专利名称：水红花制剂和制备方法及其应用的制作方法心脑血管疾病，尤其是冠心病心绞痛、脑中风(脑栓塞)是人类疾病史中发病率高、死亡率高的疾病之一，被称为“第一杀手”。随着社会经济的发展，在世界范围内心脑血管疾病的发病率正呈上升趋势，成为危害人类健康的常见病、多发病，严重地威胁着人类的生命健康；中医中药治疗心脑血管疾病有较好的疗效，尤其在改善患者症状方面有较为明显的优势，且毒副作用较小，故中医治疗心脑血管疾病已成为临床上普遍采用的常规治疗用药，如灯盏花注射液、冠心丹参注射液、复方丹参滴丸、速效救心丸等，但具有作用迅速、安全有效、质量可控的中药尚属凤毛麟角，且在剂型、安全性和疗效上仍有许多不尽如人意之处，尤其是注射剂，由于制备工艺技术落后，常常因制剂中鞣质、大分子化合物等物质的存在，使得临床应用产生极强的刺激性，甚或引起变态反应，导致过敏性休克，使临床应用受限，远不能满足临床需求，研制有效的中药制剂一直为医药学界所关注。试验研究结果表明，水红花中含有大量鞣质，其主要有效成分为含酚羟基的黄酮类和酚酸类物质，这些带酚羟基的化合物与鞣质的化学结构相似，均含有大量的酚羟基，理化性质接近，用常规的方法除去鞣质，保留有效成分较困难，本发明采用聚酰胺柱能有效分离鞣质。本草纲目中有荭草花作为药用的记载(《本草纲目》、编者、出版社、出版日期、页码1095)，主治消积，散血，止痛。用于治疗胃脘血气作痛，心气疞痛，腹中痞块。以荭草花煎服或酒口服，按中医理论和中医亘古习惯及谓称，主要用于胃肠道疾病的治疗。《医学正传·胃脘痛》说“古方九种心痛，……样其所由，皆在胃脘而实不在于心也。”王肯堂《证治准绳·杂病第四册》亦认为历代方论将心痛、胃痛混同一门，原因在于“胃脘痛处在心下，故有当心而痛之名”。朱丹溪《丹溪心法·卷四》明确指出，前人所谓“心痛”实指胃脘痛。《中药大辞典》(江苏新医学院编.中药大辞典[M].上海上海科学技术出版社19771617)、《中华本草》(国家中医药管理局《中华本草》编委会编，《中华本草》(第二册)[M]，上海上海科学技术出版社，1999683)均有相同记载。《中国药典》2000年版收载有水红花子(蓼科植物红蓼Polygonum orientale L.的干燥成熟果实)，用于胃肠道疾病的治疗。《贵州省中药材质量标准》(1988年版、黔D/WS-087-88)和《贵州省中药材、民族药材质量标准》(2003年版、DB52/YC261-2003)收载有荭草用于风湿性关节炎、冠心病、心胃气痛的记载，但其作用部位为荭草的干燥全草或干燥花穗及带叶茎枝，而本发明中水红花为荭草的干燥花穗，按中医中药的用药方法，药用部位明显不同，完全是两种不同的用药部位。关于荭草和水红花的现代研究，偶见荭草化学成分和药理作用的报道，水红花的临床应用、药理研究和化学成分研究均未见报道。尽管《本草纲目》中有荭草花作为药用的记载，但其用法传统，以生药直接口服入药，存在病人携带、服用不便，质量不易控制，不能形成商品流通等缺点。本发明人已申请的“治疗冠心病心绞痛的中药制剂(02128066.5)”专利为灯盏细辛和荭草的复方制剂，方中荭草的药用部位为干燥花穗及带叶茎枝，两者除处方不同外，荭草的用药部位也不同，并且通过对两处方的疗效进行药效学试验比较，试验结果表明，水红花制剂具有起效快、作用时间长、作用强度大等特点。为了进一步比较荭草药材不同药用部位的药理活性，本发明人对荭草药材的全草、根及茎、带叶茎枝、花穗的药理作用进行了药效学试验，试验结果表明花穗改善心肌缺血和扩张冠状动脉的作用最明显，对急性心肌梗死有明显的保护作用。
本发明的目的在于提供一种水红花制剂和制备方法及其应用，本发明针对现有技术的不足，所提供的工艺技术解决了水红花中有效成分的提取与鞣质的分离问题，提取物化学成分基本清楚，有效成分含量高，所得制剂达到了安全、有效、质量可控的目的；本发明制剂能明显增加心肌和脑缺血、缺氧，增加冠脉流量和脑血流量，降低心肌耗氧量，改善脑能量代谢，有明显的溶栓和活血化瘀作用，用于冠心病、心绞痛、心肌梗塞、脑中风等心脑血管疾病的治疗。本发明是这样构成的它是以荭草药材的干燥花穗-水红花为原料，加入适当辅料制备成注射液或大输液、冻干粉针、粉针剂、滴丸剂、胶囊剂、片剂、分散片、软胶囊剂、颗粒剂及其它药剂学上可以接受的剂型。所述的制剂为注射液或大输液、冻干粉针、粉针剂、滴丸剂。水红花制剂的制备方法为将水红花按常规水煎煮工艺提取，滤过，滤液减压浓缩成浸膏，调PH至2～5，用正丁醇或醋酸乙酯提取，回收溶剂，残留物进行干燥，得水红花提取物，再将提取物制备成所述制剂。
具体的说，将水红花加水煎煮2～4次，每次0.5～2小时，加水量为原料重量的6～20倍，滤过，滤液减压浓缩至30～80℃相对密度为1.05～1.25的浸膏，用2～4倍量的乙醇沉淀处理，减压回收乙醇，调PH至2～5，用正丁醇或醋酸乙酯提取，回收溶剂，残渣用25～50％乙醇溶解，上D101大孔树脂柱分离，用40～95％乙醇洗脱，洗脱液回收乙醇，残留物真空干燥或喷雾干燥，得水红花提取物，再将提取物制备成所述制剂。
或者说，将水红花加水煎煮2～4次，每次0.5～2小时，加水量为原料重量的6～20倍，滤过，滤液减压浓缩至30～80℃相对密度为1.05～1. 25的浸膏，用2～4倍量的乙醇沉淀处理，减压回收乙醇，调PH至2～5，用正丁醇或醋酸乙酯提取，回收溶剂，残渣用25～50％乙醇溶解，上D101大孔树脂柱，用40～95％乙醇洗脱，洗脱液回收乙醇，残留物上聚酰胺柱，用40～95％乙醇洗脱，洗脱液和流穿液回收乙醇，真空干燥或喷雾干燥，得水红花提取物，再将提取物制备成所述制剂。
或者说，将水红花加水煎煮2～4次，每次0.5～2小时，加水量为原料重量的6～20倍，滤过，滤液减压浓缩至30～80℃相对密度为1.05～1.25的浸膏，用2～4倍量的乙醇沉淀处理，减压回收乙醇，调PH至2～5，用正丁醇或醋酸乙酯提取，回收溶剂，残渣用25～50％乙醇溶解，上聚酰胺柱，用40～95％乙醇洗脱，洗脱液和流穿液回收乙醇，真空干燥或喷雾干燥，得水红花提取物，再将提取物制备成所述制剂。
