5－氨基水杨酸的糖苷前体药物制作方法_中村明生专利（前体,糖苷,水杨酸）-早鸽网

5－氨基水杨酸的糖苷前体药物制作方法

专利名称

5－氨基水杨酸的糖苷前体药物制作方法
发明者

中村明生
公开日

2007年2月14日
申请日期

2005年2月2日
优先权日

2004年2月3日
申请人

日本新药株式会社
文档编号

A61K31/7036GK1914220SQ200580003580
关键字

前体糖苷水杨酸氨基药物
权利要求

1.5-氨基-2-(β-D-吡喃半乳糖氧基)苯甲酸或5-氨基-2-(α-D-吡喃半乳糖氧基)苯甲酸或者它们在医药领域中所允许的盐2.含有5-氨基-2-(β-D-吡喃半乳糖氧基)苯甲酸或5-氨基-2-(α-D-吡喃半乳糖氧基)苯甲酸或其医药品作为有效成分的医药组合物3.含有5-氨基-2-(β-D-吡喃半乳糖氧基)苯甲酸、5-氨基-2-(α-D-吡喃半乳糖氧基)苯甲酸或5-氨基-2-(β-D-吡喃葡糖氧基)苯甲酸或者它们在医药领域中所允许的盐作为有效成分的溃疡性结肠炎治疗剂
技术领域

