专利名称：低浓度的囊泡型磷脂凝胶作为小分子肽类药物缓释载体的应用的制作方法现在许多具有前景的新药都属于多肽或蛋白质类药物，该类药物为疾病的治疗提 供了新的方向，然而该类药物的广泛应用仍然面临着许多挑战。多肽类药物易通过脱酰胺 作用、美拉德反应、氧化或水解等反应降解而失去活性。而且，在极端条件如低PH值的情况 下，还会加速该类降解反应的进行，从而降低该类药物的生物利用度。此外，肽类药物相对 较高的分子量和带有较高电荷等特性也影响了其吸收。所以，该类药物通常需要通过非肠 道途径给药。由于该类药物在血浆中的半衰期较短，需要持续的注射或滴注给药，才能获得 良好的生物利用度。为了克服由持续注射和滴注给药所带来的低顺应性、高毒副反应发生 率、高治疗消费等问题，提供一种可注射的多肽或蛋白质类药物的缓释给药系统日益成为 临床治疗的迫切需求。随着药物传递系统的不断发展，通过一些特殊的传递方法与策略，已经部分解决 了肽类药物存在的一些问题。现在，将肽类药物包埋在微环境或固体中已成为非常活跃的 领域，如PLGA微球、脂质体等。然而，PLGA微球制备工艺复杂，残留的有机溶剂有害，降解 产物的酸性可能引起局部无菌性炎症；传统的脂质体存在包封率低、药物易泄露等问题，且 不利于水溶性药物的应用。囊泡型磷脂凝胶(vesicular phospholipid gels，VPG)是一种半固体的磷脂分散 体系。形态上类似囊泡，而又区别于传统意义上的脂质体凝胶和普通脂质体室结构。由于 具有独特的三维网状立体结构，VPG可以作为药物的“贮库”，从而控制药物的释放。增大的 磷脂浓度使相邻囊泡间的间隔缩小，最终结果是封闭囊泡内和囊泡间均含有一定体积的水 相，适合于装载水溶性、脂溶性以及两亲性药物。尤其对水溶性药物而言，囊泡内外近乎相 等的水相体积不仅使其包封率提高，而且药物在囊泡内和囊泡外均存在，内外浓度趋于一 致，一定程度上减弱了由于浓度梯度造成的药物渗漏等对稳定性的影响，为其开拓了前瞻 性的应用前景。尽管，现有技术中披露了关于囊泡型磷脂凝胶作为肽类药物的缓释给药系统 的报道。例如，Brandl, Winter等人所在的研究小组分别采用小分子化学药物钙黄 绿素和5-氟尿嘧啶、小分子多肽西曲瑞克以及以大分子蛋白红细胞生成素作为模型 药物，在自制的释放流通池中研究以VPG作为药物贮库时的体外释放行为(C.Tardi， Journal of Controlled Release 55 (1998)261-270 ;N.Kaiser, International Journal ofPharmaceutics 256(2003) 123-131 ；H. Grohganz,, European Journal of Pharmaceutics andBiopharmaceutics 59(2005)439-448 ；W.Tian,Journal of ControlledReleasel42 (2010) 319-325)，发现药物的释放呈线性特征，并与磷脂的含量、组成和所带电 荷有关，药物释放时间依赖于磷脂含量，磷脂含量越高，药物释放越慢。当磷脂含量在40% 以下时，小分子化学药物和小分子多肽在IOh内就几乎完全释放，达不到理想的缓释效果； 只有分子量高达数万的大分子蛋白才有良好的缓释效果。