早鸽—汇聚行业精英
  • 联系客服
  • 帮助中心
  • 投诉举报
  • 关注微信
400-006-1351
您的问题早鸽都有答案
3000+专业顾问
搜索
咨询

Mgb标记的dna分子信标探针及应用制作方法

  • 专利名称
    Mgb标记的dna分子信标探针及应用制作方法
  • 发明者
    王虹, 王 虹
  • 公开日
    2004年9月8日
  • 申请日期
    2003年3月7日
  • 优先权日
    2003年3月7日
  • 申请人
    王虹, 王 虹
  • 文档编号
    C12Q1/68GK1526828SQ0310718
  • 关键字
  • 权利要求
    1.寡核苷酸探针的3’端标记小沟结合基团(MGB)DPI3,5’端标记荧基团FAM.TET或Cy3等荧光物质2.经MGB和荧光标记的寡核苷酸探针与靶基因的特异性互补序列含13-16个碱基长度3.MGB标记寡核苷酸荧光探针应用于基因点突变、单核苷酸多态性(SNP)及基因的定性、定量检测
  • 技术领域
    生物医学 基因分子诊断技术技术背景分子信标(molecular beacon)又译作分子灯塔,是一种特殊的荧光标记寡核苷酸探针,可用于实时检测聚合酶链反应(PCR)产物数量和效率,具有灵敏度高、特异性好、能定性定量的优点分子信标用于基因诊断的原理是在寡核苷酸探针的5’和3’端分别标记报告荧光基团(reporter,R)和淬灭基团(quencher,Q),并使R和Q两个基团临近的几个碱基(4-6个)互补,而中间的序列则是能与靶DNA特异性互补的碱基序列这样在游离情况下,荧光探针的两端互补折叠成茎环结构(stem-loop structure)R基团与Q基团空间上非常接近,R基团经激发后射出的荧光能量能被Q基团吸收淬灭,不产生荧光信号而当探针与靶DNA形成杂交链后,探针的中间环状部分碱基与靶DNA互补结合,迫使探针茎部的自身互补双链打开,R基团Q基团空间距离拉大,被激发后能发射出荧光信号采用普通的Q基团标记,为了保证荧光探针在PCR扩增过程中仍能与靶DNA形成杂交链,探针必须超过PCR上下游引物长度,通常大于18个碱基但如果探针与靶DNA互补超过18个碱基,其中一、二个碱基的改变后,其杂交双链的熔解温度(Tm)的差异较小,检测单个碱基突变或多态性(SNP)的灵敏度不高
  • 专利详情
  • 全文pdf
  • 权力要求
  • 说明书
  • 法律状态
专利名称:Mgb标记的dna分子信标探针及应用的制作方法
本技术采用DNA双链小沟结合基因(minorgroovebinder,MGB)DPI3(dihydrocyclopyrroloindole tripeptide)作为淬灭基团(Q)标记于荧光探针的3’端。MGB能在探针与靶DNA杂交链末端5-6个碱基对的双链结合,提高了杂交链的Tm值和稳定性。在维持Tm值不变的情况下,可以适当减少荧光探针中间与靶DNA互补的碱基数,通常可以缩短至13-16个碱基。这样不仅可以降低荧光探针的合成成本,而且增大了正常探针与突变探针之间Tm值的差异,提高点突变和SNP检测的灵敏度和准确率。采用DNA双链小沟结合基团(MGB)DPI3作为淬分子(Q)标记寡核苷酸荧光探针的3端作为分子信标用于基因点突变或单核苷酸多态性(SNP)的检测。MGB能与探针与靶DNA杂交链的末端双链之间结合,提高了杂交链的双链溶解温度(Tm)值和稳定性。在维持Tm值不变的前提下,可适当减少探针与靶DNA互补的碱基数目,不仅可以降低探针合成的成本,而且增大了正常探针与突变探针之间Tm值的差异,显著提高检测基因点突变和SNP的灵敏度和准确率。
查看更多专利详情

下载专利文献

下载专利