水红花制剂也可以这样制备将水红花用30～95％的乙醇采用常规回流、浸渍的方法提取，减压回收乙醇，调PH至2～5，用正丁醇或醋酸乙酯提取，回收溶剂，残留物进行干燥，得水红花提取物，再将提取物制备成所述制剂。具体的说，将水红花用30～95％的乙醇回流提取2～4次，每次0.5～2小时，加醇量为原料重量的6～20倍，滤过，合并滤液，减压回收乙醇，调PH至2～5，用正丁醇或醋酸乙酯提取，回收溶剂，残渣用25～50％乙醇溶解，大孔树脂或聚酰胺柱分离，用40～95％乙醇洗脱，洗脱液回收乙醇，残留物采用真空干燥或喷雾干燥，得水红花提取物，再将提取物制备成所述制剂。
所述制剂中的注射液或大输液这样制备取水红花提取物，加入注射用水和0.9％氯化钠，搅匀，冷藏，滤过，滤液加0.1％活性炭，煮沸30分钟，放冷，过滤至澄明，用10％NaOH调pH至6～9，经0.25～0.45μm的微孔滤膜过滤，灌装，100～115℃灭菌30分钟，即得。
所述制剂中的冻干粉针剂这样制备取水红花提取物和甘露醇，加入注射用水，搅匀，冷藏，滤过，滤液加0.1％活性炭，煮沸30分钟，放冷，过滤至澄明，用10％NaOH调pH至6～9，经0.25～0.45μm的微孔滤膜过滤，灌装，冷冻干燥，冻干条件为最低共熔点-16℃、-45℃条件下真空度13.332Pa、平衡冻结温度0℃、平衡时间1.5小时、升温干燥时间为8～15小时、干燥温度35℃，即得。
所述制剂中的粉针剂这样制备取水红花提取物和甘露醇，加入注射用水，搅匀，冷藏，滤过，滤液加0.1％活性炭，煮沸30分钟，放冷，过滤至澄明，用10％NaOH调pH至7.5～8.0，经0.25～0.45μm的微孔滤膜过滤，滤液喷雾干燥，分装，即得。
所述制剂中的滴丸剂这样制备将水红花提取物加入熔融的40g聚乙二醇中，混匀，在保温条件下于植物油中滴制成滴丸，即得。
所获得的水红花制剂在制备治疗心脑血管疾病药物上的应用。
本发明中，水红花提取物是指从水红花中分离获得的所有黄酮类和酚酸类化合物的组合物，其中有效成分总黄酮的含量占15～80％，酚酸的含量占1～15％。
与现有技术相比，本发明所提供的制剂在治疗冠心病、心绞痛、心肌梗塞、脑中风等心脑血管疾病方面疗效显著；具有起效快、作用时间长、作用强度大等特点，克服了现有技术存在的问题；所提供的制备工艺解决了水红花中有效成分的提取与鞣质的分离问题，提取物有效成分含量高，所得制剂达到了安全、有效、质量稳定可控的目的。
为了验证本发明制剂的药用效果，申请人进行了一系列实验研究一、药效学试验1.对麻醉犬冠脉结扎所致急性心肌梗塞的影响受试药物水红花注射液(SH)，本发明人研制；复方红草冻干粉针(WHG)，贵州益佰制药股份有限公司生产，批号20040615；复方丹参注射液(FD)，上海第一生化药业公司上海第一制药厂，批号010511。
试验方法取杂种犬35只，体重为7-10Kg，雌雄兼用，随机分为7组，即(1)假手术组；(2)模型组均给予等容积生理盐水；(3)阳性药物FD组2.0ml/kg；(4)SH低剂量组1g生药/kg；(5)SH中剂量组2g生药/kg；(6)SH高剂量组4g生药/kg；(7)WHG组4.8g生药/kg。每组5只动物，给药容积为2ml/kg。
取试验用犬，由前肢皮下头静脉用3％戊巴比妥钠(30mg生药/kg)麻醉后，背位固定于手术台上，剪去颈部、胸部和左后肢内侧的毛。将针状电极插入犬四肢皮下，记录心电图(ECG)。分离气管并插入气管插管。分离左侧股动脉、股静脉，分离股静脉插入静脉插管，缓慢恒速输入生理盐水(约1ml/min)；分离股动脉插入动脉插管(管内充满500u/ml的肝素生理盐水)并接压力换能器(TP-400T)，并经放大(AP-641G)测量动脉收缩压(SAP)、动脉舒张压(DAP)、平均动脉压(MAP)，定标灵敏度为13.33kPa(100mmHg)/cm。联接记录仪的连线板直接由动脉压触发心率记数仪(AT-601G)记录心率(HR)。于左侧第四、五肋间开胸，暴露心脏，并接人工呼吸机。打开心包膜，缝于胸壁，做成荷包摇篮。暴露右心耳，静注肝素5-10mg生药/kg使肝素化，用心耳钳夹住右心耳，作一荷包缝口，将缝线穿于一小段橡皮管内，用小钢丝将线勾入橡皮管，于荷包口中心剪一小口，迅速插入冠状窦插管(内径4-5mm，管口为斜角，近管口处为圆形膨大，斜角面避免管口与窦壁紧贴，膨大部为使冠状窦血不致外溢)，将小橡皮管内荷包缝线拉紧，靠小橡皮管顶住插管，以避免出血，迅速将插管准确插入冠状窦，结扎右心耳处荷包缝线，固定插管。该插管的远端连接一三通管以备取血。用0号丝线结扎左冠状动脉前降支中下1/3处，假手术组只穿线不结扎。选择梗塞区附近位置12个标测点缝置心外膜电图电极，并在远离梗塞区选一对照点，用手持绝缘金属点状电极按标测点顺序进行标测，经传感器(JB-642G)、放大器(AB-621G)，用八道生理记录仪记录心外膜电图(EECG)(定标1mm＝1mv)。结扎15min后经股静脉恒流泵恒速给药(1ml/min)，直接记录动脉收缩压(SAP)、舒张压(DAP)、平均动脉压(MAP)、心率(HR)，并于八道生理记录仪描记EECG及动脉压(BP)曲线。记录结扎前、结扎15min和给药后10、15、30、45、60、90、120min的EECG、SAP、DAP、MAP、HR。统计各标测点EECG的ST段偏移∑-ST，以及ST段抬高≥2mv以上的N-ST。各组分别于给药前和给药60min后，左心室取血测动脉血氧分压，冠状窦处取血测冠状窦血氧分压，两者氧分压差(ΔPo2＝动脉Po2-静脉Po2)反映心肌耗氧；各组分别于结扎前、结扎15min、给药60min后股静脉取血，用试剂盒测定血清CK、LDH值。实验结束后，立即取出心脏，用生理盐水洗去血液后，称取全心重和心室重量，并把心室横切成5片，置于37℃ 1％TTC溶液中染色15min，剪去各心肌片被染色的非梗塞区，把未染色的梗塞区心肌称重，除以全心重或心室重分别得到梗塞范围占全心重或占心室重的百分率。结果见表1、表2。
表1 SH对麻醉犬冠脉结扎所致心肌梗塞∑-ST(mv)的影响(X±S)(n＝5)