然而，磷脂的含量越高，VPG的稠 度越大，达到40%以上的磷脂含量时，VPG呈粘稠的、几乎不能流动的半固体，难以实现注 射给药的目的。上述研究认为小分子药物的释放受到扩散和溶蚀两种作用的影响，而对于大分子 药物的释放，扩散作用不明显，溶蚀占主导地位。该小组成员G. Winter申请的有关以VPG 作为蛋白类药物缓释载体的专利EP2210589中限定了多肽分子量不少于3400D，优选5000D 以上。另外，专利文献93119112. 2披露了一种在体内形成卵磷脂凝胶以持续释放生物 活性化合物的药用组合物，其通过添加其它的类脂成分如中链脂肪酸酯、硬脂酸等来提高 磷脂凝胶对药物的缓释作用。磷脂溶解在溶剂如中链甘油三酯或中链甘油三酯的混合物 中，形成的是真溶液而不是形成囊泡，所以高浓度的磷脂溶液其粘度也相对较低，易于注射 给药；这种组合物注射入体内后吸收水分会乳化，由于溶剂中链甘油三酯的量较大，乳化形 成的微粒是油滴而不是囊泡，这些油滴聚集在一起，再形成凝胶，但实质上并非本申请所定 义的囊泡型磷脂凝胶。该凝胶中水溶性药物仅存在于乳滴之间的水相中，与本申请中药物 在囊泡内和囊泡间均勻存在的结构完全不同，且小分子多肽药物采用这种制剂，不存在脂 溶性囊泡膜对水溶性药物的控释作用，药物会通过乳滴间的水相通道快速扩散，其缓释效 果不佳。专利文献200580(^8570. 0发明名称为“递药用磷脂凝胶组合物及用其治疗病症 的方法”，虽然使用了磷脂凝胶的名称，但其实质是使用大量的有机溶剂起缓释作用，磷脂 溶解在溶剂中形成真溶液，其中磷脂的量仅为药物组合物的0. 1 10%，溶剂为环亚甲基 甘油醚或碳酸丙烯酯等，由于粘度较大，呈凝胶状，但并不是囊泡聚集成的凝胶，且该组合 物目的是用于口服和外用，不能实现注射。专利文献200580025364. 4提供了一种可注射的非脂质体组合物，其适于以凝胶 或糊剂形式用作组织填充物，并包含磷脂组分和药物可接受的流体载体，其中所述磷脂组 分占所述组合物总重量的约10%至约90%。该组合物是通过添加有机溶剂和非磷脂填充 物组分来调节组合物的稠度和控制活性成分的释放，溶剂如丙二醇、甘油本身就有一定的 毒性和刺激性。该专利文献的实施例3属于磷脂凝胶的范畴，但是未对具体药物进行实验。 本发明人经过对比实验后发现此配方的缓释效果远远不如本产品，经过创造性的选择发明 之后的本发明的制剂在小分子多肽药物的缓释方面上取得了本领域技术人员预料不到的 技术效果。综上所述，目前还没有缓释效果好且磷脂含量相对较低，易于注射给药的小分子 肽类药物的囊泡型磷脂凝胶剂。在不影响小分子肽类药物的活性的情况下，载药量高、稳定 性好、副作用少，并且能够达到理想缓释效果的囊泡型磷脂凝胶剂为小分子肽类药物的应 用开拓了新的前景，具有良好的社会和经济效益。
