专利名称：一种仙鹤草提取物及其在制备糖尿病药物中的应用的制作方法糖尿病在全世界的发病率有逐年增高的趋势，在发达国家已被列为继心血管疾病 及肿瘤之后的第三大疾病，其中2型糖尿病是占了糖尿病患者的90%。目前糖尿病对人类 健康危害最大的是在动脉硬化及微血管病变基础上产生的多种慢性并发症，如糖尿病性心 脏病、糖尿病性脑血管病、糖尿病性肾病等，已引起全世界医学界的高度重视。2009年11月14日是第三个联合国糖尿病日。国际糖尿病联合会(IDF)发布最新 数据全球糖尿病患者人数有2. 85亿，而且超过一半患者属于20 60岁人群。我国糖尿 病患者人数有4320万。是仅次于印度(5080万)的世界第二大糖尿病重灾区。IDF预测2010年糖尿病将耗费世界经济至少3760亿美元或全世界医疗保健开支 总数的11. 6%。到2030年，这一数字将超过4900亿美元。中药与其他降糖药物相比，其优势在于，不仅能降低血糖，还能发挥复方多靶点、 多途径的优势对机体进行调整，通过辨证施治，改善患者糖耐量异常、降低血粘度，达到预 防大血管及微血管病变，降低糖尿病并发症的效果。核转录因子- κ B(nuclear factor Kappa B, NF- κ B)是 1986 年由 sen 禾口 Baltimore发现，当时被认为是B细胞内的一个增强子结合蛋白，而该增强子调控免疫球蛋 白kappa氢链的转录，故命名为NF-κ B。近年来的研究显示，炎症因子的信号传导与胰岛素受体的信号通路有交叉作 用。炎症导致胰岛素抵抗的主要分子机制是非特异性炎症所产生的炎症因子干扰胰岛素 IRS(胰岛素受体底物)/ΡΙ3_Κ(脂酰肌醇-3-激酶，调节糖、脂肪、蛋白质代谢等)信号传导 通路，其关键部位是IRS。通过诱导IRS的丝/苏氨酸磷酸化，阻碍IRS正常的酪氨酸磷酸 化，导致IRS与胰岛素受体(IR)的结合能力下降，并减弱IRS激活其下游的Ρ13-Κ的磷酸 化过程，干扰胰岛素信号经IR/IRS/PI3-K通路下传。体外实验已发现至少有八种激酶使IRS的丝氨酸与苏氨酸磷酸化，其中C-Jim氨 基末端激酶(JNK)、核因子K B抑制物激酶(IKK)等6种激酶可被TNF-a(肿瘤坏死因子-a) 激活。导致胰岛素抵抗的IKK/NF-KB途径研究较多。IKK/NF-κΒ通路是炎症的关键通路。 NF-kB是炎症启动、调节的关键核转录激活因子，一般情况下NF-K B与I κ B结合以潜在 的无活性的形式存在于细胞质中，能被LPS(脂多糖)、IL-I (白芥素-1)、TNF-a等激活， NF- κ B被激活后与I κ B分离转移到核内调节多种基因转录，参与与炎症反应及自然免疫 反应，而诱导表达的细胞因子又能上调NF- κ B活性，形成正反馈调节机制，增强炎症反应， IKK β是NF-κΒ的上游激活剂。研究发现，IKK β通过二种途经干扰胰岛素的信号传导， 一是直接使IRS的丝氨酸磷酸化，另一条是IKK β降解IkB，激活NF- κ B，启动并放大炎症。 炎症导致胰岛素抵抗，参与了代谢综合征和T2DM(2型-糖尿病)发生、发展，抑制慢性、亚临床性炎症可能成为治疗代谢综合征和T2DM药物的新靶点。Stephens等使用TNF刺激胰岛β细胞，观察到抑制NF- κ B的活性可以保护胰岛 β细胞免除TNF诱导的细胞死亡。因此，抑制NF-κ B活性可能抑制β细胞中免疫介导的 几种不同的细胞死亡途径，这种机制在自身免疫性糖尿病中可能作为保护胰岛β细胞的 有效策略。更多的研究正逐步向人们揭示糖尿病、炎症和各种炎症因子之间存在必然的联 系，糖尿病病因及机制十分复杂，而炎症是其中重要因素之一。针对炎性因子及其靶基因在 人体内调控的关键环节NF-κ B的研究开创了糖尿病防治的新领域。目前已知由iNOS催化产生的NO是细胞因子介导的体内多种细胞损害及功能异常 的潜在的介质。能抑制NF-K B活性和抑制NO释放的药物，在糖尿病治疗及并发症的防治上具有 明显的优势。近年来。从中药中筛选出能抑制NF-kB活性和抑制NO释放的物质成为国内 研究降糖药物的热点之一。