注与伪手术组比较##p＜0.01；与模型组比较*p＜0.05，**p＜0.01。
结果表明，SH注射液可降低麻醉犬冠脉结扎所致心肌梗塞∑朣T，部分时间点与模型组比较差异显著(P＜0.05，P＜0.01)，表明本制剂能明显减轻心肌缺血程度，且随剂量增大呈良好的剂量依赖性。中、高剂量组SH注射液与现有制剂复方丹参注射液、复方红草冻干粉针比较具有起效快、作用时间长、作用强度大等特点。
表2 SH对麻醉犬冠脉结扎所致心肌梗塞梗塞范围的影响(X±S)(n＝5)

注与假手术组比较##p＜0.01；与模型组比较*p＜0.05，**p＜0.01。
试验结果表明SH注射液可减少麻醉犬冠脉结扎所致心肌梗塞范围，与模型组比较差异显著(P＜0.05，P＜0.01)，表明本制剂对麻醉犬冠状动脉前降支结扎所致的心肌缺血具有明显的改善作用，能明显减轻心肌缺血程度，且随剂量增加呈良好的剂量依赖性。
2.SH注射液小鼠急性脑缺氧的影响取昆明种小鼠100只，体重18～22g，随机分成10组，每组10只，分别静脉SH1.0g生药/kg、2.0g生药/kg、4.0g生药/kg，FD2.0ml/kg，WHG4.8生药/kg；灌胃给予SH4.0g生药/kg，8.0g生药/kg，FD4.0ml/kg，WHG9.6生药/kg，对照组给等容量的生理盐水。连续给药3d后，末次给药后30min将小鼠逐只断头，立即按秒表记录小鼠断头后至张口喘气停止的时间及张口呼吸次数作为耐缺氧指标。结果见表3。
表3对小鼠急性脑缺氧的影响(x±s，n＝10)