本发明的目的是提供一种缓释效果好、磷脂含量相对较低、易于注射给药的小分 子肽类药物的囊泡型磷脂凝胶剂及其制备方法。现有的研究资料显示，对于低分子量的多肽药物而言，如果VPG中磷脂的浓度低 于40%，不具有明显的缓释作用。然而，本发明人通过长期研究认为，现有技术中仅使用自 制的释放流通池在体外测定VPG中药物的释放行为，没有考虑到体内外环境的巨大差别， 未进行体内实验，因而，得出小分子多肽在低浓度VPG中缓释效果不好的错误结论。本发明人通过创造性的研究，选用基于凝胶剂重量计磷脂含量为20% 40% (g/ g)的VPG为载体，包裹多种小分子量的多肽药物例如分子量仅为1019. 2的小分子多肽醋酸 奥曲肽，制剂不但流动性很好，用普通注射器可直接注射到动物皮下，而且得到了本领域技 术人员预料不到的结果，定时取血测定其药物释放情况，在体内缓释时间长达20余天，完 全不同于体外仅能缓释不到IOh的结果，由此证明较低磷脂浓度的VPG在体内释放机制和 体外显著不同，从而提出了本发明以下的技术方案。本发明的目的是提供一种小分子肽类药物的低浓度囊泡型磷脂凝胶剂，包含磷脂 和小分子肽类药物。本发明提供了一种小分子肽类药物的低浓度囊泡型磷脂凝胶剂，其中磷脂含量基 于凝胶剂重量计为约20% 约40% (g/g)，或约25% 约35% (g/g)。适用于制备本发明所述的囊泡型磷脂凝胶剂的小分子肽类药物主要是水溶性分 子，优选是分子量在约300D 约3300D之间，包括但不限于抗癌剂类、基因转移载体类、 局部麻醉药类、抗炎剂类、抗感染药类、止痛药类、激素类、抗糖尿病药类、抗高血压药类、抗 爱滋病药类、增强免疫药类、抗病毒药类、强心药类、抗肥胖药类、骨代谢调节剂类、抗惊厥 剂类、抗抑郁药类、抗精神病药类、抗帕金森病(parkinisonian)药类、戒烟助剂类、尿路药 类、抗骨质疏松药类、细胞附着促进剂类以及避孕剂类。本发明的目的是提供一种小分子肽类药物的低浓度囊泡型磷脂凝胶剂，基于凝胶 剂重量计，磷脂含量为约20% 约40% (g/g)，小分子肽类药物的分子量约为约300D 约 3300D，其含量为约0.001% 约20% (g/g)。适用于本发明的小分子肽类药物更佳优选地，包括但不限于组氨瑞林、生长激素 释放肽-2、生长激素释放肽-6、奥曲肽、催产素、西曲瑞克、增血压素、阿托西班、精氨酸加 压素、比伐卢定、德舍瑞林、去氨加压素、依非巴肽、戈那瑞林、亮丙瑞林、洛塞那肽、赖氨酸 加压素、人胰高血糖素样肽-1、生长抑素、特利加压素、曲普瑞林、齐考诺肽、布舍瑞林、戈舍 瑞林、胸腺肽al、阿拉瑞林，舍莫瑞林、那法瑞林、黄体瑞林、夫替瑞林、辛卡利特、胸腺五肽、 艾塞那肽、普伐肽、卡贝缩宫素、阿巴瑞克、阿肽地尔、普罗瑞林、亮氨酸脑啡肽、甲硫脑啡 肽、替可克肽、促性腺素释放激素、促甲状腺素释放激素、生长激素释放激素(CHRH)、生长激 素抑制素(CHIH)、促黑色素细胞抑制激素(MRIH)、促黑色素细胞释放激素(MRH)、促皮质素 释放激素、促胃泌素17肽、促胃泌素14肽、促胃泌素5肽、促胃泌素4肽，胰泌素、P物质、神 经降压肽、蛙皮肽14肽、蛙皮肽10肽、人脑利钠肽、血管紧张肽I、血管紧张肽II、血管紧张 肽III、睡眠肽、记忆增强肽、海沙瑞林、强啡肽、内啡肽、血管紧张素、恩夫韦地、CJC-1295, 依来多辛、布雷默浪丹、依降钙素、胸腺肽β 4、胰高血糖素、加压素、鞣酸加压素、苯赖加压 素、鸟氨酸加压素、美拉诺坦II、脾脏五肽、普兰林肽、伐普肽、促皮质素、丝赖促皮质18肽、甘精促皮质18肽、锌促皮质对肽、促皮质对肽、促皮质％肽、促皮质观肽、血管活性肠肽、 脑钠尿肽、缓激肽、孤啡肽等或上述药物的药学上可接受的盐形式。