kg组，芍药苷20mg/kg组，芍药苷250mg/kg，芍药苷500mg/kg组，芍药苷1000mg/kg组，吗丁啉组，空白对照组。芍药苷各静脉组给药后30分钟，分别灌服含5％活性炭混悬液，吗丁啉组灌服含1mg/ml吗丁啉的5％活性炭混悬液，空白对照组同时灌服含5％活性炭混悬液。30分钟处死小鼠，剖腹取出肠管，测量幽门至活性炭前沿的距离作为“活性炭肠内推进距离”，测量幽门至盲肠的距离作为全肠长度，按下式计算活性炭推进率＝活性炭肠内推进距离(cm)/全肠长度(cm)·100％，各组活性炭推进率采用组间t检验，进行统计学处理。
表2结果表明，芍药苷10mg/kg静脉注射给药，明显加强蠕动减慢小鼠的小肠活性炭推进率(与空白对照组比较，P＜0.05)，芍药苷20mg/kg、芍药苷250mg/kg、芍药苷500mg/kg、芍药苷1000mg/kg静脉注射给药，明显加强蠕动减慢小鼠的小肠活性炭推进率(与空白对照组比较，P＜0.01)。
表2 芍药苷对蠕动减慢小鼠小肠推进的影响

ΔΔP＜0.01；ΔP＜0.05，与空白对照组比较试验例3 芍药苷对小鼠毛细血管通透性的影响3.1实验材料芍药苷按照制备例2制备伊文思蓝(进口分装)双氯芬酸钠冻干粉针(山东绿叶天然药物有限公司提供，批号030501)清洁级昆明种小鼠，体重18g～22g，雌雄各半，山东绿叶制药股份有限公司实验动物中心提供，合格证号SYXK(鲁)20030020。
3.2实验方法与结果取小鼠60只，雄性，体重19～21g，随机分为6组，每组10只，芍药苷5mg/kg组，10mg/kg组，50mg/kg组，500mg/kg组，双氯芬酸钠5mg/kg组，NS组，给药体积0.20ml/20g，给药后立即给小鼠静脉注射0.5％伊文思蓝溶液，给药体积0.20ml/20g。随即腹腔注射1.0％的醋酸0.20ml，20分钟后处死小鼠，吸取6.0ml生理盐水，注入腹腔，轻揉腹部，吸取腹腔液，离心(3000rpm，10min)，于590nm波长处测定吸收值，进行组间t检验。
表3试验结果表明芍药苷10mg/kg静脉注射给药明显降低小鼠毛细血管通透性(与NS组比较，P＜0.05)，芍药苷50mg/kg，芍药苷500mg/kg静脉注射给药明显降低小鼠毛细血管通透性(与NS组比较，P＜0.01)。
表3 芍药苷对小鼠毛细血管通透性的影响

Δp＜0.05；ΔΔp＜0.01，与NS组比较试验例4 芍药苷对棉球致大鼠肉芽肿形成的影响4.1实验材料芍药苷按照制备例2制备地塞米松磷酸钠注射液(规格5mg/支，天津药业涟水有限公司，批号0105305)SD大鼠，雌雄各半，体重180-220g，山东省天然药物工程技术研究中心实验动物中心提供，动物合格证鲁动质字200106005号4.2实验方法与结果大鼠随机分为5组，即NS组，地塞米松组，芍药苷10mg/kg组、芍药苷50mg/kg组、芍药苷500mg/kg组，每组10只，乙醚麻醉，肩胛部皮肤碘酊消毒，酒精脱碘，肩胛间切一1cm的切口，止血钳钝性分离两侧皮肤与皮下组织，切口两侧皮下各植入消毒棉球一个(重19.8～20.2mg)，缝合切口。手术当日开始给药。地塞米松组隔日im注射给药一次，给药剂量10mg/kg，给药体积0.4ml/100g；NS组及芍药苷给药组，每次给药体积0.4ml/100g，每日给药1次，iv。一周后脱臼处死，取出棉球，剔除脂肪组织，70℃烘24小时，称重，减去棉球原重，即为肉芽肿重量，进行组间t检验。
表4结果表明芍药苷10mg/kg、芍药苷50mg/kg、芍药苷500mg/kg静脉注射给药明显抑制大鼠棉球肉芽肿形成(与NS组比较，P＜0.01)。
表4 芍药苷对大鼠棉球肉芽肿形成的影响

