一种低频细胞循环分选系统的制作方法 [0002]目前国内外的免疫磁性分选细胞技术主要有德国美天旎公司的分离柱分离，加拿大干细胞公司的磁极分离。这些细胞分选技术存在着分选低频细胞(含量低的细胞)的能力差，分选样品量不能满足临床的需求等问题。为了解决这些问题，本实用新型采用循环液流设计和双通路分选设计，应用于免疫磁性分选，来提高低频细胞分选能力和分选的样品量。
[0003]为了克服现有免疫磁性分选低频细胞技术分选能力差，分选样品量不能满足临床的需求等问题。本实用新型公开了一种低频细胞循环分选系统，包括一个进样室、一个缓冲液瓶、一个混合室、一个回流室、磁极平台、回收样品管和控制系统，进样室通过管道与混合室连接，缓冲液瓶通过管道与混合室连接，磁极平台的前部设有一个圆形分离区域，磁极平台的圆形分离区域分布四个可调节的电磁场，混合室下部的管道形穿过磁极平台的圆形分离区域后并通过一个三通件分别连接至回流室和回收样品管，回流室和混合室相邻，进样室和混合室、缓冲液瓶和混合室之间的管道及混合室下部穿过磁极平台的圆形分离区域的管道上分别设有样品泵、缓冲液泵和分离泵，三通件与回流室和回收样品管间的管道上均设有电动阀，混合室和回流室之间设有管道和电动阀，样品泵、缓冲液泵、分离泵、电动阀和所述电磁铁与控制系统耦合连接。 [0004]本实用新型公开的上述实施例中的一种低频细胞循环分选系统为单通路分选系统，可以分选的样品量为0.51111至501111。 [0005]本实用新型公开的上述实施例中的一种低频细胞循环分选系统的分选方法，步骤如下:
[0006]第一步:在控制系统设定好流速、磁场强度和分选次数；
[0007]第二步:临床上采集的血样与磁珠和抗体孵育完成后上样至进样室；
[0008]第三步:血样通过样品泵流至所述混合室，同时缓冲液通过缓冲液泵流至混合室，样品与缓冲溶液以一定比例混合通过分离泵进入圆形分离区域；
[0009]第四步:样品中与磁珠连接的靶细胞/非靶细胞被磁场吸引滞留在磁场内，没有连接磁珠的非靶细胞/靶细胞从磁场中流出；
[0010]第五步:样品经所述圆形分离区域后，控制系统开启三通件与回流室之间的电动阀，使样品流至回流室；
[0011]第六步:待混合室中样品全部进入回流室，控制系统关闭三通件与回流室之间的电动阀，并开启回流室与混合室之间的电动阀，使样品流至混合室，重新经过所述圆形分离区域；
[0012]第七步:按上述不断循环至完成设定好的分选次数；
[0013]第八步:控制系统开启三通件与回收样品管之间的电动阀，没有连接磁珠的非靶细胞/靶细胞直接流入回收样品管；
[0014]第九步:去掉磁场后，用洗脱液洗脱与磁珠连接的靶细胞丨非靶细胞，并收集至回收样品管。
[0015]本实用新型公开的一种低频细胞循环分选系统的另外一个实施例中，进样室、缓冲液瓶、混合室及回流室还可以为两个，磁极平台的前部设有两个圆形分离区域，磁极平台的每个圆形分离区域分布四个可调节的电磁场，每个混合室下部的管道形穿过磁极平台的其中一个圆形分离区域后并通过一个三通件分别连接至回流室和回收样品管。
[0016]本实用新型公开的上述实施例中的一种低频细胞循环分选系统为双通路分选系统，可以分选的样品量为0.51111至1001111。
[0017]本实用新型公开的一种低频细胞循环分选系统的另外一个实施例中，进样室、缓冲液瓶、混合室及回流室还可以为两个，磁极平台的前部还可以设有四个圆形分离区域，磁极平台的每个圆形分离区域分布四个可调节的电磁场，每个混合室下部的管道形穿过磁极平台的其中两个圆形分离区域后并通过一个三通件分别连接至回流室和回收样品管。