与生理盐水组比较，*P＜0.05，**P＜0.01。
结果表明，SH注射液注射给药和灌胃给药后均能明显延长小鼠断头张口次数及喘息时间(P＜0.05、P＜0.01)。说明本制剂能通过血脑屏障，提高小鼠脑耐急性缺氧的能力，改善脑能量代谢。静脉注射给药具有剂量小、作用强度大的特点；中、高剂量组SH注射液静脉注射给药与现有制剂复方丹参注射液、复方红草冻干粉针比较，具有较强的生理活性(P＜0.01)。
3.对大鼠大脑中动脉栓线法局灶性脑缺血再灌注损伤模型的治疗作用取雄性SD大鼠约280只，按随机分组原则分成11组，包括五个注射给药组，SH1.0g生药/kg，2.0g生药/kg，4.0g生药/kg，FD2.0生药/kg，WHG4.8生药/kg；四个灌胃组，SH4.0g生药/kg，8.0g生药/kg，FD4.0生药/kg，WHG4.8生药/kg；假手术组，模型组。每组动物20-30只，给药容积为0.4ml/100g/只。预先连续两天给药，每天一次；造模前0.5h进行第三次给药；造模后4h、12h分别进行第四、五次给药，即总共给药五次。模型组和假手术组大鼠则同等途径给予等容积生理盐水。
造模方法将大鼠用10％水合氯醛3.5ml/kg腹腔注射(ip)麻醉，颈正中切口，分离、结扎左侧颈总动脉、颈外动脉及其分支动脉，分离左侧颈内动脉。在颈内动脉近端备线、远端放置动脉夹，颈总动脉分叉处切口，插入4-0尼龙线，其深度约为17～20mm，栓线进入颈内动脉，入颅至大脑前动脉，阻断大脑中动脉所有血流来源。撤掉动脉夹，扎紧备线，剪去多余线头，伤口以碘伏消毒，最后缝合皮肤，手术完毕回笼饲养。假手术组除不插线外，其余步骤同上。其余七组大鼠按上述手术方法造模。
造模成功的标准动物手术清醒后有明显手术侧(即左侧)Horner症(左侧眼睑下垂，眼球凹陷)及手术侧(即左侧)偏瘫体症(不能完全伸展左前肢，行走时向左侧倾倒或转圈)。依上述标准将能够存活24h的大鼠确定为最后的实验对象，并进行行为学评分及快速断头取脑测定各项指标。
神经行为学试验结果经过脑梗塞的大鼠麻醉清醒后即有偏瘫样症状出现，主要表现为不同程度的手术对侧前肢内收，肩内旋，肌张力降低，推右肩向对侧移动，抵抗阻力下降，甚至有些动物还出现不停地向一侧转圈现象。将24小时存活的大鼠进行神经行为学评分，SH各给药组和复方丹参组大鼠与模型组比较，大鼠的神经行为学障碍明显地改善(P＜0.01)。假手术组动物行为无异常。静脉注射给药具有剂量小、作用强度大的特点；中、高剂量组SH注射液静脉注射给药与现有制剂复方丹参注射液、复方红草冻干粉针比较，具有较强的生理活性(P＜0.01)。结果见表4。
表4对大鼠神经行为学的影响(x±s)

与模型组比较*P＜0.05；**P＜0.01神经行为学评分标准MCAO术后24h大鼠按Bederson的方法对动物的行为进行分级评分，标准如下0级未观察到神经症状(0分)；1级提尾悬空时，动物的手术对侧前肢表现为腕肘屈曲，肩内旋，肘外展，紧贴胸壁(1分)；2级将动物置于光滑平面上，推手术侧肩向对侧移动时，阻力降低(2分)；3级动物自由行走时向手术对侧环转或转圈(3分)；4级软瘫，肢体无自发活动(4分)。
脑含水量测定神经行为学评分后，快速断头取鼠大脑。切下左脑后部分分别称重为湿重，置120℃烤箱烘(4h)，然后称重为干重，计算脑组织含水量。结果见表5。
脑组织含水量(％)＝(湿重-干重)/湿重×100％。
表5对大鼠脑含水量的影响(x±s)