本发明鉴于上述状况下进行，其目的在于提供来源于植物，通过抑制NF- κ B活性 和抑制NO释放防治糖尿病的药物。本发明以蔷薇科(Rosaceae)植物的仙鹤草为原料。本发明发现仙鹤草提取物能抑制四氧嘧啶糖尿病小鼠和链佐霉素糖尿病小鼠高 血糖的上升，有较强的降糖活性。本发明的技术方案本发明所述的一种仙鹤草提取物用以下方法提取获得首先取干燥的蔷薇科 (Rosaceae)植物仙鹤草(Agrimonia pilosa Ledeb. ) Ikg粉碎，过60目筛，称取中药粉碎机 粉碎仙鹤草后所得的粉末IOOg于2000ml圆底烧瓶中，加IOOOml的质量浓度为60%的乙醇 为提取溶剂，加热至80°C进行热回流，回流提取3次，每次1小时，合并醇提液，浓缩，制成浸 膏；浸膏用水溶解，按极性大小先后用石油醚，乙酸乙酯，正丁醇对水溶液进行萃取，挥干石 油醚部位的溶剂得石油醚部位的浸膏，即是仙鹤草提取物。本发明所述的一种用于治疗糖尿病的药物，其中含有所述的植物仙鹤草石油醚部 位提取物，以及药学上可接受的辅助剂。本发明所述的药物制成片剂、丸剂、胶囊剂、悬浮剂或乳剂。本发明的有益效果是与目前市场上的降糖药相比所具有的优势是本发明中所述 提取物通过抑制NO释放和NF- κ B活性等发挥复方多靶点、多途径的优势，从而不仅能降低 血糖，还能对机体进行调整，通过辨证施治，改善患者糖耐量异常、降低血粘度，达到预防大 血管及微血管病变，降低糖尿病并发症的效果。作详细说明实施例1仙鹤草提取物(石油醚部位)的制备实施中，以在广州附近采的仙鹤草(由广东中研所蔡岳文教授鉴定为蔷薇科(Rosaceae)植物仙鹤草(Agrimonia pilosa Ledeb.))为例，首先取干燥的仙鹤草Ikg粉 碎，过60目筛，称取仙鹤草被中药粉碎机粉碎后过60目筛所得的粉末IOOg于2000ml圆底 烧瓶中，加IOOOml的质量浓度为60%的乙醇为提取溶剂，加热至80°C进行热回流，回流提 取3次，每次1小时，合并醇提液，浓缩，制成浸膏。浸膏用水溶解，按极性大小先后用石油 醚，乙酸乙酯，正丁醇对水溶液进行萃取，挥干石油醚部位的溶剂得石油醚部位的浸膏，即 是本发明所指的仙鹤草提取物。实施例2仙鹤草提取物(石油醚部位)抑制NF- κ B活性率检测NF-K B活性检测利用NF-K B转录活性荧光素酶报告基因检测系统进 行。pNF-κ B-Iuc质粒上有4个NF-K B结合位点融合在荧光素酶基因的编码序列上。 pNF- κ B-Iuc质粒和PcDNA3. 1质粒共转入293细胞中，通过0. 6mg/ml的G418筛选出 pNF- κ B-luc-293克隆细胞。pNF- κ B-luc-293克隆细胞经培养后以1 X 105/孔铺于96 孔板中，同时给予仙鹤草提取物(20μ g/ml)处理15min后再用TNF_a (lOng/ml)孵育6h。 裂解细胞，荧光素酶的表达水平分析通过荧光素酶检测系统进行检测。荧光检测仪器为 Berthold Detection Systems,蒸馏水替仙鹤草提取物做空白对照，罗格列酮做阳性对照。抑制率本发明公开了一种仙鹤草提取物及其在制备糖尿病药物中的应用，本发明以蔷薇科植物仙鹤草制备仙鹤草石油醚部位提取物；仙鹤草石油醚部位提取物能抑制NF-κB激活系统活性及抑制NO释放起到保护胰岛β细胞免受伤害从而达到降糖作用，添加了该提取物的药物组合物或食品组合物具有降糖作用而可用于防治糖尿病。