专利名称：双功能螯合剂与甘露糖基人血清白蛋白的复合物的制作方法在核医学中，淋巴系统的显像对于淋巴结的诊断是重要的。在乳腺癌和黑素瘤的情况下，如果能够通过将放射性胶体注入肿瘤来检测哨兵淋巴结(离肿瘤组织最近的淋巴结)，则在手术过程中能够避免过度切除。将被检测的哨兵淋巴结进行活组织检查以检测转移灶(metastases)，转移灶的存在会影响切除决定的作出。这对手术后的不良反应和美观是非常重要的° (G. Mariani, L. Moresco, G. Viale, G. Villa, Μ. Bagnasco, G. Canavese, J. Buscombe, H. W. Strauss, G. Paganelli. " Radioguided sentinel lymph node biopsy in breast cancer surgery. " J. Nucl. Med. 2001；42 :1198-1215 ；G. Mariani, Μ. Gipponi, L. Moresco, G. Villa, M. Bartolomei, G. Mazzarol, M. C. Bagnara, A. Romanini, F. Cafiero, G. Paganelli,H. W. Strauss. " Radioguided sentinel lymph node biopsy in malignant cutaneous melanoma" J. Nucl. Med. 2002 ；43 :811-827)。可以使用适当的放射性胶体使淋巴结显像，所述放射性胶体被注射到组织中， 随后移动并捕集到淋巴结中。可以通过Y探针来检测放射性蓄积于其中的淋巴结。用于显像和检测淋巴结的大多数放射性药物是99mTc标记的胶体，例如锑硫胶体(antimony sulfur colloid) (10-20nm)、白蛋白纳米胶体(albumin nano colloid) (50nm)和硫胶体 (100-200nm)。由于快速的淋巴结吸收，粒径较小的胶体是更理想的。由于锑硫胶体的粒径最小，因此其在目前使用的胶体中是最好的。然而，它的粒径还是过大，并且需要2小时的沸腾时间进行标记，因此它不适合应在清晨接受手术的患者。另外，在强酸介质中制备的锑硫胶体可能在中和后变得不稳定。为了解决这些问题，人们已使用了粒径为6-8nm的99mTc-人血清白蛋白(HSA)。 99mTc-HSA能够被快速标记，并表现出向淋巴结的快速移动。然而，其显示出低对比度的淋巴结影像，并且不仅在哨兵淋巴结中吸收，还在其他淋巴结中吸收，因为它不在淋巴结中蓄积而是绕过淋巴结。(W. T. Phillips, Τ. Andrews, H. -L. Liu, R. Klipper, A. J. Landry Jr, R. Blumhardt, B. Goins. " Evaluation of [99mTc] liposomes as lymphoscintigraphic agents comparison with[99mTc] sulfur colloid and[99mTc]human serum albumin" Nucl. Med. Biol. 2001 ；28 :435-444)。为了解决这个问题，开发了被称为二硫还原甘露糖化人血清白蛋白(disulfide reduced mannosylated human serum albumin) (MSA)的新型放射性药物,其能够与存在于免疫细胞上的甘露糖受体牢固结合、易于用"mTc标记、具有适当的分子大小以被吸收到淋巴毛细管中，并对人体没有不良反应。(Korean Patent 10-0557008，Disulfide reduced mannosylated serum albumin for lymphoscintigraphy and radiolabeled compounds comprising it. Feb 23rd 2006 ；Jeong JM, Hong MK, Kim YJ, Lee J, Kang JH, Lee DS,Chung JK, Lee MC. Development of 99mTc-ηeomannosy 1 human serum albumin (99mTc-MSA) as a novel receptor binding agent for sentinel lymph node imaging. Nucl Med Commun. 