专利名称：肠道细菌群落构成比例调节剂的制作方法根据近期研究，已发现在人类中，肥胖者处于其中拟杆菌(Bacteroidetes)属细菌构成比例低而厚壁菌类群(Firmicutes)属细菌构成比例高的状态，随着体重下降，拟杆菌构成比例提高，而相反地，厚壁菌类群的构成比例下降。此外，已发现相对于肥胖者，消瘦者具有高的拟杆菌构成比例和低的厚壁菌类群构成比例(参见非专利文献1)。此外，当肥胖小鼠的肠道细菌群落和正常体重小鼠的肠道细菌群落分别移植至两组不具有肠道细菌的小鼠中时，已发现移植有肥胖小鼠的肠道细菌的该组小鼠的体重比移植有正常体重的小鼠的肠道细菌的该组小鼠的体重显著更大(参见非专利文献2)。也就是说，通过改变肠道细菌的构成比例，从而改变了体质，并且具有改善身体状况的效果。厚壁菌类群和拟杆菌的总量接近达到总肠道细菌群落的90%。通过口服物质难以对细菌实现这样大的影响。对于增殖拟杆菌的方法，已报道有关于摄取低聚果糖(fractooligo saccharide, F0S)的方法，并且可预期一定的效果(参见非专利文献3)。但是，为了达到摄入低聚果糖的效果，需要大量摄入，并且通过饮食或功能性食品将其摄入给身体造成负担。此外，还未发现具有增殖拟杆菌属细菌，并且还减少厚壁菌类群属细菌作用的口服物质。文献非专利文献非专利文献1 :Ley, RE.，Turnbaugh, PJ.，Klein, S.和 Gordon，JI.，Microbial ecology :human gut microbes associated with obesity. Nature, 444,1022-3(2006)2 Turnbaugh, PJ. ， Ley, RE. ， Mahowald, MA. ， Magrini, V. ， Mardis, ER.禾口 Gordon, JI., An obesity-associated gut microbiome with increased capacity for energy harvest. Nature,444,1027-31(2006)非专利文献 3 Nakanishi, Y. , Murashima, K. , Ohara, H. , Suzuki, Τ. , Hayashi, H., Sakamoto, Μ. , Fukasawa, Τ. , Kubota, H. , Hosono, Α. , Kono, Τ. , Kaminogawa, S. , Benno, Y., Increase in terminal restriction fragments of Bacteroidetes-derived 16S rRNA genes after administration of short-chain fructooligosaccharides. Appl. Environ. Microbiol.，72，6271-6 (2006)
本发明所解决的问题本发明所解决的问题是提供能够调节肠道细菌群落构成比例的食品或药物，所述食品或药物是安全的，并且几乎没有副作用。解决所述问题的手段本发明人首次发现一类具有增殖拟杆菌属细菌并减少厚壁菌类群属细菌作用的口服物质。本发明具体包含以下部分。(1)肠道细菌群落构成比例调节剂，其包含至少一种抑制糖吸收的物质。(2)根据以上(1)所述的肠道细菌群落构成比例调节剂，其中所述抑制糖吸收的物质是抑制α-葡萄糖苷酶活性的物质。(3)根据以上(1)或(2)所述的肠道细菌群落构成比例调节剂，其中所述抑制糖吸收的物质包含选自五层龙植物(Salacia plants)、桑叶、匙羹藤(Gymnema sylvestre)、以及包含在它们的提取物中的成分中的至少一种或多种。