专利名称：一种制备氯吡格雷手性中间体(s)-邻氯苯甘氨酸甲酯的化学-酶法的制作方法氯吡格雷(Clopidogrel)，化学名为(S)-a-(2_氯苯基)_4，5，6，7_ 四 氢噻吩并[3,2-c]吡啶-5 (4H)-乙酸甲酯((S) - a - (2-chlorophenyl) -4,5,6, 7-tetrohydrothieno [3，2-c]pyridine_5 (4H)-acetic acid methylester)。氯口比格雷由日 本第一制药和法国赛洛非(Sanofi)公司共同开发，1998年在美国上市。氯吡格雷在体外 无生物活性，口服后经肝细胞色素P450酶系转化为活性代谢物。活性代谢物与血小板膜上 的二磷酸腺苷(ADP)受体不可逆结合，抑制ADP诱导的血小板膜表面纤维蛋白原受体(GP Ilb/IIIa)活化，导致纤维蛋白原无法与该受体发生粘连而抑制血小板聚集。氯吡格雷临床 上主要用于预防缺血性脑卒中、心肌梗死及外周血管病等。CJ氯吡格雷的制备方法主要有两条技术路线1)合成氯吡格雷消旋体，然后采用樟 脑磺酸等手性拆分剂拆分得到(S)-对映体；2)以3-噻吩乙醇为原料，与(S)-邻氯苯甘氨 酸甲酯经磺化、取代、合环、得到目标产物。目前，主要采用第二条技术路线。(S)_邻氯苯甘氨酸及其甲酯的制备方法包括1)生物催化拆分。以微生物酰胺酶 为催化剂水解消旋邻氯苯甘氨酸酰胺(W0 0187819，EP1770166)制备(S)-邻氯苯甘氨酸。 由于酰胺溶解度低，酰胺酶需要发酵产生限制了该法的规模化应用；2)化学拆分。以D-樟 脑磺酸为拆分剂，拆分消旋邻氯苯甘氨酸，收率仅为理论值的42% (US2004/0176637A1)。 以L-酒石酸为拆分剂拆分消旋邻氯苯甘氨酸甲酯，得到(S)-邻氯苯甘氨酸甲酯-L-酒石 酸盐，进一步用NaHCOj 盐得到(S)-邻氯苯甘氨酸甲酯(TO 2006/003671 A1，)。存在的 问题是化学拆分后的(S)_邻氯苯甘氨酸甲酯的光学纯度不高(ee < 98% )，影响终端产物 氯吡格雷的光学纯度。欲使氯吡格雷的光学纯度符合标准，必须增加重结晶步骤。3
本发明的目的是提供一种新的制备(S)_邻氯苯甘氨酸甲酯的化学酶法。以(R， S)_邻氯苯甘氨酸为原料，采用酰化剂衍生得到(R，S)-N_苯乙酰邻氯苯甘氨酸。以固定 化酶为生物催化剂，在水介质中对映选择性催化(R，S)-N_苯乙酰邻氯苯甘氨酸为(S)_邻 氯苯甘氨酸、苯乙酸和(R)-N-苯乙酰邻氯苯甘氨酸。(S)-邻氯苯甘氨酸在甲醇中转化为 (S)-邻氯苯甘氨酸甲酯盐酸盐，然后解盐形成(S)-邻氯苯甘氨酸甲酯。(R)-N-苯乙酰邻 氯苯甘氨酸与有机酸共熔消旋为(R，S)-N-苯乙酰邻氯苯甘氨酸用于循环拆分。