专利名称：低咖啡碱茶叶提取物的制备方法低咖啡碱茶叶提取物的制备方法
3啡因含量降低约80 %，茶多酚含量提高到大约40 %。 实验条件咖啡因含量(％ w/w)茶多酚得率(％ w/w)普通条件1230本发明< 542二、抑制肿瘤细胞生长实验使用本发明进行抑制肿瘤细胞生长实验。实验步骤1.称取一定量的本发明，用DMEM培养基稀释成10mg/ml后，用0. 22um的无菌滤器除去细菌等污染物。然后用DMEM培养基稀释终浓度为lmg/ml。2.细胞计数用含青霉素、链霉素和10%胎牛血清(FBQ的DMEM培养液进行细胞培养。将含有 10% FBS的DMEM细胞悬液接种于96孔组织培养板上，细胞密度为1 X 105cells/孔。培养物置于37°C、5% C02的组织培养箱中培养2天，收集细胞，用细胞计数器测定细胞数。3. MTT法检测抑制效果(1)收集对数期细胞，调整细胞悬液浓度，每孔加入lOOul，铺板使待测细胞调密度至1 X 105cells/孔(边缘孔用无菌PBS填充)。(2)5% C02，37°C孵育，至细胞单层铺满孔底(96孔平底板)，加入浓度梯度的药物，孵育4个小时后加药.每孔lOOul，设5个复孔。(3)5% C02，37°C孵育48小时，倒置显微镜下观察。(4)每孔加入 20ul MTT 溶液(5mg/ml，即 0. 5% MTT)，继续培养 4h。(5)终止培养，小心吸去孔内培养液，每孔加入150ul 二甲基亚砜，置脱色摇床上低速振荡lOmin，使结晶物充分溶解。在酶联免疫检测仪0D490nm处测量各孔的吸光值。(6)同时设置调零孔(培养基、MTT、二甲基亚砜)，对照孔(细胞、相同浓度的药物溶解介质、培养液、MTT、二甲基亚砜)。4.计算抑制率相对抑制率=1-(给药孔平均OD值/对照孔平均OD值)X 100 %5.实验结果实验结果如图1显示，随着样品浓度的增加，样品抑制肿瘤细胞生长的效果也增加，即抑制效果呈浓度依赖性。图1所示的是样品抑制肿瘤细胞生长效果图。2.将处理过的茶叶进行C02超临界萃取脱除咖啡碱。萃取条件温度30°C ；处理时间10小时；夹带剂为水，其含量为25% (% w/w)。3.将经过超临界萃取的茶叶进行水浴提取。提取温度为60°C ；料液比为1 8; 提取2次；每次40分钟。4.将提取液抽滤后浓缩冷冻干燥。5.提取物咖啡因含量为2. 7% w/w，茶多酚得率为38% w/w。实施例二1.将茶叶进行加湿预处理，使其含水量达到30% (% w/w)。2.将处理过的茶叶进行C02超临界萃取脱除咖啡碱。萃取条件温度45°C ；处理时间8小时；夹带剂为水，其含量为35% (% w/w)。3.将经过超临界萃取的茶叶进行水浴提取。提取温度为55°C ；料液比为1:9; 提取2次；每次50分钟。4.将提取液抽滤后浓缩冷冻干燥。5.提取物咖啡因含量为2. 5% w/w，茶多酚得率为40% w/w。实施例三1.将茶叶进行加湿预处理，使其含水量达到60% (% w/w)。2.将处理过的茶叶进行C02超临界萃取脱除咖啡碱。萃取条件温度70°C ；处理时间5小时；夹带剂为水，其含量为55% (% w/w)。3.将经过超临界萃取的茶叶进行水浴提取。提取温度为90°C;料液比为1 27; 提取4次；每次50分钟。4.将提取液抽滤后浓缩冷冻干燥。5.提取物咖啡因含量为2. 9% w/w，茶多酚得率为36% w/w。

本发明所述的一种低咖啡碱茶叶提取物的制备方法涉及一种山茶科植物提取物的制备方法。该方法由以下步骤组成(1)将茶叶粉碎为茶粉并对其进行加湿预处理；(2)将处理过的茶粉进行CO2超临界萃取；(3)将经过超临界萃取的茶粉进行水浴提取；(4)将提取液抽滤后浓缩冷冻干燥。本发明有效地提取了茶叶中的活性物质，降低活性物质中的咖啡碱含量，将活性物质中的咖啡碱含量控制在3％(质量百分含量)以内，并使其具有较高的抑制肿瘤细胞生长功效。通过实验验证发现此活性物质的副作用低，对肿瘤细胞生长具有良好的抑制效果，且无耐药性的产生。