(4)根据以上(1)-(3)中任一项所述的肠道细菌群落构成比例调节剂，其中所述抑制糖吸收的物质显示出10 μ g/ml-10000 μ g/ml的蔗糖酶50%抑制浓度。(5)根据以上(1)-(4)中任一项所述的肠道细菌群落构成比例调节剂，其中所述抑制糖吸收的物质是选自网状五层龙(Salacia reticulate)、长圆果五层龙(Salacia oblonga)和中国五层龙(Salacia chinensis)的五层龙植物及包含在它们的提取物中的成分中的至少一种。(6)根据以上(1)-(5)中任一项所述的肠道细菌群落构成比例调节剂，其中所述肠道细菌群落构成比例调节剂提高肠道细菌群落中拟杆菌(Bacteroidetes)比例，并降低厚壁菌类群(Firmicutes)比例。(7)食品或药品，其包含根据以上(1)-(6)中任一项所述的肠道细菌群落构成比例调节剂。本发明的有益效果根据本发明，提供了即使当长期服用时是安全且几乎没有副作用的肠道细菌群落构成比例调节剂、以及食品或药物。通过将其服用，调节了肠道细菌群落平衡，并由此可以瘦身、改善体质、减轻过敏症状、改善免疫指数等。本发明的实施方式本发明的肠道细菌群落构成比例调节剂包含至少一种抑制糖吸收的物质。本发明的肠道细菌群落构成比例调节剂具有改变肠道中生存的细菌比例的作用。 特别地，它是具有增加拟杆菌属细菌，并减少厚壁菌类群属细菌作用的试剂。<抑制糖吸收的物质>所述抑制糖吸收的物质优选是抑制α -葡萄糖苷酶活性的物质。所述抑制α -葡萄糖苷酶活性的物质是通过抑制α _葡萄糖苷酶的活性而抑制糖代谢的物质，并且蔗糖酶50%抑制浓度(IC5tl值)优选为0.01yg/ml-10000yg/ml， 更优选 0. 1μ g/ml-800y g/ml，进一步优选 0. 5μ g/ml-600y g/ml，并且特别优选 10 μ g/ ml-450yg/mL·当抑制活性落入所述范围中时，可抑制消化道的葡萄糖吸收的作用，并可抑制腹胀感和气体产生。α -葡萄糖苷酶的蔗糖酶50 %抑制浓度更优选为10 μ g/ ml-5000 μ g/ml，并且进一步优选 10 μ g/ml-2000 μ g/ml。通过以下方法测定蔗糖酶50%抑制浓度(IC5tl值)。[试验方法1]蔗糖酶IC5tl值的测定样品溶液的制备将2mg样品(抑制α-葡萄糖苷酶活性的物质)称量入试管中， 并向其中加入2mL水，然后使样品完全悬浮以形成浓度为lmg/mL的样品溶液。用水将其稀释以分别形成0、50、100、250和500 μ g/mL的溶液。底物溶液的制备将蔗糖溶于0. 2M马来酸盐缓冲液(pH 6. 0)中以使蔗糖浓度为 IOOmM,并且将所述溶液用作底物溶液。粗酶溶液的制备在将Ig大鼠肠道丙酮粉末(intestinal acetone powder rat) (SIGMA制备)悬浮在IOmL生理盐水之后，将混悬液进行离心(3000rpm，4°C，5min)。将所得上清液分离出并用作粗酶溶液。向500 μ L具有各浓度的上述样品溶液加入400 μ L所述底物溶液中，并在37°C下将溶液总体在水浴中预热5分钟。向其中加入100 μ L所述粗酶溶液，并在37°C下进行反应60分钟。在反应完成后，在95°C下通过加热2分钟使所述酶失活以终止反应。使用市售试剂盒/变旋酶-葡萄糖氧化酶方法(Glucose CII Test Wako，Wako Pure Chemical Industries, Ltd.)定量测定所生成的葡萄糖浓度。空白样的制备向250μ 1具有各浓度的上述样品溶液加入200μ L所述底物溶液和50 μ L所述粗酶溶液，并通过在95°C下加热2分钟立即将酶进行加热-失活而得到空白数据。基于所得值形成校正曲线，并测定酶活性被抑制50%时的浓度(IC5tl值)。