专利名称：一种鹅掌楸的生物碱提取物及其提取方法和应用的制作方法木兰科鹅掌楸属仅有两个种，一种为天然分布于美国东部的北美鹅掌楸，另一种为分布于我国南部的马褂木。这两个种在美国、中国和世界其他国家均有药学历史记载。 北美鹅掌楸，即郁金香树或黄杨树，是一种高大的树种，通常可达一百英尺高，是美国东部 (Keeler，1902)特有的树种。北美鹅掌楸的树皮被印第安人用作补品、兴奋剂和退热药， 并有可能用于治疗由疟疾引起的间歇性发烧(Rafinesque等，1828)。北美鹅掌楸在美国历史上被用作抗疟疾药物近年来被大量证实(R. Graziosea, T. Rathinasabapathy, C. Lategan, et al. 2011)。它还被后来的美国移民作为进口稀缺的秘鲁树皮(金鸡纳树皮) (Thacher, 1967)的替代品。在印度，北美鹅掌楸被用来治疗恢复、风湿、消化不良(S. K. Kuanar, 2006)。在中国，其近缘种马褂木的树皮、叶和根在传统中医中被用来治疗风湿和由于风邪入侵(风寒)导致的咳嗽(江苏新医学院，2001年)。1963年，一个新的杂交种，马褂木X北美鹅掌楸，由中国学者叶培忠教授成功培育。无论是在林木遗传育种理论上，还是在园林种植上都有骄人研究成果(Wang ZR，2003年)。然而，到目前为止，杂交树的药用价值尚未得到研究，尤其在治疗肿瘤的药物研究中。癌症每年在全球造成数百万人死亡。在逆转、抑制甚至预防癌症中，植物药单独或联合的医药干预在与肿瘤治疗中起到了关键作用(Siveen KS，Kuttan G. 2010)。人们对替代药品和无毒的抗肿瘤治疗方法越来越感兴趣。据报道，民族药或功能食品中的某些活性成分的对癌症有效，而且对正常的动物细胞是安全的(Hakimuddin et al.，2006)。
发明目的针对现有技术中存在的不足，本发明的目的是提供一种鹅掌楸的生物碱提取物。本发明的另一目的是提供一种提取上述提取物的方法。本发明还有一目的是提供一种上述提取在在制备用于治疗癌细胞药物中的应用。技术方案为了实现上述发明目的，本发明采用的技术方案如下一种鹅掌楸的生物碱提取物，由如下方法得到取鹅掌楸植物材料，35°C烘干，粉碎； 用10%氨水浸润12h，过滤，得残渣；1 h后，用氯仿回流2 h，过滤，浓缩，用的盐酸萃取3飞次，将盐酸萃取液用10%的氨水调节pH > 8，然后用氯仿萃取2 3次，过滤，合并，蒸干得总生物碱提取物。生物碱质量占总生物碱提取物质量的20-90%。所述鹅掌楸植物材料为3种鹅掌楸的叶和树皮。所述3种鹅掌楸植物为马褂木、北美鹅掌楸，以及杂交马褂木。—种提取鹅掌楸的生物碱提取物的方法，包括取鹅掌楸植物材料，35°C烘干，粉碎；用10%氨水浸润12h，过滤，得残渣；1 h后，用氯仿回流2 h，过滤，浓缩，用的盐3酸萃取3飞次，将盐酸萃取液用10%的氨水调节pH > 8，然后用氯仿萃取2 3次，过滤，合并，蒸干得总生物碱提取物。上述的鹅掌楸的生物碱提取物在制备用于治疗癌症细胞药物中的应用。所述的癌症细胞包括乳腺癌细胞MDA-MB-231、乳腺癌细胞MCF-7、胃癌细胞 SGC-7901、肝癌细胞Huh7和结肠癌细胞HCT15。有益效果本发明的鹅掌楸的生物碱提取物，突出的优点包括制备工艺简单，产物得率高，可以制备生物碱含量不同的提取物，该提取物具有良好的抑制肿瘤细胞的生长、 增值与转移能力，在制备用于治疗癌症细胞药物中的具有广泛的用途，具有一定的实用性， 能够产生很好的经济效益和社会效益。大学第一附属医院。