专利名称：具有抗炎症活性的香菇β-葡聚糖及其制备方法和应用的制作方法炎症是宿主对内在或外在环境刺激的一种响应。该响应过程严格受控于生理条件，短时间内的急性炎症具有治疗效果，然而由于生理失控导致炎症持续时间过长或转变成慢性炎症时，它就会对机体产生伤害作用，甚至导致一些重大疾病出现，如心脑血管疾病、糖尿病、关节炎、老年痴呆症、自身免疫性疾病和癌症等。近年来，很多研究者致力于抗炎症药物的研究和开发。在众多抗炎症药物中，有机化合物类居多，不可避免地会产生不同程度的毒副作用。香菇(Lentinus edodes)是一种兼食用和药用为一体的大型真菌，香菇中最重要的香菇多糖有很明显的抗肿瘤活性，增强宿主对细菌、真菌、病毒和寄生虫感染的抵抗能力，增强自然杀伤细胞和细胞毒性T细胞活性等多种生物学和免疫学活性。香菇多糖有多种类型，目前研究表明，香菇多糖中存在四种杂多糖(L-FI_L-FIVn)和两种葡聚糖(L-FV和 L-FVIn)。但对香菇多糖的进一步研究相对较少，尤其是新多糖的发现和研究。
本发明的目的在于提供一种具有抗炎症活性的棒状香菇葡聚糖，该葡聚糖具有显著的抑制LPS(革兰氏阴性菌)诱导的炎症调节因子一氧化氮(NO)、肿瘤坏死因子 (TNF-α)、白细胞介素IL-Ia和IL-1 γ α等的释放。本发明的另一个目的在于还提供上述香菇葡聚糖的制备方法，该制备方法简单易行、成本较低廉。本发明目的还在于提供上述香菇β -葡聚糖在制备抗炎症或提高免疫机能的药物或保健品中的用途。为实现上述目的，本发明首先提供一种具有抗炎症活性的棒状香菇葡聚糖， 其主链为β - (1 —幻-葡聚糖，平均每7 10个主链葡萄糖残基含2 3个(1 — 6)键接的葡萄糖侧基，它在水中呈棒状链。研究表明，该葡聚糖具有显著的抑制LPS (革兰氏阴性菌)诱导的炎症调节因子一氧化氮(NO)和肿瘤坏死因子(TNF-a)释放的作用。本发明还提供了上述棒状香菇葡聚糖的制备方法，其包括如下步骤将香菇子实体粉碎，脱脂，用生理盐水浸泡，离心，收集残渣；取残渣在100 130°c沸水下提取，离心，收集残渣在纯水中进行超声提取，离心得提取液；提取液脱色后，除去游离的蛋白质，用水透析，浓缩，冷冻干燥得到白色香菇β -葡聚糖纯品。对于香菇子实体，采用干燥子实体，更易于粉碎，优选可以粉碎至3 7目，使其提取效率更高。其中所述脱脂的方法可以采用索氏提取法提取去除脂肪，具体可以依次用乙酸乙酯、丙酮作为提取溶剂进行，提取6 10小时。生理盐水浸泡可以去除细胞壁外的水溶性小分子，浸泡时间为8 M小时，重复 1 4次。其中所述沸水提取方法是用残渣3 5倍体积的水煮20 40分钟，重复1 4 次。其中所述超声提取的条件为温度20 30°C，频率18 30KHz，功率400 600W， 时间16 20min。其中所述脱色可以用H2A进行脱色。其中所述游离蛋白的去除采用Sevag法除去游离的蛋白质，一般6 10次。本发明香菇葡聚糖具有显著的抑制LPS(革兰氏阴性菌)诱导的炎症调节因子一氧化氮(NO)、肿瘤坏死因子(TNF-α )、白细胞介素IL-I α和IL-1 γ α等的释放。因而本发明香菇葡聚糖可以用于抗炎症或提高免疫机能的药物或保健品中。进而，本发明还提供含有上述香菇β-葡聚糖的抗炎症或提高免疫机能的药物或保健品。本发明具有如下优点1、该β-葡聚糖来源于我国特产资源，产量丰富、成本低廉；2、该β-葡聚糖提取工艺简单，提取过程容易控制；3、该β -葡聚糖抑制NO和TNF- α效率高，可达70 %以上；抑制IL_1 α和 IL-I γ α 可达 100%。4、该β -葡聚糖无毒副作用，生物相容性好。 图1.香菇β -葡聚糖LNT-S的13CNMR, IR,和GC图谱。图2.香菇β -葡聚糖LNT-S对LPS体外诱导的炎症因子__Ν0(图2Α)和 TNF-a (图2B)的抑制率。图3. LNT-S对炎症因子合成酶iNOS (图3A)、炎症基因iNOSmRNA (图3B)和 TNF-amRNA(图3C)表达的抑制。图4. LNT-S对LPS诱导的炎症因子IL_1 α和IL_1 γ α的抑制率。

本发明公开了一种香菇β-葡聚糖，其主链为β-(1→3)-D-葡聚糖，平均每7～10个主链葡萄糖残基含2～3个(1→6)键接的葡萄糖侧基，它在水中呈棒状链。其制法是，将香菇子实体粉碎，脱脂，用生理盐水浸泡，离心，收集残渣；取残渣在100～130℃沸水下提取，离心，收集残渣在纯水中进行超声提取，离心得提取液；提取液脱色后，除去游离的蛋白质，用水透析，浓缩，冷冻干燥得到香菇β-葡聚糖。本发明香菇β-葡聚糖具有显著的激活巨噬细胞作用，以及较高的抑制炎症调节因子NO和TNF-α释放的效应，可用于制备提高免疫机能和抗炎症的药物或保健品。