在设置包含于肠道细菌群落构成比例调节剂中的抑制α -葡萄糖苷酶活性的物质的每日摄入量或标准摄入量的情况中，当使用IC5tl值为50μ g/ml的抑制α -葡萄糖苷酶活性的物质时，肠道细菌群落构成比例调节剂的每日摄入量中的抑制α-葡萄糖苷酶活性的物质的量优选为10-600mg，更优选为40-450mg，并且特别优选为50_350mg。根据以上的每日优选量可合理计算肠道细菌群落构成比例调节剂中包含的抑制 α -葡萄糖苷酶活性的物质量。例如，在制备每日摄入量为3片的片剂的情况中，优选每片包含每日摄入量的三分之一。也就是说，所述片剂包含的抑制α-葡萄糖苷酶活性的物质的量优选为3-200mg，更优选13-150mg，特别优选17-117mg。此外，由下式1测定的值优选为0. 5或更大，更优选0. 8或更大，并且特别优选1. 7或更大。作为由式2所确定的值，肠道细菌群落构成比例调节剂的总IC5tl值优选为 0. 1-7. 5，更优选0. 15-4. 50，并且特别优选0. 3-3. 75。[式1]肠道细菌群落构成比例调节剂的每日摄入量中的抑制α-葡萄糖苷酶活性的物质(mg)/IC5tl 值(μ g/ml)[式2]肠道细菌群落构成比例调节剂(mg)/IC5tl值(μ g/ml)所述抑制糖吸收的物质优选是五层龙植物、桑叶、匙羹藤、杜仲叶、番石榴、罗布麻纤维、发酵黑豆提取物、茶叶、厚朴、茵陈蒿(Artemisiae capillaris herta)、陈皮 (Ctrus unshiu peel)、吴莱IC (evodia fruit)、薄荷(Japanese mint)、t^ 梗(Chinesebellflower)、枸杞(Chinese wolfberry fruit)、五味子等及它们的提取物，并且优选是五层龙植物、桑叶、匙羹藤及它们的提取物。更优选地，五层龙植物提取物、桑叶提取物、或在匙羹藤中包含的组分。 <五层龙植物的粉碎物或提取物>所述抑制糖吸收的物质优选是五层龙植物。五层龙植物通常包括其粉碎物或提取物。五层龙植物是主要在斯里兰卡、印度和东南亚区域野生的卫矛科植物。更具体地，使用选自网状五层龙(Salacia reticulate)、长圆果五层龙(Salacia oblonga)、五层龙(Salacia prinoides)、中国五层龙(Salacia chinensis)、阔叶五层龙(Salacia latifolia)、河口五层龙(Salacia burunoniana)、粉叶五层龙(Salacia grandiflora)禾口多籽五层龙(Salacia macrosperma)中的一种或多种植物，并且优选选自网状五层龙、长圆果五层龙和中国五层龙中的至少一种植物。五层龙植物的粉碎物或提取物是指可食用部分如根、茎、叶、花和果的粉碎物、干燥物、提取物、其干燥粉末(提取物粉末)等。混合并使用一种或多种所述部分也是合适的。 更优选地，使用从根和茎中提取的提取物粉末。提取物粉末是从上述可食用部分等通过溶剂提取得到的干燥物。提取溶剂可选自水和醇如甲醇和乙醇、或水和醇或酮(如丙酮)的混合溶剂。优选使用水、醇或含水醇。更优选地，使用热水或乙醇或含水乙醇作为提取溶剂。对于以上含水醇的醇浓度，可使用30-90 质量％，优选40-70质量％浓度的含水醇。对于所述干燥方法，可提及喷雾干燥、冷冻干燥等，但不限于此。<其它成分>本发明的肠道细菌群落构成比例调节剂还可包含其它成分，并可包含如乳酸菌、 无芽孢酵母、类黄酮、多酚等、以及具有免疫活性作用的口服物质。在肠道细菌群落构成比例调节剂包含这些成分的情况中，当肠道细菌群落构成比例调节剂是固体时，基于肠道细菌群落构成比例调节剂整体，其含量优选为0. 1质量％ -30 质量％，并且更优选为5质量％ -20质量％。当肠道细菌群落构成比例调节剂是液体时，基于肠道细菌群落构成比例调节剂整体，其含量优选为0. 001质量％ -10质量％，并且更优选为0.01质量％-5质量％。