专利名称:人源抗EV71病毒中和性抗体EV71FabL11、其制备方法及应用的制作方法手足口病(Hand foot mouth disease, HFMD)是由肠道病毒引起的传染病,多发生于5岁以下的婴幼儿,可引起发热和手、足、口腔等部位的皮疹、溃疡,个别患者可引起心肌炎、肺水肿、无菌性脑膜脑炎等并发症。引发手足口病的肠道病毒有20多种,其中柯萨奇病毒(Cox Asckievirus) A16 M (Cox A16)和肠道病毒 71 型(Enterovirus71. EV71)最常见。1974年Schmidt等人首次报道从美国加利福尼亚暴发的表现为神经系统症状疾病(196扩1973年)的患者体内分离到EV71,随后,世界上许多国家相继报道了 EV71病毒在不同地区的流行情况,人们逐渐认识到EV71病毒是手足口病的主要病原。由于手足口病目前没有相应的疫苗和特异性药物,因此制备高效、价廉、副反应小的被动免疫制剂成为研究的热点。利用含有特异性抗体的人源或动物血清免疫球蛋白来预防和治疗传染病由来已久。单克隆抗体的体外抗病毒中和活性和体内保护肌体抵抗病毒攻击已获得许多实验证明,如汉坦病毒、麻疹病毒、RSV病毒、狂犬病毒等中和性单克隆抗体可以在体内100%保护动物免受病毒攻击.免疫球蛋白(immunoglobulin, Ig)作为抗体成分主要来自捐献者(恢复期病人)免疫血清,从获得阳性血清到通过安全性检测耗时较长,且需投入大量的人力和财力,这就使其大量制备受到限制,同时由于抗体主要来源于血清,因此容易发生血源性传播疾病的感染。而使用人源基因工程产品替代血制品则可克服这些缺陷,随着人源基因工程抗体研究的不断深入,给这一领域的生物制品发展带来了新的希望和广阔前景。90年代初兴起的噬菌体抗体基因库技术(Barbas, C. F.等.,1991)和整个基因工程抗体技术研究领域的发展,极大促进了人源或基因工程抗体的开发研究,并已由基础研究阶段步入实质性应用研究和开发阶段。人源抗病毒基因工程抗体,尤其是人源全抗体的研究成功,给各种病毒性传染病的特异性预防和治疗开辟了新思路,并在抗病毒感染生物医药领域中逐渐开发出一类新的抗病毒药。
本发明的目的是提供一种人源抗EV71病毒中和性抗体EV71FabLll或其活性片段。本发明的另一目的是提供所述抗体EV71FabLll或其活性片段的制备方法。本发明的再一目的是提供所述抗体EV71FabLll或其活性片段的应用。为了实现本发明目的,本发明的一种人源抗EV71病毒中和性抗体EV71FabLll或其活性片段,其轻链高变区⑶R1、⑶R2和⑶R3以及重链高变区⑶R1、⑶R2和⑶R3的氨基酸序列如表I所示表I抗体EV7IFabLl I的重链及轻链高变区的氨基酸序列本发明提供了一种利用噬菌体表面展示技术筛选获得的人源抗EV71病毒中和性抗体EV71FabL11,其轻链和重链可变区的氨基酸序列分别如SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示。该抗体能够特异性识别EV71病毒颗粒抗原,可与EV71病毒发生显著的酶联免疫反应且具有抗EV71病毒感染的中和活性功能。此外,可将本发明的抗体制成预防和治疗手足口病的特异性抗体药物,从而在临床中用于预防和治疗由EV71病毒引起的手足口病。
人源抗EV71病毒中和性抗体EV71FabL11、其制备方法及应用制作方法
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