专利名称：绿脓杆菌10118 pea基因的制作方法绿脓杆菌为革兰氏阴性杆菌，在自然界中具广泛分布，绿脓杆菌是引起囊肿性纤维化、烧伤烫伤、免疫缺失等患者感染的主要病原菌，其合成的细胞外的毒性物质被认为是引起感染的内在机制，而绿脓杆菌外毒素A(ex-otoxinA，PEA)是这些毒物质中最关键的毒素。绿脓杆菌外毒素A是由假单胞菌属绿脓杆菌分泌的一种细胞毒性很强的外毒素，是重要的致病因子。PEA的ADP-核糖基转移酶活性能使靶细胞中的延长因子_2 (EF-2)核糖基化，使EF-2失活，从而抑制细胞内蛋白质的合成，导致细胞的坏死。利用这种毒性作用制成 针剂，对多种肿瘤细胞的免疫毒素进行肿瘤治疗的研究获得较好的效果。
本发明提供绿脓杆菌10118PEA基因，其编码的绿脓杆菌10118PEA蛋白具有很强的毒性，用于抑制肿瘤细胞内蛋白质的合成。本发明绿脓杆菌10118PEA基因的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO 1所示。本发明绿脓杆菌10118PEA基因的5’UTR区域的核苷酸序列如序列表中SEQ IDNO 2所示。本发明绿脓杆菌10118PEA基因编码蛋白绿脓杆菌10118外毒素A，对绿脓杆菌10118外毒素A进行毒力检测，与绿脓杆菌PA103外毒素A的毒力相近。说明绿脓杆菌10118PEA蛋白具有很强的毒性，利用这种毒性作用制成针剂，对多种肿瘤细胞的免疫毒素进行肿瘤治疗将获得较好的效果。，还包括各间的任意组合。一本实施方式绿脓杆菌10118PEA基因的核苷酸序列如序列表中SEQID NO 1 所示。绿脓杆菌10118PEA基因的获得方法如下一、采用细菌基因组提取试剂盒(购买自北京康为世纪生物科技有限公司)提取铜绿假单胞菌10118(购买自中国医学细菌保藏管理中心)的基因组DNA;根据GenBank数据库中已发表的绿脓杆菌PA103的序列(基因编号为K01397)，设计上游引物Pl和下游引物Ρ2。二、以步骤一提取的基因组DNA为模板进行PCR扩增，反应体系为25 μ L，由下列成分组成


绿脓杆菌10118 PEA基因，涉及绿脓杆菌10118 PEA基因。本发明提供绿脓杆菌10118 PEA基因，其编码的绿脓杆菌10118 PEA蛋白具有很强的毒性，用于抑制肿瘤细胞内蛋白质的合成。本发明绿脓杆菌10118 PEA基因的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO1所示。绿脓杆菌10118 PEA基因编码蛋白绿脓杆菌10118外毒素A，对绿脓杆菌10118外毒素A进行毒力检测，与绿脓杆菌PA103外毒素A的毒力相近。说明绿脓杆菌10118 PEA蛋白具有很强的毒性，利用这种毒性作用制成针剂，对多种肿瘤细胞的免疫毒素进行肿瘤治疗将获得较好的效果。用于肿瘤质量领域。