乳酸菌如双歧杆菌优选是可向包括人类在内的哺乳动物口服给药，并在生命体消化道中表现出有效作用的那些乳酸菌。更具体地，优选的是那些对宿主无害、对胃酸和胆汁酸相对耐受、固定在生命体肠道内、产生乳酸并具有调节肠道细菌群落构成比例作用的乳酸菌。这样的有效乳酸菌实例包括嗜酸乳杆菌(LactcAacillus acidophilus)、长双歧杆菌 (Bifidobacteria(Bifidobacterium Iongum 等))、|^fj|i求菌(Streptococcus faecalis) > 罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)、干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)、植物 ？L If lif (Lactobacillus plantarum) > ^ If lif (Lactobacillus fermentum) > ^ 糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)、能动乳杆菌(Lactobacillus agilis)、戈氏乳杆菌(Lactobacillus gasseri)、马铃暮乳杆菌(Bacillus mesentericus)、酷酸梭菌 (Clostridium butyricum)或它们的亚种。优选嗜酸乳杆菌、长双歧杆菌(BifidobacteriumIongum等)和粪链球菌。可单独使用这些乳酸菌或可合理地组合使用它们中的两种或更多种。对于这些乳酸菌，对得到它们的来源没有特别限制，只要它们是活菌，并且是可广泛使用的市售乳酸菌。在设置本发明中所使用的肠道细菌群落构成比例调节剂的每日摄入量或标准摄入量的情况中，肠道细菌群落构成比例调节剂的每日量中乳酸菌的活菌数优选为 10，000，000-100，000，000，000，更优选为 50，000，000-50，000，000，000，并且特别优选为 100，000，000-10，000，000，000。所述无芽孢酵母是指包含矿物的酵母。对于矿物，可提及被称为微量元素的16种金属元素钠(Na)、钾(K)、氯(Cl)、钙(Ca)、镁(Mg)、磷(P)和硫(S)、铁0 )、锌( )、铜 (Cu)、锰(Mn)、钴(Co)、铬(Cr)、碘(I)、钼(Mo)和硒(Se)。对于本发明所使用的无芽孢酵母，优选包含铬的铬酵母。对酵母的种类没有特别限制，但优选酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)或其相关种类，首选面包酵母和啤酒酵母。铬酵母的铬含量优选为0. 01-5质量份，更优选0. 05-1质量份，并且特别优选 0. 1-0. 3质量份，其基于100质量份的铬酵母。在肠道细菌群落构成比例调节剂中的铬酵母含量优选为0.5-50质量份，更优选 1-10质量份，并且特别优选3-5质量份，其基于肠道细菌群落构成比例调节剂的质量份。在设置每日摄入量或标准摄入量时，在肠道细菌群落构成比例调节剂的每日量中的铬酵母量优选为5-500mg，更优选lO-lOOmg，并且特别优选30_50mg。在肠道细菌群落构成比例调节剂的每日量中的铬量优选为20-200 μ g，更优选40-150 μ g，并且特别优选 60-100 μ g0类黄酮是广泛存在于植物的所有器官中的有色物质成分的统称，其主要包含在蔬果中，并且在绿叶和白色蔬菜和柑橘皮中特别地以糖苷形式存在。在本发明中，类黄酮是广泛包含在植物中的有色物质成分的统称，并且特别是指在蔬果中富含的黄烷衍生物。对于类黄酮，优选黄酮醇、异黄酮和儿茶素。黄酮醇也被称为多酚。类黄酮是摄入体内的物质，但其通常难以吸收。