[0018]本实用新型公开的上述实施例中的一种低频细胞循环分选系统为双通路分选系统，可以分选的样品量为0.51111至2001111。
[0019]本实用新型公开的上述两个实施例中的一种低频细胞循环分选系统的分选方法，步骤如下:
[0020]第一步:在控制系统中设定好流速、磁场强度、分选次数和样品个数；
[0021]第二步:临床上采集的血样与磁珠和抗体孵育完成后上样至进样室；
[0022]第三步:血样通过样品泵流至所述混合室，同时缓冲液通过缓冲液泵流至混合室，样品与缓冲溶液以一定比例混合通过分离泵进入圆形分离区域；
[0023]第四步:样品中与磁珠连接的靶细胞/非靶细胞被磁场吸引滞留在磁场内，没有连接磁珠的非靶细胞/靶细胞从磁场中流出；
[0024]第五步:样品经圆形分离区域后，控制系统开启三通件与回流室之间的电动阀，使样品流至回流室；
[0025]第六步:待混合室中样品全部进入回流室，控制系统关闭三通件与回流室之间的电动阀，并开启回流室与混合室之间的电动阀，使样品流至混合室，重新经过圆形分离区域；
[0026]第七步:按上述不断循环至完成设定好的分选次数；
[0027]第八步:控制系统开启三通件与回收样品管之间的电动阀，没有连接磁珠的非靶细胞/靶细胞直接流入回收样品管；
[0028]第九步:去掉磁场后，用洗脱液洗脱与磁珠连接的靶细胞丨非靶细胞，并收集至回收样品管。
[0029]本实用新型公开的一种低频细胞循环分选系统的实施例中，样品泵、缓冲液泵和分离泵均为蠕动泵，管道为弹性管道。
[0030]本实用新型公开的一种低频细胞循环分选系统的实施例中，可以同时分选两个样品，也可以同时进行正选或负选。
[0031]有益效果
[0032]本实用新型公开了一种低频细胞循环分选系统和分选方法，采用循环液流设计和双通路分选设计，应用于免疫磁性分选，来提高低频细胞分选能力和分选的样品量，主要有以下优点:
[0033](3)可以直接应用于临床大量样品的制备，可分析血样的样品量为0.5“至2001111 ；
[0034](4)可以同时分选两个样品或者对比样品，也可以同时进行正选和负选；
[0035](3)可以进行多次循环分选，适用于低频细胞分选。




[0036]图1是本实用新型公开的一种低频细胞循环分选系统的一个实施例的结构示意图。
[0037]图2是本实用新型公开的一种低频细胞循环分选系统的另外一个实施例的结构示意图。
[0038]图3是本实用新型公开的一种低频细胞循环分选系统的另外一个实施例的结构示意图。


[0039]下面结合附图和具体实施例对本实用新型作进一步详细描述，但不作为对本实用新型的限定。
[0040]图1为本实用新型公开的一种低频细胞循环分选系统的一个实施例的结构示意图，如图所示，该低频细胞循环分选系统包括一个进样室(01^—个缓冲液瓶(02^—个混合室(03^—个回流室(07^磁极平台(04)、回收样品管(08)和控制系统(图中未示出)，进样室(01)通过管道与混合室(03)连接，缓冲液瓶(02)通过管道与混合室(03)连接，磁极平台(04)的前部设有一个圆形分离区域(15),磁极平台(04)的圆形分离区域(15)分布四个可调节的电磁场(05),四个可调节的电磁场(05)分为两对，其中每对电磁铁相对设置，混合室(03)下部的管道“I”形穿过磁极平台(04)的圆形分离区域(15)后并通过一个三通件(06)分别连接至回流室(07)和回收样品管(08),当管道“I”形穿过磁极平台(04)的圆形分离区域(15)经过四个可调节的电磁场