与模型组对比，*P＜0.05，**P＜0.01。
试验结果表明，模型组脑含水量显著高于假手术组，造模后大鼠脑含水量明显增多；SH各给药组脑含水量则明显低于模型对照组(P＜0.01)，说明本制剂可显著降低脑含水量。
对大鼠脑梗塞范围的影响 取造模成功后存活24h大鼠每组8只，快速取左脑，去掉嗅球、小脑和低位脑干，冰冻25分钟。然后冠状切四刀，将全脑切成五片。第一刀位于脑前极与视交叉连线中点处，第二刀位于视交叉，第三刀在漏斗部，第四刀在漏斗柄与叶尾极之间。接着迅速将脑片置2％红四氮唑(TTC)中，避光，37℃温孵30分钟，其间每隔10min摇动一次，染色后以4％多聚甲醛固定。染色结果正常组织呈红色，梗塞组织呈白色。将全脑称重，并把白色梗死区剪下来称重，计算脑梗死面积(％)。结果见表6。
表6对大鼠脑梗死面积的影响(x±s)

与模型组对比，P＜0.05，**P＜0.01。
试验结果表明，脑缺血再灌注24h后脑组织梗塞程度明显。SH各给药组均可使脑梗塞面积百分比明显下降(P＜0.05、P＜0.01)。静脉注射给药具有剂量小、作用强度大的特点；中、高剂量组SH注射液静脉注射给药与现有制剂复方丹参注射液、复方红草冻干粉针比较，具有较强的生理活性(P＜0.01)。
4.荭草药材不同部位提取物对大鼠急性心肌梗塞的影响受试药物取荭草全草、根及茎、带叶茎枝、花穗，依法制备注射液(1g生药/ml)；假手术组(N.S)、模型组(N.S)、复方丹参注射液(FD，上海第一生化药业公司上海第一制药厂，批号010511)。
试验方法取SD大鼠70只，随机分为7组，每组10只，分别为生理盐水对照组、阳性对照组(FD)、全草、根及茎、带叶茎枝、花穗(均为1g生药/ml)。试验前各组动物用20％乌拉坦1.0g/kg腹腔麻醉，固定于鼠板上，记录正常心电图后。打开胸腔前接上人工呼吸机，结扎左冠状动脉前降支后，迅速关闭胸腔，恢复呼吸，记录心电图，有明显J点抬高者为手术成功征象(剔除未出现明显心肌梗死心电图波形者)。即刻各组分别股静脉给药4ml/kg，生理盐水对照组给同体积生理盐水。记录结扎后5、15、30、60、120min各时间点心电图，计算各时间J点偏移总mv数，并进行统计处理，结果见表7。试验结束后，立即取出心脏，用生理盐水洗净余血，剪去心房及各大血管、筋膜、心耳等，称取心室重量，然后将心肌切成等厚度的5片，置于37℃0.5％N-BT染色液中染色10min，取出剪去被染色的非梗塞心肌，称重未染色的梗塞区心肌，按下式计算心肌缺血区百分率，进行统计处理，结果见表8。

表7对结扎左冠状动脉前降支后J点位移的影响(X±SD)

与对照组比较 *P＜0.05表8对急性心肌梗塞范围的影响(X±SD)

与对照组比较 *P＜0.05 **P＜0.01试验结果表明，除根及茎外各样品均能不同程度改善缺血性心肌心电图，使心肌缺血区的百分率降低，对急性心肌梗死有明显的保护作用，与模型组比较均有显著性差异(P＜0.05、P＜0.01)，其中花穗具有作用时间长、作用强度大(P＜0.01)的特点。说明荭草的花穗是荭草有效部位。理化性质研究的结果显示花穗中黄酮和酚酸类成分的含量较高，提示黄酮和酚酸类成分为水红花的有效成分。
5.对离体兔心冠脉流量的影响取试验用家兔击后脑致昏，迅速开胸取出心脏，按Langendorff法主动脉插管，心脏固定在灌流装置上后，用恒温38±0.5℃且不间断通入纯氧的Ringer-Lock’s液灌流。灌流压恒定为50CmH2O。待灌流稳定后，采取交叉给药法，分别由灌流侧管注入供试药液，观察记录给药前、后1分钟的流量值。交叉给药间隔时间为10min。结果见表9。
表9对离体兔心冠脉流量的影响(X±SD)

