专利名称：酶法精制中药提取物的方法近年来酶工程在食品加工中的应用非常广泛，所用的酶种类越来越多，数量也越来越大，人类已开发出应用于果蔬、啤酒、饮料中的多种酶类如果胶酶、果胶酯酶、纤维素酶、鼠李糖苷酶、中性蛋白酶、半乳甘露聚糖酶、液化葡萄糖苷酶等，其中使用最多的是果胶酶和纤维素酶。国外于20世纪30年代已工业化使用酶类。而国内的研究则始于上世纪60年代， 80年代末才开始工业化生产。在天然产物生产过程中，果胶酶可以快速彻底地脱除果胶，降低果汁黏度，利于果汁过滤澄清滤液且澄清度稳定。果胶酶(pectolytic enzyme或pectinase)是指普遍存在于细菌、真菌和植物中是分解果胶类物质的多种酶的总称。在果蔬加工、饲料、纺织和造纸工业中应用非常广泛。在果蔬汁生产中，果胶酶是最重要的酶制剂之一，已被广泛应用于果蔬汁的提取和澄清、改善果蔬汁的可过滤性，以及植物组织的浸渍和提取。目前在果蔬汁加工业中，已广泛采用果胶酶降解果蔬细胞壁以改善压榨性能、降低黏度、增加出汁率和进步营养成分。 使用果胶酶、纤维素酶和半纤维素酶可促进细胞分离，细胞壁变软，这特别适于水果和蔬菜 [1]。果胶酶作用于果胶质中D-半乳糖醛酸残基之间的糖苷键，使高分子的聚半乳糖醛酸降为小分子物质。可以较大幅度地进步果蔬品种的出汁率，改善其过滤速度和保证产品贮存稳定性[2]。果胶酶除降低黏度外，还可产生絮凝作用，使果蔬汁澄清。澄清机理的实质包括果胶的酶促水解和非酶的静电絮凝两部分。果汁中有很多物质如纤维素、蛋白质、淀粉、果胶物质等影响澄清且果胶物质是造成果汁混浊的主要因素。在樱桃汁的加工过程中添加果胶酶，使果胶水解，从而使樱桃汁黏度降低，过滤阻力减小，过滤速度加快；同时由于樱桃汁中的悬浮果粒失去高分子果胶的保护，很容易发生沉降，而使上层汁液清亮在以后的澄清过程中明胶澄清剂的用量便可大大减少，甚至免加澄清剂[3]。中药材中，尤其是根类药材中常常含有许多粘性物质，一般而言，这些粘性物质通常包括蛋白质，淀粉，鞣质，果胶，粘液质等。这些物质的存在会影响中药提取液的黏度和澄清度，因而会影响中药有效部位的进一步纯化。为此，此类药材的提取物在提取之后常常需要澄清步骤，依据杂质的类型，常用的澄清方法如水提取醇沉淀法，醇提取水沉淀法等。尽管上述方法有一定效果，但对于高纯中药的生产远远达不到要求，尤其含有果胶酶较多的药材，不仅导致产率下降，还消耗较多的能量并使处理成本增加。目前，生物酶在中药提取方面的工业化应用也已进入初级开发阶段。部分中药材的细胞壁是由纤维素构成的，植物的有效成分往往包裹在细胞壁内。纤维素是β-D-葡萄糖以1，4-β葡糖苷链连接的，用纤维素可破坏β-D-葡萄糖键，进而有利于有效成分的提取。根据这原理，国内有人将其用于黄柏提取小檗碱中的预处理，并与未加酶的提取进行对比实验，收率提高。有人将木瓜蛋白酶用于补骨脂煎提前的预处理，补骨脂系豆科植物补骨脂的种子，含有丰富的蛋白质，蛋白质在煎煮过程中，遇热凝固，影响其他有效成分的煎出。 因此可在煎提前用木瓜蛋白酶对补骨脂粉进行预处理，将蛋白质水解成肽及氨基酸类，遇热不再凝固，从而促进各种有效成分煎出量的增加。国内有一些企业和科研机构研发了一批纤维素酶应用于中药制药的技术与产品， 并获得了国内专利，但为数不多。在这些专利中，除了仅采用纤维素酶的外，还有采用纤维素酶与另一种或几种酶组成复合酶类酶解提取中药，但没有用于澄清和降低黏度。由此可见，目前上述酶精制方法在食品加工中应用很广泛，而在中药行业应用仅限于中药提取中，目的为了增加提取率，并未在提取液精制处理中使用。因此需要一种工艺简单、操作方便、快捷，大大降低水、电、澄清剂(或者乙醇)消耗的中药材提取液精制处理的工艺，用于对澄清度要求较高的产品的处理中。