(05)时，管道从每对可调节的电磁场相对的位置穿过，回流室(07)和混合室(03)相邻，进样室(01)和混合室(03^缓冲液瓶(02)和混合室(03)之间的管道及混合室(03)下部穿过磁极平台(04)的圆形分离区域(15)的管道上分别设有样品泵(09^缓冲液泵(10)和分离泵(11),三通件(06)与回流室(07)和回收样品管(08)间的管道上均设有电动阀(12和14),混合室(03)和回流室(07)之间设有管道和电动阀(13),并且管道可以通到回流室(07)的底部，样品泵(09^缓冲液泵(10)、分离泵(11)、电动阀〈12、13和14)和电磁铁(05)与控制系统耦合连接，控制系统可以控制样品泵(09)、缓冲液泵(10)、分离泵(11)、电动阀〈12、13和14)和电磁铁(05)的开启和关闭，并可以控制电磁铁(05)磁性的大小。
[0041]图1中所不的一种低频细胞循环分选系统可以分选的样品量为0.51111至501111。
[0042]图1中所示的一种低频细胞循环分选系统的分选方法，步骤如下:
[0043]第一步:在控制系统设定好流速、磁场强度和分选次数；
[0044]第二步:临床上采集的血样与磁珠和抗体孵育完成后上样至进样室(01)；
[0045]第三步:血样通过样品泵(09)流至混合室(03)，同时缓冲液通过缓冲液泵(10)流至混合室(03),样品与缓冲溶液以一定比例混合通过分离泵(11)进入圆形分离区域(15)；
[0046]第四步:样品中与磁珠连接的靶细胞/非靶细胞被磁场吸引滞留在磁场内，没有连接磁珠的非靶细胞/靶细胞从磁场中流出；
[0047]第五步:样品经所述圆形分离区域(15)后，控制系统开启三通件(06)与回流室(07)之间的电动阀(12),使样品流至回流室(07)；
[0048]第六步:待混合室(03)中样品全部进入回流室(07),控制系统关闭三通件(06)与回流室(07)之间的电动阀(12),并开启回流室(07)与混合室(03)之间的电动阀(13),使样品流至混合室(03),重新经过所述圆形分离区域(15)；
[0049]第七步:按上述不断循环至完成设定好的分选次数；
[0050]第八步:控制系统开启三通件(06)与回收样品管(08)之间的电动阀(14),没有连接磁珠的非靶细胞/靶细胞直接流入回收样品管(08)；
[0051]第九步:去掉磁场后，用洗脱液洗脱与磁珠连接的靶细胞丨非靶细胞，并收集至回收样品管(08)，用标有“ + ”的回收样品管收集靶细胞，用标有“-”的回收样品管收集非靶细胞。
[0052]图2为本实用新型公开的一种低频细胞循环分选系统的另外一个实施例的结构示意图，如图所示，进样室(01^缓冲液瓶(02^混合室(03)及回流室(07)还可以为两个，磁极平台(04)的前部设有两个圆形分离区域(15),磁极平台(04)的每个圆形分离区域
(15)分布四个可调节的电磁场(05),并且四个可调节的电磁场(05)分为两对，其中每对电磁铁相对设置，每个混合室(03)下部的管道“I”形穿过磁极平台(04)的其中一个圆形分离区域(15)后并通过一个三通件(06)分别连接至回流室(07)和回收样品管(08),并当管道“I”形穿过磁极平台(04)的其中一个圆形分离区域(15)经过四个可调节的电磁场(05)时，管道从每对可调节的电磁场相对的位置穿过。
[0053]图2中所不的一种低频细胞循环分选系统可以分选的样品量为0.51111至1001111。