以下实施例所使用的药品为没食子酸(GA)、福林酚(2M)、MTT (3- ，5-甲基-2-基]-2，3-diphenyltetrazodium溴)、氟脲嘧啶和阿霉素，均购自美国Sigma公司，其他所有化学品为分析试剂。实施例1取新鲜采集的鹅掌楸材料，将树叶和树皮分开，并立即在空气中35°C烘干。将干料研磨到中等细粉末，约40目，备用。取鹅掌楸植物材料350g，35°C烘干，粉碎至约40目的细粉末；用10%氨水浸润 12h，过滤，得残渣；Ih后，用2 L氯仿回流2 h，过滤，浓缩，用的盐酸萃取5次，100 mL/次，将盐酸萃取液用10%的氨水调节pH > 8，然后用氯仿萃取，100 mL/次，总计3次，过滤，合并，蒸干得总生物碱提取物。各鹅掌楸属的叶子和树皮中提取的方法与上述相同，各不同植物材料的提取物重量如表1所示。表1不同植物材料的提取物得率表
表中，LT 北美鹅掌楸；LC 马褂木；LX 马褂木X北美鹅掌楸；B 树皮；L 树叶。总生物碱测定方法
(1) Dragendorff reagent (DR)称取0. 8g的硝酸铋溶解在40mL蒸馏水+IOmL冰醋酸中，然后与20mL 40%的碘化钾溶液混合。(2 )标准曲线取18. 39mg硝酸铋溶解在5mL浓硝酸中，然后用蒸馏水定容至IOOmL,得硝酸铋储存溶液。取硝酸铋储存溶液样稀释成379. 1,284. 3,213. 3、160. 0,120. 0、 90. 0,67. 5,50. 6和38. 0 μ mol/L，取各稀释溶液ImL,向其中加入3%的硫脲5mL，在435nm 中测定形成的黄色复合物的吸光度，作回归曲线。(3)标准溶液在5mL蒸馏水中溶解5mg boIdine (波尔定碱，N-甲基六驳碱)。称取0. 15g总生物碱提取物同样溶解在5mL蒸馏水中。(4)用0. OlM HCl溶液调整标准溶液和试样溶液的pH=2 2. 5，分别加入2mL DR溶液形成橙色沉淀，在5000rpm离心15min，在离心所得上清液中再加入DR，检查是否沉淀完全，收集离心所得的沉淀。(5)在沉淀中加入2mL 1%的硫化钠溶液，形成褐黑色沉淀，然后5000rpm离心 15min，在上清液中加入1%的硫化钠溶液，检查沉淀是否完全，收集沉淀。(6)沉淀溶解在2mL硝酸溶液中，加热，声波降解，蒸馏水定容至10mL，取ImL上述溶液加入5mL3%硫脲，产生黄色的铋复合物，在435nm下测定其吸光度。总生物碱含量结果表示为NIB的百分重量。具体测定结果如表2所示。(7)计算方法生物碱 ％=n样 X 1/1000X10X313. 3511/1000 (mg)/m样 X100% ；η样 =A样/A对Xn对(umol/L);根据标准曲线及boldine与铋的摩尔比为1:1，得到A对所对应的摩尔量；A对为对照品吸光度，A样为样品，M(去甲基波尔丁碱)=313. 3511mol/L, m# =若干mg。表2从植物叶和树皮中抽提出的生物碱提取物成份表


本发明公开了一种鹅掌楸的生物碱提取物及其提取方法和应用，鹅掌楸的生物碱提取物由如下方法得到取鹅掌楸植物材料，35℃烘干，粉碎至约40目的细粉末；用10％氨水浸润12h，过滤，得残渣；1h后，用2L氯仿回流2h，过滤，浓缩，用1%~2%的盐酸萃取5次，100mL/次，将盐酸萃取液用10%的氨水调节pH＞8，然后用氯仿萃取，100mL/次，总计3次，过滤，合并，蒸干得总生物碱提取物。鹅掌楸的生物碱提取物，提取方法简单，方便，生物碱得率高，该提取物具有良好的抑制肿瘤细胞的生长、增值与转移能力，在制备用于治疗癌症细胞药物中的具有广泛的用途，具有一定的实用性，能够产生很好的经济效益和社会效益。