技术路线如下 本发明包括下列步骤1)、(R，S)-N-苯乙酰邻氯苯甘氨酸制备在-10-10°C和PH8-10条件下，将(R， S)-邻氯苯甘氨酸搅拌溶解在NaOH溶液中，在冰浴条件下滴加酰化剂，其中(R，S)-邻氯苯 甘氨酸、NaOH及酰化剂的摩尔比为1 2-3 1_3 ；滴加完毕后，室温下反应6_24h ；反应完 成后用盐酸调PH1-2，搅拌下析出(R，S)-N-苯乙酰邻氯苯甘氨酸固体；2)、(R，S)-N_苯乙酰邻氯苯甘氨酸酶催化水解在20-40°C和pH8-10条件下， 每升水中0. l-o. 5mol的(R，S)-N-苯乙酰邻氯苯甘氨酸在固定化青霉素酰化酶催化下 水解10-20h;其中，固定化青霉素酰化酶与(R，S)-N-苯乙酰邻氯苯甘氨酸的质量比为 1 3-10 ；反应完成后，浓盐酸调pHl-2，析出苯乙酸和(R)-N-苯乙酰邻氯苯甘氨酸；滤液 浓缩，调等电点析出(S)_邻氯苯甘氨酸；3)、(S)_邻氯苯甘氨酸甲酯盐酸盐制备在0_5°C下，将(S)_邻氯苯甘氨酸加入无 水甲醇中，滴加S0C12，滴加完毕，在室温下反应5-24h;(S)_邻氯苯甘氨酸、S0C12*无水甲 醇的摩尔比为1 2-4 30-60;反应完成后60°C温度下减压蒸馏，得到(S)-邻氯苯甘氨酸甲酯盐酸盐；4)、(S)_邻氯苯甘氨酸甲酯制备0-50°C温度下，每升pH8. 0-10的碱性溶液中搅 拌加入0. 03-1.0mol(S)-邻氯苯甘氨酸甲酯盐酸盐，用与碱性溶液等体积的012(12萃取；有 机层用水洗2-4次，无水Na2S04干燥，在60°C下减压蒸馏除去CH2C12，得到(S)-邻氯苯甘氨 酸甲酯；5) (R)-N-苯乙酰邻氯苯甘氨酸消旋化(R)-N_苯乙酰邻氯苯甘氨酸与苯乙酸按 1 ；1摩尔比混合，在150-200°C下共熔消旋10-60分钟，得到(R，S)-N-苯乙酰邻氯苯甘氨 酸，用于步骤2)开始的循环拆分。本发明的有益效果与现有技术相比，本发明提出的方法具有以下优点1)固定化青霉素酰化酶高度 的对映选择性，保证了(S)-邻氯苯甘氨酸的高光学活性。以高光学活性(s)-邻氯苯甘氨 酸甲酯为手性中间体，革除了氯吡格雷的重结晶步骤，简化了氯吡格雷的制备工艺；2)以 酶反应过程中产生的苯乙酸作为(R)-N-苯乙酰邻氯苯甘氨酸消旋化的有机酸，不仅有效 利用了反应副产物，而且消旋时间短，消旋率和消旋收率高；3)无效对映体的循环拆分和 固定化青霉素酰化酶的循环使用，大大降低了过程成本。
本发明提供一种制备抗血栓药物氯吡格雷手性中间体(S)-邻氯苯甘氨酸甲酯的化学-酶法。该方法以(R，S)-邻氯苯甘氨酸为原料，利用酰化剂衍生为(R，S)-N-苯乙酰邻氯苯甘氨酸。以固定化青霉素酰化酶为生物催化剂，在水介质中对映选择性催化(R，S)-N-苯乙酰邻氯苯甘氨酸为(S)-邻氯苯甘氨酸、苯乙酸和(R)-N-苯乙酰邻氯苯甘氨酸。(S)-邻氯苯甘氨酸在甲醇中转化为(S)-邻氯苯甘氨酸甲酯盐酸盐，然后解盐形成(S)-邻氯苯甘氨酸甲酯。(R)-N-苯乙酰邻氯苯甘氨酸与有机酸共熔消旋为(R，S)-N-苯乙酰邻氯苯甘氨酸，用于循环拆分。方法具有收率和光学纯度高，环境友好的特点。