更进一步地，上述小分子多肽药物的药学上可接受的盐形式包括但不限于醋酸 盐、盐酸盐、枸橼酸盐等多种药学上可用盐形式。在另一个方面，本发明的一种小分子肽类药物的低浓度囊泡型磷脂凝胶剂，基于凝胶 剂重量计，所述小分子肽类药物的含量为约0. 001% 约10% (g/g)，或约0. 01% 约5% (g/ g) °在另一方面，适用于本发明的囊泡型磷脂凝胶剂的磷脂，包括但不限于，天然磷 脂、半合成磷脂、合成磷脂中一种或多种的组合。所述天然磷脂，包括但不限于蛋黄卵磷脂、大豆磷脂或其组合等。所述半合成磷脂，包括但不限于氢化蛋黄磷脂等。合成磷脂，包括但不限于二棕榈酰磷脂酰乙醇胺、二棕榈酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰 磷脂酰胆碱、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱、二油酰磷脂酰乙醇胺、二棕榈酰磷脂酰甘油、二棕榈 酰磷脂酸中的一种或多种的组合等。在一个实施方案中，本发明优选大豆磷脂和氢化蛋黄卵磷脂的组合，进一步优选 为重量份大豆磷脂氢化蛋黄卵磷脂为3 2的组合。在一个实施方案中，本发明优选蛋黄卵磷脂E80。在一个实施方案中，本发明优选二棕榈酰磷脂酰乙醇胺和二棕榈酰磷脂酰甘油的 组合，进一步优选为重量份二棕榈酰磷脂酰乙醇胺二棕榈酰磷脂酰甘油为2 3的组合。在另一方面，本发明提供了一种制备小分子肽类药物的低浓度囊泡型磷脂凝胶剂 的方法。在一具体实施方案中，本发明的小分子肽类药物的囊泡型磷脂凝胶剂的制备方 法，包括下述步骤(1)取小分子肽类药物溶于适量的纯水或盐溶液中，形成药物溶液；(2)取磷脂与药物溶液混合，搅拌混勻，即得囊泡型磷脂凝胶剂；还可以将( 步所得混合物经过高压乳勻数次，使囊泡粒径更均勻。其中，步骤(1)所述的盐溶液包括NaCl水溶液、磷酸盐缓冲液、碳酸盐缓冲液等， 根据保持多肽的稳定性的需要来确定具体成分、浓度和PH值的量。磷酸盐缓冲液选自磷酸钠、磷酸二氢钠、磷酸氢钠等中的一种或其组合，优选pH 值为4. 0 9. 0。碳酸盐缓冲液选自碳酸钠、碳酸氢钠或其组合，优选pH值为4. 0 9. 0。在另一个具体实施方案中，本发明提供了一种制备小分子肽类药物的囊泡型磷脂 凝胶剂的优选方法，包括下述步骤(1)取小分子肽类药物溶于适量的纯水或盐溶液中，形成药物溶液，0. 22 μ m微孔 滤膜过滤灭菌；(2)在无菌条件下取磷脂与药物溶液混合，搅拌至均勻；(3)将( 步所得混合物在无菌条件下经过高压乳勻3 5次，即得囊泡型磷脂凝 胶剂。本发明人进一步研究发现，某些小分子多肽药物实际上搅拌均勻后不高压乳勻，缓释效果更好，由此提出以下技术方案。在另一个具体实施方案中，本发明提供了一种制备小分子肽类药物的囊泡型磷脂 凝胶剂的优选方法，包括下述步骤(1)取小分子肽类药物溶于适量的纯水或盐溶液中，形成药物溶液，0. 22 μ m微孔 滤膜过滤灭菌；(2)在无菌条件下取磷脂与药物溶液混合，搅拌至均勻，即得囊泡型磷脂凝胶剂。本发明所述的囊泡型磷脂凝胶可以用于注射给药，也可以外用给药等其他给药形 式。本发明也包括用治疗量的小分子多肽药物持续治疗人或其他哺乳动物的方法，它 包括经肌内或皮下给予本发明组合物。