但是，由于即使少量的类黄酮也是有效的，并且其是强抗氧剂，所以已知它们有抑制致癌物质活性，并具有促进血液流动的作用和抗血栓形成的作用。在本发明中，类黄酮可得自各来源物如茶、葡萄和洋葱。在此，所述来源物是指从生命体的至少一部分所提取的产物。对于提取，例如采用制备以上五层龙植物提取物的方法。提取物的形式可以和以上相同，并且例如其可以是任意形式，如提取后的过滤物本身， 或经浓缩或稀释的形式，或是其干燥粉末的形式或其混合物。从常青的山茶科树的茶树中制备包含儿茶素的茶叶提取物。对于茶树，使用在印度、斯里兰卡和东南亚种植的Camellia sinensis var. assamica和在中国和日本种植的 Camellia sinensis.对于提取，优选使用水、醇或含水醇。更优选地，可将热水或乙醇或含水乙醇用作提取溶剂。对于以上含水醇的醇浓度，可使用浓度为30质量％ -90质量％，优选40质量％ -70质量％的含水醇。对于所述干燥方法，可提及喷雾干燥、冷冻干燥等，但并不限于此。
茶提取物包含抗氧化剂物质如多酚类和儿茶素类。优选包含儿茶素、表儿茶素、没食子儿茶素、表没食子儿茶素、儿茶素没食子酸酯、表儿茶素没食子酸酯、没食子儿茶素没食子酸酯或表儿茶素没食子酸酯，并且特别优选表没食子儿茶素。本发明的肠道细菌群落构成比例调节剂所包含的茶叶提取物的量优选为0. 1-40 质量％，进一步优选0. 5-35质量％，并且特别优选1. 0-30质量％。此外，类黄酮之一的黄酮醇去除活性氧，并显示出抗氧化作用，如抑制动脉硬化和改善血液流动。在黄酮醇中，多酚之一的白藜芦醇作为抗氧化物质而引人注目。白藜芦醇由芪骨架构成，并且富含在葡萄果皮中，所以它也包含在由葡萄制成的红酒中。在本发明中，优选包含葡萄提取物或酒浓缩物，其包含黄酮醇作为成分。本发明的肠道细菌群落构成比例调节剂优选包含的葡萄提取物的量为0. 1-30质量％，并且进一步优选包含的量为0. 1-10质量％。白藜芦醇具有燃烧脂肪的作用，防止动脉硬化的血管疾病，显示出抗癌作用，还防止DNA因细胞分裂而缩短，并具有与热量限制的情况中相同的延长细胞寿命的作用，所以已认为该化合物作为防止生活习惯相关的疾病的材料具有极佳效果。本发明的肠道细菌群落构成比例调节剂中的白藜芦醇的含量优选为0. 0001-5. 00 质量％，并且进一步优选为0. 001-2. 00质量％。此外，在黄酮醇中，多酚之一的槲皮素作为抗氧化物质而引人注目。槲皮素具有黄烷机构，并且富含在洋葱皮中。对于槲皮素，已报到了其生理作用，如作为吸收维生素C的载体、抗氧化作用、免疫作用等。此外，已发现槲皮素对于抑制脂肪吸收是有效的，所以已认为该化合物作为防止生活习惯相关的疾病的材料具有极佳效果。肠道细菌群落构成比例调节剂中的槲皮素含量优选为0.001-15质量％，更优选为0. 05-10质量％，并且进一步优选0. 1-5.0质量％。本发明的肠道细菌群落构成比例调节剂优选特别包含的儿茶素量为1-50质量％。对于儿茶素，特别优选源自绿茶的儿茶素。此外，本发明的肠道细菌群落构成比例调节剂优选包含具有抑制酯酶活性作用的多酚，其量为2-80质量％。对于具有抑制酯酶活性作用的多酚，特别优选来源于乌龙茶，来源于葡萄、来源于苹果、来源于荔枝、来源于松树皮、来源于柑果等的多酚。具有免疫活性作用的口服物质是指被认为增强免疫功能的物质，如玫瑰花提取物和来源于莲花根的物质。所述来源物是指从生命体中的至少一部分提取的产物。对于提取， 例如采用制备以上的五层龙植物提取物的方法。提取物的形式可以和以上相同，并且例如其可以是任意形式，如提取后的过滤物本身，或经浓缩或稀释的形式，或是其干燥粉末的形式或其混合物。<使用/配制方法>本发明的肠道细菌群落构成比例调节剂针对的是包括人类在内的哺乳动物，并且向哺乳动物口服给药。