药前与药后比较*p＜0.05 **p＜0.01
从表中结果可见，除样品根及茎外各样品均可使离体兔心冠脉流量增加，其增加值用药前与用药后比较，结果均有显著性或极显著性差异(p＜0.05、p＜0.01) 说明本品具有明显的扩张冠状动脉作用，其中果穗作用最强，使冠脉流量分别增加31％。
6.异常毒性试验取小鼠按《中国药典》2000年版二部附录XI C“异常毒性检查法”检查。三批SH注射液的试验结果表明，试验动物在规定时间内未见死亡及其他毒性反应。
二、成型工艺研究辅料的筛选本发明中，所用药用辅料包括甘露醇、乳糖、山梨醇、乳酸钙、水解明胶、葡萄糖、氯化钠、果糖、右旋糖苷、丙二醇、甘油、聚乙二醇、硬脂酸钠、甘油明胶、糊精、淀粉、植物油中的一种或几种。
1.注射剂不同填充剂种类的选择本申请人在研制中发现，适当的填充剂、药液浓度、填充剂用量是粉针制剂成型和稳定的重要因素，为了保证制剂的质量，本申请人以甘露醇、葡萄糖、乳糖、右旋糖苷、乳酸钙对产品的外观性状、色泽、疏松程度、是否有绒毛状物质形成等观察比较，对填充剂的种类进行了考察；取水红花提取物，加适量水溶解，分别加入填充剂混合溶解，0.22μm滤膜过滤后冷冻干燥，每支西林瓶装溶液2ml。冻干条件最低共熔点-16℃、-45℃条件下真空度13.332Pa、平衡冻结温度0℃、平衡时间1.5小时、升温干燥时间为8～15小时，干燥温度35℃。结果如下表填充剂种类筛选


试验结果表明，100ml药液中加入甘露醇的量为0.5～2g时，可保持样品冻干前的体积和形状，无硬壳，色泽好，不萎缩，样品呈疏松多孔状结构，复水性好。从成品色泽、溶解性、成形性、经济等方面综合考虑，填充剂最终选用甘露醇。
2.滴丸基质的选择滴丸要求制剂应迅速发挥疗效，加之药物含有挥发性成分，故选择熔点低，具有良好分散性的聚乙二醇作基质，滴丸的硬度、流动性较好，结果见下表。
滴丸剂基质筛选实验结果

注+++示很好；++示较好；+示一般3.滴丸冷却剂选择先以药物∶聚乙二醇＝1∶1.5的比例，从甲基硅油(粘稠度1000，200，100)、植物油、大豆油、花生油、菜子油中选择合适的冷凝剂。以滴丸的下降速度、成型情况为指标，将各指标的考察结果由好至差依次用“+++”，“++”，“+”，“-”表示，结果见下表。
冷却剂的选择实验结果


注+++示很好；++示较好；+示一般由上表可知，冷却剂选择植物油为佳。
因此本发明制备冻干粉针时选用甘露醇为填充剂，制备滴丸剂时选用聚乙二醇为基质、植物油为冷却剂。