2004 25(12) :1211-7)。已知MSA能够牢固结合甘露糖受体(P. Mahl.等人，Cell 1980;19:207-215)。因此在上述专利中，如果MSA被适当的用于显像的放射性核素(例如99mTc)标记，则假定能够将淋巴结显像。此外，由于MSA的6-8nm的小粒径，其会表现出较快的淋巴结吸收。然而，在不修饰的情况下，MSA本身并不能用99mTc标记。因此，通过用适当的还原剂(例如β-巯基乙醇和二硫苏糖醇)处理来制备二硫还原MSA。有报道在通过用还原剂处理以还原二硫键后，用99mTc标记二硫还原半乳糖基化或乳糖基化人血清白蛋白。(Korean Patent 0464917. New disulfide reduced galactosylated serum albumin thereof ；a liver function imaging composition ；and a radiolabeled compound comprising it. Dec 24th 2004)。然而，这些99mTc标记的药物不能通过正电子发射断层摄影(PET)显像。最近，对用于免疫细胞显像的正电子标记的放射性药物的需求增加，原因是由于 PET优于传统γ显像而得以广泛使用，此外，开发出了用于检测转移灶的正电子探针或β 探针。一般而言，正电子发射体(例如^、"(^、巧和15。)是由回旋加速器产生的。在这些发射体中，由于18F较其他放射性核素而言有相对长的半衰期(110分钟)，因此仅18F可应用于淋巴结显像。然而，它的标记操作需要在高温下蒸发和加热，这些太过复杂并且导致蛋白质变性。此外，18F的产生还需要昂贵的回旋加速器系统。
本发明的目的是开发双功能螯合剂(BCA)与MSA的结合物、其放射性标记的化合物以及用于放射性标记的药盒的制备。因此预期效果是便于用正电子发射体6Ma标记、标记的化合物具有更高稳定性，以及由于在淋巴结、肝和脾中高度蓄积而导致的优异的免疫系统(包括淋巴结)显像。与fi8Ga形成稳定复合物的候选BCA是1，4，7-三氮杂环壬烷-1，4，7-三乙酸(NOTA) 和1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1，4，7，10-四乙酸(DOTA)，两者之中更优选Ν0ΤΑ。所选择的用于标记MSA与BCA结合物以检测和显像免疫细胞的放射性核素是68Ga。本发明的另一目的是提供药盒，其能够容易地制备用于检测和显像免疫细胞的放射性药物制剂。具体而言，本发明的目的是提供药学相容的用于显像免疫细胞的药盒，其在无菌瓶中包含BCA-MSA和缓冲液，并且可以容易地用金属放射性核素标记。本发明涉及(1)由下式1表示的双功能螯合剂(BCA)与甘露糖基人血清白蛋白(MSA)的结合物(Man-L1)n-A- (L2-BCA)m[式1]其中，Man是甘露糖基；L1和L2独立地是一个或多个连接基(linker)或直接结合(direction conjugation)；A是人血清白蛋白；BCA是选自1，4，7-三氮杂环壬烷-1，4，7-三乙酸(NOTA)或1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1，4，7，10-四乙酸(DOTA)的双功能螯合剂；并且m和η独立地是1至58的整数；(2)第(1)项的结合物，其中L1和L2独立地是直接结合或一个或多个连接基，所述连接基包含一个或多个选自C1-Cltl烷基、C4-C10芳基、硫脲、三唑、单肽、二肽、三肽、C4-C10 环烷基、苄基、硫醚、胺、酰胺、酯、硫酯、醚、胼、酰胼、戊糖基和己糖基的残基；(3)第⑴项的结合物，其中L1和L2独立地选自下式本发明涉及与双功能螯合剂(BCA)结合的甘露糖基人血清白蛋白(MSA)及其放射性同位素标记的化合物，所述化合物用于免疫系统例如巨噬细胞、肝巨噬细胞、网状内皮系统(RES)和淋巴系统的显像。本发明包括BCA-MSA结合物、其放射性标记的化合物和用于放射性标记的药盒。本发明改良了放射性标记操作、表现出较高的淋巴系统吸收，并使得能够通过正电子发射断层摄影(PET)显像。