本发明的另一个目的是提供了所述低浓度囊泡型磷脂凝胶剂在制备传递小分子 肽类药物的药物中的应用。本发明的另一个目的是提供了所述低浓度囊泡型磷脂凝胶剂作为(传递)小分子 肽类药物的载体的用途。本发明的磷脂材料的组分可以用能提供充分均勻的混合物的任何方法混合和/ 或加工。例如，可以用反复通过泵或在具有小直径互连管道的相邻注射管之间反复转移，使 组分均勻地混合。提供必要混合的适合的注射管装置描述在如US4743229A中，将该专利公 开内容通过引用并入本文。另外，在某些实施方案中，将所得到的混合物机械搅拌，以减少 微粒尺寸而产生可灌注的(或可注射的)植入组合物。可在将组合物给予动物(例如，人) 之前或在植入位点，进行磷脂组合物的各种组分的混合。本发明的磷脂组合物也可以用于生物活性剂的局部输送。这种输送可用于治疗实 体肿瘤，其中生物活性剂是抗癌剂；用于治疗慢性疼痛，其中生物活性剂是麻醉剂；或治疗 慢性牙周病，其中生物活性剂是抗感染药。本发明的组合物可以作为试剂盒存储，其中分离的各个组分(即，磷脂组分、流体 载体及其它任选组分)分开包装或作为混合物包装。试剂盒可进一步包括制备磷脂组合物 (如果各个组分是分开包装的)和使用磷脂组合物的说明书。例如，在特定实施方案中，本 申请提供了用于制备凝胶或糊剂形式的可注射的非脂质体组合物的试剂盒，其包括含有一 种或多种磷脂的容器，含有药物可接受的流体载体的另一容器，以及混合磷脂和药物可接 受的流体载体以制备凝胶或糊剂形式的可注射的非脂质体组合物的说明书。本发明的优点本发明采用“直接包封”法，将药物溶于水或缓冲溶液中，与磷脂混合，搅拌混勻， 再高压乳勻数次制备形成囊泡型磷脂凝胶剂。磷脂分散在水中，远超过饱和状态。众多磷 脂分子相互竞争，借助高强度的剪切力，形成三维网状囊泡磷脂凝胶。最终导致封闭囊泡内 和囊泡间均含有一定体积的水相，使水溶性药物的包封率显著提高。由于内外药物浓度趋 于一致，一定程度上减弱了浓度梯度造成的药物渗漏等对稳定性的影响。此外，采用生物相 容性好的磷脂作为载体，可以减少毒副反应。本发明所述的囊泡型磷脂凝胶剂由于具有三维网状结构，可以阻碍药物扩散，从 而达到较好的缓释效果，其缓释可以达到数天或数十天。取醋酸亮丙瑞林lOOmg，溶于7ml醋酸盐缓冲液(20mM，pH6. 0)中，得到药物溶液， 加入蛋黄卵磷脂E803g，搅拌lh，混勻，即得醋酸亮丙瑞林的囊泡型磷脂凝胶。其粒径分布 在30nm 5000nm之间。效果实验实验1磷脂浓度对于囊泡型磷脂凝胶的缓释作用的影响证明了基于凝胶剂重量计磷脂含量为20% 40% (g/g)的磷脂浓度对于300D 3300D的小分子肽类药物的缓释作用。材料以下组分采用实施例1的方法制备而成。40%实施例都按照15ml的量计 算，而其它的都是10ml。表1不同磷脂浓度对醋酸奥曲肽缓释时间的影响比较本发明提供一种小分子肽类药物的低浓度囊泡型磷脂凝胶制剂，并提供了该小分子肽类药物囊泡型磷脂凝胶制剂的制备方法。本发明以20％～40％磷脂形成低浓度的囊泡型凝胶磷脂，并将分子量约300D～约3300D的小分子肽类药物包裹其中，具有适宜注射给药、外用给药等多种形式，生理相容性好，载药量高，稳定性好，特别是具有较长时间的缓释作用。