实施例2取水红花2公斤，加水煎煮2次，每次2小时，加水量为原料重量的6倍，滤过，合并滤液，减压浓缩至相对密度1.05(温度为30℃)浸膏，用2倍量的乙醇沉淀处理，减压回收乙醇，用2％HCl调PH至3，用正丁醇或醋酸乙酯提取，回收溶剂，残渣用适量25％乙醇溶解，上D101大孔树脂柱，用40％乙醇洗脱，洗脱液回收乙醇，残留物喷雾干燥，得水红花提取物，提取物中有效成分总黄酮的含量占70％，酚酸的含量占1％。将水红花提取物与甘露醇，加适量注射用水，搅拌使溶解，用饱和碳酸氢钠溶液调pH值至7.2～7.8，滤过，滤液补加注射用水至400ml，混匀，灭菌30分钟，冷藏24小时，用0.22μm微孔滤膜滤过，加注射用水溶解至400ml，滤过，滤液无菌分装，每瓶2ml，冷冻干燥(最低共熔点16℃、-45℃条件下真空度13.332Pa、平衡冻结温度0℃、平衡时间1.5小时、升温干燥时间为8～15小时，干燥温度35℃)，压盖，即得200支冻干粉针。本产品按照常规方法使用。
实施例3取水红花2公斤，加水煎煮4次，每次0.5小时，加水量为原料重量的20倍，滤过，合并滤液，减压浓缩至相对密度1.25(温度为80℃)浸膏，用4倍量的乙醇沉淀处理，减压回收乙醇，用2％HCl调PH至5，用正丁醇或醋酸乙酯提取，回收溶剂，适量50％乙醇溶解，上D101大孔树脂柱分离，用95％乙醇洗脱，洗脱液回收乙醇，残留物真空干燥，得水红花提取物，提取物中有效成分总黄酮的含量占70％，酚酸的含量占15％。将水红花提取物加入熔融的40g聚乙二醇中，混匀，在保温条件下于植物油中滴制成滴丸，每丸重50mg。
实施例4取水红花2公斤，用60％的乙醇回流提取3次，每次1小时，加醇量为原料重量的8倍，滤过，合并滤液，减压回收乙醇，调PH至3，用正丁醇或醋酸乙酯提取，回收溶剂，残渣用40％乙醇溶解，聚酰胺柱分离，用80％乙醇洗脱，洗脱液回收乙醇，残留物采用喷雾干燥，得水红花提取物，提取物中有效成分总黄酮的含量占80％，酚酸的含量占6％。水红花提取物与适量氯化钠，加水溶解至1000ml，滤过，灭菌，分装，得注射液。
实施例5取水红花2公斤，用30％的乙醇回流提取2次，每次2小时，加醇量为原料重量的6倍，滤过，合并滤液，减压回收乙醇，调PH至2，用正丁醇或醋酸乙酯提取，回收溶剂，残渣用25％乙醇溶解，大孔树脂柱分离，用40％乙醇洗脱，洗脱液回收乙醇，残留物采用真空干燥，得水红花提取物，提取物中有效成分总黄酮的含量占80％，酚酸的含量占1％。将水红花提取物与甘露醇，加适量注射用水，搅拌使溶解，用饱和碳酸氢钠溶液调pH值至7.2～7.8，滤过，滤液补加注射用水至400ml，混匀，灭菌30分钟，冷藏24小时，用0.22μm微孔滤膜滤过，加注射用水溶解至400ml，滤过，滤液无菌分装，每瓶2ml，冷冻干燥(最低共熔点-16℃、-45℃条件下真空度13.332Pa、平衡冻结温度0℃、平衡时间1.5小时、升温干燥时间为8～15小时，干燥温度35℃)，压盖，即得200支冻干粉针。也可将冷冻干燥前的药液喷雾干燥，干法灭菌，无菌条件下分装于西林瓶中，得粉针剂。
实施例6取水红花2公斤，用95％的乙醇回流提取4次，每次0.5小时，加醇量为原料重量的20倍，滤过，合并滤液，减压回收乙醇，调PH至5，用正丁醇或醋酸乙酯提取，回收溶剂，残渣用50％乙醇溶解，聚酰胺柱分离，用95％乙醇洗脱，洗脱液回收乙醇，残留物采用喷雾干燥，得水红花提取物，提取物中有效成分总黄酮的含量占80％，酚酸的含量占15％。将水红花提取物加入熔融的40g聚乙二醇中，混匀，在保温条件下于植物油中滴制成滴丸，每丸重50mg。
实施例7取水红花2公斤，加水煎煮3次，每次1小时，加水量为原料重量的10倍，滤过，合并滤液，减压浓缩至相对密度1.15(温度为60℃)浸膏，用3倍量的乙醇沉淀处理，减压回收乙醇，调PH至3，用正丁醇或醋酸乙酯提取，回收溶剂，残渣用40％乙醇溶解，上D101大孔树脂柱，用80％乙醇洗脱，洗脱液回收乙醇，残留物上聚酰胺柱，用80％乙醇洗脱，洗脱液和流穿液回收乙醇，真空干燥，得水红花提取物，提取物中有效成分总黄酮的含量占15％，酚酸的含量占7％。水红花提取物与适量氯化钠，加水溶解至1000ml，滤过，灭菌，分装，得注射液。
实施例8取水红花2公斤，加水煎煮2次，每次2小时，加水量为原料重量的6倍，滤过，合并滤液，减压浓缩至相对密度1.05(温度为30℃)浸膏，用2倍量的乙醇沉淀处理，减压回收乙醇，调PH至2，用正丁醇或醋酸乙酯提取，回收溶剂，残渣用25％乙醇溶解，上D101大孔树脂柱，用40％乙醇洗脱，洗脱液回收乙醇，残留物上聚酰胺柱，用40％乙醇洗脱，洗脱液和流穿液回收乙醇，喷雾干燥，得水红花提取物，提取物中有效成分总黄酮的含量占15％，酚酸的含量占1％。将水红花提取物与甘露醇，加适量注射用水，搅拌使溶解，用饱和碳酸氢钠溶液调pH值至7.2～7.8，滤过，滤液补加注射用水至400ml，混匀，灭菌30分钟，冷藏24小时，用0.22μm微孔滤膜滤过，加注射用水溶解至400ml，滤过，滤液无菌分装，每瓶2ml，冷冻干燥(最低共熔点-16℃、-45℃条件下真空度13.332Pa、平衡冻结温度0℃、平衡时间1.5小时、升温干燥时间为8～15小时，干燥温度35℃)，压盖，即得200支冻干粉针。也可将冷冻干燥前的药液喷雾干燥，干法灭菌，无菌条件下分装于西林瓶中，得粉针剂。