[0054]图3为本实用新型公开的一种低频细胞循环分选系统的另外一个实施例的结构示意图，如图所示，进样室(01^缓冲液瓶(02^混合室(03)及回流室(07)还可以为两个，磁极平台(04)的前部还可以设有四个圆形分离区域(15),磁极平台(04)的每个圆形分离区域(15)分布四个可调节的电磁场(05),并且四个可调节的电磁场(05)分为两对，其中每对电磁铁相对设置，每个混合室(03)下部的管道“『形穿过磁极平台(04)的其中两个圆形分离区域(15)后并通过一个三通件(06)分别连接至回流室(07)和回收样品管(08),并当管道“I”形穿过磁极平台(04)的其中两个圆形分离区域(15)经过八个可调节的电磁场
(05)时，管道从每对可调节的电磁场相对的位置穿过。
[0055]图3中所不的一种低频细胞循环分选系统可以分选的样品量为0.51111至2001111。
[0056]图2和图3中所示的两个实施例中的一种低频细胞循环分选系统的分选方法，步骤如下:
[0057]第一步:在控制系统中设定好流速、磁场强度、分选次数和样品个数；
[0058]第二步:临床上采集的血样与磁珠和抗体孵育完成后上样至进样室(01)；
[0059]第三步:血样通过样品泵(09)流至混合室(03)，同时缓冲液通过缓冲液泵(10)流至混合室(03),样品与缓冲溶液以一定比例混合通过分离泵(11)进入圆形分离区域
(15)；
[0060]第四步:样品中与磁珠连接的靶细胞/非靶细胞被磁场吸引滞留在磁场内，没有连接磁珠的非靶细胞/靶细胞从磁场中流出；
[0061]第五步:样品经所述圆形分离区域(15)后，控制系统开启三通件(06)与回流室
(07)之间的电动阀(12),使样品流至回流室(07)；
[0062]第六步:待混合室(03)中样品全部进入回流室(07)，控制系统开关闭三通件(06)与回流室(07)之间的电动阀(12),并开启回流室(07)与混合室(03)之间的电动阀(13),使样品流至混合室(03),重新经过所述圆形分离区域(15)；
[0063]第七步:按上次不断循环至完成设定好的分选次数；
[0064]第八步:控制系统开启三通件(06)与回收样品管(08)之间的电动阀(14),没有连接磁珠的非靶细胞/靶细胞直接流入回收样品管(08)；
[0065]第九步:去掉磁场后，用洗脱液洗脱与磁珠连接的靶细胞丨非靶细胞，并收集至回收样品管(08)，用标有“ + ”的回收样品管收集靶细胞，用标有“-”的回收样品管收集非靶细胞。
[0066]图1、图2和图3中所示的一种低频细胞循环分选系统的实施例中，样品泵(09)、缓冲液泵(10)和分离泵(11)均为蠕动泵，管道为弹性管道，蠕动泵可以按照一定频率挤压管道，因此样品可以在管道中流动，控制系统可以控制蠕动泵的开启和关闭，并可以控制蠕动泵挤压管道的频率。
[0067]图2和图3中所示的一种低频细胞循环分选系统的实施例中，可以同时分选两个样品，因为从图2和图3中可以得出采用了双通路分选设计，因此也可以同时进行正选或负选，所谓正选是指在阳性的分离过程中，磁珠上包被能够结合靶细胞表面抗原的特异性基团，靶细胞在与配套试剂混合的同时被磁珠标记，磁场作用与混合液，使靶细胞单独被截留在两个磁场中间的管道内，未被标记的细胞从系统中流出后，磁场磁力消失，靶细胞得到释放，最终收集到容器中。所谓负选是指，在损耗大时可采用阴性分离，非靶细胞被磁珠标记，在磁场打开时，可使靶细胞流出并收集。
[0068]以上所述，仅是本实用新型较佳的实施方式，并非对本实用新型的技术方案做任何形式上的限制。凡是依据本实用新型的技术实质对以上实施例做任何简单修改，形式变化和修饰，均落入本实用新型的保护范围。