ΔΔP＜0.01，与NS组比较。
试验例5 芍药苷对蠕动减慢小鼠的胃排空的影响5.1实验材料芍药苷按照制备例2制备吗丁啉(10mg/粒，西安杨森制药有限公司，批号030214002)消旋山莨菪碱片(青岛黄海制药厂，规格10mg/粒，批号030210)清洁级昆明种小鼠，体重18g～22g，雌雄各半，山东绿叶制药股份有限公司实验动物中心提供，合格证号SYXK(鲁)20030020。
5.2方法与结果取小鼠50，雌雄各半，连续灌胃1.5mg/ml消旋山莨菪碱2天，体积0.4ml/天，禁食16小时，灌胃1.5mg/ml消旋山莨菪碱，随机分为5组，每组10只，阴性对照组灌服蒸馏水，阳性对照组灌服1mg/ml吗丁啉混悬液，芍药苷高、中、低剂量组静脉给予芍药苷。给药后20分钟，灌服0.2ml0.1％甲基橙溶液，给甲基橙后20分钟处死小鼠，剖腹，取胃，将胃置于10ml西林瓶中，加入8ml 0.1％的碳酸氢钠溶液用小剪刀剪开胃，将胃内容物充分洗于碳酸氢钠溶液中，摇匀，取上清液，置入试管中，2000rpm离心10分钟，取上清液于420nm处测定吸收值，0.1％的碳酸氢钠溶液调零点，并以0.1％甲基橙溶液0.2ml加入8ml 0.1％的碳酸氢钠溶液摇匀后测吸收度作为基数甲基橙光密度，按下式计算甲基橙胃残留率甲基橙胃残留率(％)＝胃内甲基橙光密度/基数甲基橙光密度*100％。各组甲基橙胃残留率采用组间t检验，进行统计学处理。
结果显示，吗丁啉组可显著促进小鼠胃排空(P＜0.01)，芍药苷各剂量组对蠕动减慢小鼠胃排空均无明显影响(P＞0.05)，即芍药苷对蠕动减慢小鼠胃排空无促进或抑制作用。
表5 芍药苷对蠕动减慢小鼠胃排空的影响

注与空白对照组比较，**P＜0.01
试验例6 芍药苷对大鼠肠粘连的影响6.1实验材料芍药苷按照制备例2制备地塞米松磷酸钠注射液(规格5mg/支，天津药业涟水有限公司，批号0105305)SD大鼠，雌雄各半，体重180-220g，山东省天然药物工程技术研究中心实验动物中心提供，动物合格证鲁动质字200106005号6.2实验方法与结果大鼠40只，禁食16h，以10％水合氯醛腹腔内麻醉。麻醉体积0.35ml/100g，麻醉后将大鼠仰卧固定于手术板上，腹部脱毛，消毒皮肤，铺无菌巾，取下腹部正中长约2cm切口，提出盲肠，置于干纱布上约5分钟，使浆膜干燥，以解剖刀片轻刮整个盲肠浆膜10遍，造成轻度渗血，以止血钳用同样力度夹小肠两下，再滴入无水酒精于创面上。分两层以1号丝线关腹，随机分组即NS组，地塞米松组，芍药苷10mg/kg组，芍药苷50mg/kg组，随后立即给药，分笼饲养。每天给药一次，给药体积0.4ml/100g，模型组给予同体积的NS，阳性对照组给予地塞米松，隔天给药，剂量10mg/kg，给药体积同给药组。术后第7d处死，腹部取“n”形切口开腹，分别进行粘连程度分级评分。观察指标粘连程度分级判断标准参考Nair制定的5级分类法，确定分级标准，见表6，试验结果进行组间秩和检验。
表7结果表明芍药苷10mg/kg静脉注射给药，明显抑制大鼠肠粘连(与NS组比较，P＜0.05)，芍药苷50mg/kg静脉注射给药明显抑制大鼠肠粘连(与NS组比较，P＜0.01)。
表6 肠粘连程度分级评定标准

表7 芍药苷对大鼠肠粘连的影响

Δp＜0.05；ΔΔp＜0.01，与NS组比较


本发明提供了芍药苷在制备用于促进手术后肠功能恢复药物及预防肠粘连药物中的应用。