为此，本发明提供了一种酶法精制中药提取物的方法(以下称“本发明的方法”)， 该方法包括以下步骤1)获取中药材的水或醇提取物，浓缩成为中药浓缩提取液；2)将步骤1)获得的中药浓缩提取液中加入至反应器中，然后向反应器中按每100 重量份所述中药浓缩提取液加入0. 01-5重量份的量加入一种或多种选自下列的酶纤维素酶、果胶酶、木聚糖酶、中性蛋白酶、木聚糖酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶和β-葡聚糖酶， 形成混合物并将得到的混合物在反应器中搅拌以形成均勻的混合物；3)将步骤2)中获得的均勻的混合物在40 60°C下，在ρΗ 3-5的条件下反应2_3 小时，获得中药提取物澄清液。在本发明的方法的一个实施方案中，其中所述的中药材是含粘性物质的药材。在本发明的方法的另一个实施方案中，其中步骤1中所述酶的用量为按每100重量份所述中药浓缩提取液加入0. 01-5重量份，优选0. 05-1重量份。在本发明的方法的一个实施方案中，其中步骤幻中使用的酶为纤维素酶或果胶酶。在本发明的方法的一个实施方案中，其中步骤幻中使用的酶为两种酶组成的复合酶，优选纤维素酶和果胶酶的组合，所述两种酶的配比为按重量计1 1。在本发明的方法的一个实施方案中，该方法还包括检测步骤幻中获得的中药提取物澄清液的黏度，若该黏度与步骤1)中获得的中药浓缩提取物的黏度相比减小约5%以下，则采用不同于上一次所使用的酶或酶的组合重复步骤1)-3)。在本发明的方法中，步骤幻中获得的中药提取物澄清液的黏度与步骤1)中获得的中药浓缩提取液的黏度相比减小5-95%，更优选减小10-95%和最优选减小20-95%。在本发明的方法的一个实施方案中，该方法还包括4)将步骤3)获得的中药提取物澄清液经大孔吸附树脂吸附，并收集洗脱液。在本发明的方法的一个优选实施方案中，其中步骤4)中的大孔吸附树脂选自非极性至弱极性大孔树脂中的任一种。4本发明通过加入果胶酶、纤维素酶、混合酶分解中药提取物中的果胶、纤维素等， 降低了特性粘数，取代了醇沉法去除果胶、纤维素、多糖等，减少了水、电、乙醇等沉淀剂的大量消耗，有利于进一步分离、纯化中药有效部位成分(沣本发明等国家自然科学某金 30772755,30830118 国家科技重大专项 2009ZX09103-317 资助)。
本发明涉及一种酶法精制中药提取物的方法，该方法包括以下步骤1)获取中药材的水或醇提取物，浓缩成为中药浓缩提取液；2)将步骤1)获得的中药浓缩提取液中加入至反应器中，然后向反应器中按每100重量份所述中药浓缩提取液加入0.01-5重量份的量加入一种或多种选自下列的酶纤维素酶、果胶酶、木聚糖酶、中性蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶和β-葡聚糖酶，形成混合物并将得到的混合物在反应器中搅拌以形成均匀的混合物；3)将步骤2)中获得的均匀的混合物在40～60℃下，在pH 3-5的条件下反应2-3小时，获得中药提取物澄清液。所述方法可以根据需要重复多次。