实施例9取水红花2公斤，加水煎煮4次，每次0.5小时，加水量为原料重量的20倍，滤过，合并滤液，减压浓缩至相对密度1.25(温度为80℃)浸膏，用4倍量的乙醇沉淀处理，减压回收乙醇，调PH至5，用正丁醇或醋酸乙酯提取，回收溶剂，残渣用50％乙醇溶解，上D101大孔树脂柱，用95％乙醇洗脱，洗脱液回收乙醇，残留物上聚酰胺柱，用95％乙醇洗脱，洗脱液和流穿液回收乙醇，真空干燥，得水红花提取物，提取物中有效成分总黄酮的含量占15％，酚酸的含量占15％。将水红花提取物加入熔融的40g聚乙二醇中，混匀，在保温条件下于植物油中滴制成滴丸，每丸重50mg。
实施例10取水红花2公斤，用12倍量50％的乙醇，照流浸膏与浸膏剂项下的渗漉法(中国药典2000版附录13页)进行渗漉，渗漉液减压回收乙醇，调PH至4，用正丁醇或醋酸乙酯提取，回收溶剂，乙醇溶解，聚酰胺柱分离，用80％乙醇洗脱，洗脱液回收乙醇，残留物采用喷雾干燥，得水红花提取物，提取物中有效成分总黄酮的含量占50％，酚酸的含量占10％。提取物与适量氯化钠，加水溶解至1000ml，滤过，灭菌，分装，得注射液；或将提取物与甘露醇，加适量注射用水，搅拌使溶解，用饱和碳酸氢钠溶液调pH值至7.2～7.8，滤过，滤液补加注射用水至400ml，混匀，灭菌30分钟，冷藏24小时，用0.22μm微孔滤膜滤过，加注射用水溶解至400ml，滤过，滤液无菌分装，每瓶2ml，冷冻干燥(最低共熔点-16℃、-45℃条件下真空度13.332Pa、平衡冻结温度0℃、平衡时间1.5小时、升温干燥时间为12～15小时，干燥温度35℃)，压盖，即得200支冻干粉针。也可将冷冻干燥前的药液喷雾干燥，干法灭菌，无菌条件下分装于西林瓶中，得粉针剂。还可将提取物加入熔融的40g聚乙二醇中，混匀，在保温条件下于植物油中滴制成滴丸，每丸重50mg。
实施例11取水红花2公斤，加水煎煮3次，每次1小时，加水量为原料重量的10倍，滤过，合并滤液，减压浓缩至稠膏，真空干燥，得水红花提取物。提取物中有效成分总黄酮的含量占25％，酚酸的含量占1％。提取物加入适量糊精或淀粉制颗粒，分装于胶囊壳中得胶囊剂，分装于铝膜袋中得颗粒剂，颗粒压片得片剂。
实施例12取水红花2公斤，加水煎煮2次，每次2小时，加水量为原料重量的6倍，滤过，合并滤液，减压浓缩至相对密度1.15(温度为60℃)的浸膏，用2倍量的乙醇沉淀处理，减压回收乙醇，浓缩至稠膏，喷雾干燥，得水红花提取物。提取物中有效成分总黄酮的含量占50％，酚酸的含量占3％。提取物加适量水溶解，滤过，制得口服液；提取物加入适量糊精或淀粉制颗粒，分装于胶囊壳中得胶囊剂，分装于铝膜袋中得颗粒剂，颗粒压片得片剂。
实施例13取水红花2公斤，用60％的乙醇回流提取3次，每次1小时，加醇量为原料重量的8倍，滤过，合并滤液，减压浓缩至稠膏，真空干燥，得水红花提取物。提取物中有效成分总黄酮的含量占50％，酚酸的含量占4％。提取物加适量水溶解，滤过，制得口服液；提取物加入适量糊精或淀粉制颗粒，分装于胶囊壳中得胶囊剂，分装于铝膜袋中得颗粒剂，颗粒压片得片剂。
实施例14取水红花2公斤，加水煎煮4次，每次0.5小时，加水量为原料重量的20倍，滤过，合并滤液，减压浓缩至相对密度1.05(温度为30℃)浸膏，用3倍量的乙醇沉淀处理，减压回收乙醇，至相对密度1.10(温度为60℃)的浸膏，所得浸膏经D101大孔树脂柱分离，用60％乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇，残留物喷雾干燥，得水红花提取物，提取物中有效成分总黄酮的含量占55％，酚酸的含量占4％。提取物加适量水溶解，滤过，制得口服液；也可将提取物加入适量糊精或淀粉制颗粒，分装于胶囊壳中得胶囊剂，分装于铝膜袋中得颗粒剂，颗粒压片得片剂。
实施例15取水红花2公斤，加水煎煮3次，每次1小时，加水量为原料重量的10倍，滤过，合并滤液，减压浓缩至相对密度1.25(温度为80℃)浸膏，用4倍量的乙醇沉淀处理，减压回收乙醇，至相对密度1.10(温度为60℃)的浸膏，所得浸膏经D101大孔树脂分离，用60％乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇，残留物真空干燥，得水红花提取物，提取物中有效成分总黄酮的含量占40％，酚酸的含量占4％。提取物加入熔融的40g聚乙二醇中，混匀，在保温条件下于植物油中滴制成滴丸，每丸重50mg。
实施例16取水红花2公斤，加水煎煮2次，每次2小时，加水量为原料重量的6倍，滤过，合并滤液，减压浓缩至相对密度1.15(温度为60℃)浸膏，用2倍量的乙醇沉淀处理，减压回收乙醇，至相对密度1.10(温度为60℃)的浸膏，所得浸膏经D101大孔树脂柱分离，用60％乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇，残留物喷雾干燥，得水红花提取物，提取物中有效成分总黄酮的含量占40％，酚酸的含量占1％。提取物加入适量植物油，混匀，压制法制丸，即得软胶囊。


本发明提供了一种水红花制剂和制备方法及其应用，它是以水红花为原料，加入适当辅料制备而成的；与现有技术相比，本发明所提供的制剂在治疗冠心病、心绞痛、心肌梗塞、脑中风等心脑血管疾病方面疗效显著；具有起效快、作用时间长、作用强度大等特点；所提供的制备工艺解决了水红花中有效成分的提取与分离问题，提取物有效成分含量高，所得制剂达到了安全、有效、质量稳定可控的目的。