在此，“肠道的”是指“在消化道中的”，其中，拟杆菌、厚壁菌类群、双歧杆菌目等细菌总是存在，并进行消化/吸收，如人类小肠和大肠。本发明的肠道细菌群落构成比例调节剂可以是食品(包括饮料)、食品材料、准药物、药物、药物材料或用于准药物的材料。对于其它成分，可列举各种药学或食品卫生可接受的载体作为口服给药剂，例如赋型剂、润滑剂、稳定剂、分散剂、粘结剂、稀释剂、增味齐U、 甜味剂、调味剂和着色剂。 本发明的肠道细菌群落构成比例调节剂的形式不受特别限制，只要它发挥本发明的优点，并且其实例包括片剂、丸剂、颗粒剂、细颗粒剂、咀嚼药物、胶囊剂(充入硬胶囊或软胶囊中的那些)、液体、可咀嚼药物、饮料等。其形式可以是其它食品形式。使用通常在本领域中已知的常规方法可制备这些给药形式。在片剂、丸剂和颗粒剂的情况中，它们可按需制成常规包覆的剂量形式，如糖衣包覆的、明胶包覆的、肠衣包覆的、薄膜包覆的等。此外，片剂可以是多层片剂如双层片剂。在本发明的肠道细菌群落构成比例调节剂中，除了以上之外，可适当地加入能够口服摄入的成分如维生素、维生素样物质、蛋白质、氨基酸、油和脂肪、有机酸、碳水化合物、 植物来源材料、动物来源材料、微生物、食品添加剂和医用添加剂。通过摄入本发明的肠道细菌群落构成比例调节剂，预期通过增多在肠道中的拟杆菌属细菌并减少厚壁菌类群属细菌而减轻体重。此外，通过增多肠道拟杆菌属细菌，通过在集合淋巴小结中捕集拟杆菌属肠道细菌，使得预期减轻过敏症状如花粉过敏和特异性，预防普通感冒，并预防肿瘤(Tsuda, M.，Hosono, A.，Yanagibashi, T. , Hachimura, S. , Hirayama, K. , Itoh, K. , Takahashi, K.,禾口 Kaminogawa, S. , Prior stimulation of antigen-presenting cells with Lactobacillus regulates excessive antigen-specific cytokine responses in vitro when compared with Bacteroides. Cytotechnology，55，89-101(2007))。本发明的肠道细菌群落构成比例调节剂即使当长期服用下也是安全的，并且几乎没有副作用。
实施例以下将参照实施例描述本发明，但本发明并不限于以下的实施例。在将网状五层龙和长圆果五层龙的根和茎部分粉碎之后，将它们等重量混合，并将通过在98°C下的热水提取步骤得到的液体喷雾干燥，得到五层龙提取粉末1。五层龙提取粉末1的蔗糖酶IC50值为41 (μ g/ml)。此外，对于匙羹藤和桑叶提取物，可使用购自K. K. Cross的那些。此外，对于对比例，使用葡萄糖、猪油和乌龙茶聚合多酚(其通过将Suntory Ltd. 生产的黑乌龙茶冷冻干燥，并提取乌龙茶聚合多酚而得到)。此外，对于匙羹藤、桑叶提取物、葡萄糖、猪油和乌龙茶聚合多酚，在所有情况中它们的蔗糖酶50%抑制浓度(IC5tl值)为 800 μ g/mL或更大。将这些成分各自溶解在水中用于注射，并以10mg/ml的水溶液进行给药。(实验例1)将8周龄的雄性SD大鼠分为7个大鼠组。将以下的肠道细菌群落构成比例调节剂各自溶于水中用于注射，并使用胃饲管(stomach sonde)以相当于20mg/kg/天的量经过 1周摄取。通过T-RFLP方法(Nagashima法)分别在摄入前即刻和摄入后即刻测定拟杆菌属和厚壁菌类群属细菌相对于肠道细菌群落的比例。但是，在实施例1中使用半量(IOmg/表1在大鼠肠道菌群中拟杆菌和厚壁菌类群的比例变化


本发明提供了能够调节肠道细菌群落构成比例的食品或药物，其安全且几乎无副作用。本发明还提供了包含至少一种抑制糖吸收的物质的肠道细菌群落构成比例调节剂、包含所述肠道细菌群落构成比例调节剂的食品或药物。