本发明涉及由以下的通式[1]表示的5-氨基-2-(β-D-吡喃半乳糖氧基)苯甲酸(以下称为“化合物[1]”)或由以下的通式[2]表示的5-氨基-2-(α-D-吡喃半乳糖氧基)苯甲酸(以下称为“化合物[2]”)或者它们在医药领域中所允许的盐此外，本发明还涉及含有化合物[1]或化合物[2]或者它们在医药领域中所允许的盐作为有效成分的医药组合物另外，本发明还涉及含有化合物[1]、化合物[2]或以下的通式[3]表示的5-氨基-2-(β-D-吡喃葡糖氧基)苯甲酸(以下称为“化合物[3]”)或者它们在医药领域中所允许的盐作为有效成分的溃疡性结肠炎治疗剂背景技术由于5-氨基水杨酸(以下称为“5-ASA”)具备自由基(DPPHL)还原作用、过氧化氢消去作用、次氯酸根离子消去作用、过氧化脂质抑制作用和白细胞三烯B4生物合成抑制作用，所以作为被统称为非特异性炎性肠病(inflammatorybowel diseaseIBD)的溃疡性结肠炎(ulcerative colitisUC)及克罗恩病(Crohn′s diseaseCD)的治疗药是有用的(例如，参照非专利文献1)，前述非特异性炎性肠病是本质为慢性炎性病变的需要终生治疗的疑难疾病，其病症会出现缓解和复发的不断反复但是，已知直接口服5-ASA后在小肠上部被迅速且完全地吸收，通过对炎症部位的局部作用而显现其效果的5-ASA几乎不会到达作为病灶部位的大肠附近(例如，参照非专利文献3)从这-观点出发，为使5-ASA到达作为作用部位的大肠，进行了5-ASA的给药系统(drug delivery system，以下称为“DDS”)及前体药物化的研究(例如，参照非专利文献1、2、4)作为5-ASA的DDS制剂，可例举通过用乙基纤维素的多孔性膜包裹5-ASA而制得的使5-ASA从小肠至大肠慢慢地释放的5-ASA制剂(商品名Pentasa(注册商标)、日清kyorin制药株式会社制)(例如，参照非专利文献1、2)但是，已知给健康成人空腹一次口服以5-ASA计为1000mg的药物制剂的情况，与直接一次口服5-ASA的情况相比，血浆中未变化体浓度最高减少至1/14(Cmax＝1448.6±586.4ng/ml)，且有相当量的5-ASA转移至血浆中(例如，参照非专利文献5)此外，作为5-ASA的前体药物，可例举5-ASA的氨基被偶氮化的化合物水杨酸偶氮磺胺吡啶(以下称为“SASP”，商品名Salazopyrin(注册商标)，辉瑞制药公司制)(例如，参照非专利文献3)该化合物被存在于大肠内的具有偶氮还原酶的肠道细菌代谢为5-ASA虽然已确认SASP对溃疡性结肠炎的有效性，但SASP被肠道细菌分解时生成的磺胺吡啶(SP)会产生药物过敏、男性不育、恶心、头痛等副作用，存在一定的问题(例如，参照非专利文献3)另外，作为另一前体药物，已知5-氨基水杨酸甲酯由具备高水溶性的的葡萄糖糖苷衍生得到的化合物，例如，5-氨基-2-(β-D-吡喃葡糖氧基)苯甲酸甲酯及2-乙酰氧基-5-(β-D-吡喃葡萄基氨基)苯甲酸甲酯(例如，参照非专利文献6、7)已确认该化合物的安全性，但完全未探讨其对于溃疡性结肠炎的治疗效果此外，报道了非5-ASA的作为溃疡性结肠炎治疗剂有用的甾类化合物的前体药物，例如，地塞米松、强的松龙由葡萄糖等的糖苷衍生得到的化合物(例如，参照专利文献1)该化合物以对大肠特异性地给药为目的，但据报道，对于大鼠胃内给药时，地塞米松的葡萄糖衍生物仅60％到达盲肠，而强的松龙的葡萄糖衍生物更是只有15％以下到达盲肠如上所述，目前还未找到可使作为溃疡性结肠炎治疗剂有用的5-ASA在胃和小肠上部几乎不被吸收或代谢，能够有效地到达作为病灶部位的大肠，安全的、可长期给药的溃疡性结肠炎治疗剂专利文献1日本专利特公昭60-501105号公报非专利文献1Folia Pharmacol.Jpn.104，pp.447-457(1994)非专利文献2Folia Pharmacol.Jpn.104，pp.303-311(1994)非专利文献3Scandinayian Journal of Gastroenterology，23，pp.107-112(1988)非专利文献4Advanced Drug Delivery Reviews，7，pp.149-199(1991)非专利文献5Yakuri To Chiryo，22(Suppl.10)，pp.S2467-S2495(1994)非专利文献6Magyar Kemiai Folyoirat，97(4)，pp.143-148(1991)非专利文献7Archiv der Pharmazie An International JournalPharmaceutical and Medicinal Chemistry，332(9)，pp.321-326(1999)发明的揭示本发明的目的是提供可使作为溃疡性结肠炎治疗剂有用的5-ASA在胃和小肠上部几乎不被吸收或代谢，能够有效地到达作为病灶部位的大肠，安全的、可长期给药的溃疡性结肠炎治疗剂本发明者进行认真研究后找到了可实现上述目的的化合物，从而完成了本发明作为本发明，可例举化合物[1]或化合物[2]或者它们在医药领域中所允许的盐此外，作为本发明可例举含有化合物[1]或化合物[2]或者它们在医药领域中所允许的盐作为有效成分的医药组合物作为本发明，还可例举含有化合物[1]、化合物[2]或化合物[3](以下，为了方便描述统称为“本发明化合物”)或者它们在医药领域中所允许的盐为有效成分的溃疡性结肠炎治疗剂由于本发明化合物在大肠内被肠道菌群代谢为5-ASA，所以能够减弱全身性的副作用，可使用较大给药量的本发明化合物，能够实现长期的处方本说明书中所用的术语的定义如下所述“溃疡性结肠炎”是指发生在大肠的原因不明的糜烂性非特异性炎症，主要侵蚀粘膜，常常形成糜烂或溃疡以下，对本发明进行详述本发明化合物可由公知化合物或易制得的中间体、按照例如以下的方法制得本发明化合物的制备中，在原料具有对反应会造成影响的取代基的情况下，一般预先通过公知方法用适当的保护基对原料进行保护后再实施反应保护基可在反应后通过公知方法除去制法1 式中，R1表示碳原子数1～6的直链状或支链状的烷基，R2表示D-吡喃葡糖基或D-吡喃半乳糖基(该R2的各羟基可被乙酰基等保护基保护)，X表示氟、氯、溴、碘等卤素工序1本反应是公知化合物[4]的酯化反应，可按照公知方法(参照非专利文献7)实施反应温度以20～200℃为宜反应溶剂一般因制备的羧酸酯的种类而异，可例举例如甲醇、乙醇等醇类作为酸，可例举盐酸、硫酸等无机酸反应时间因所用原料的种类、反应温度而异，通常以1～72小时为宜工序2本反应是化合物[5]和葡萄糖或半乳糖的端基被卤化的化合物的缩合反应，该反应可按照公知方法(参照非专利文献7)实施本反应在催化剂存在下通过构型反转而进行作为本反应的催化剂，可例举氧化银、氧化汞、AgOCOR3(R3表示碳原子数1～6的直链状或支链状的烷基)反应溶剂只要是一般对反应无影响的溶剂即可，无特别限定，可例举例如喹啉反应温度以0～100℃为宜反应时间因所用原料的种类、反应温度等而异，通常以1～72小时为宜此外，可根据需要利用公知的方法除去制得的化合物[6]的R2的各羟基的保护基此外，作为原料化合物的化合物[9]可以是市售化合物，也可以通过例如下述方法制备本反应是对葡萄糖或半乳糖等糖的端基进行卤化的反应，该反应可按照公知方法实施作为卤化剂，一般使用溴化氢-乙酸溶液、三溴氧化磷、三氯氧化磷等，反应溶剂只要是一般对反应无影响的溶剂即可，无特别限定，可例举例如二氯甲烷、氯仿、1，2-二氯乙烷等卤素类溶剂反应温度以0～100℃为宜反应时间因所用原料的种类、反应温度而异，通常以1～72小时为宜工序3本反应是化合物[6]的氢化反应，该反应可按照公知方法(非专利文献7)实施本反应例如可在金属催化剂存在下、在适当的溶剂中、一般在1～10气压的氢气压下、于0～100℃实施作为金属催化剂，一般采用披钯炭、钯黑、二氧化铂、披铂炭等，反应溶剂只要是一般对反应无影响的溶剂即可，无特别限定，可例举四氢呋喃、1，4-二?烷、1，2-二甲氧基乙烷等醚类，甲醇、乙醇等醇类，N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二甲基乙酰胺等酰胺类，苯、甲苯、二甲苯等烃类或它们的混合溶剂反应时间因所用原料的种类、反应温度而异，通常以1～48小时为宜此外，可根据需要利用公知的方法除去制得的化合物[7]的R2的各羟基的保护基工序4本反应为化合物[7]的羧酸酯的水解反应，该反应可按照公知方法实施反应温度以0～100℃为宜反应溶剂只要是一般对反应无影响的溶剂即可，无特别限定，可例举例如甲醇、乙醇等醇类作为碱，可例举氢氧化钠、氢氧化钾等无机碱反应时间因所用原料的种类、反应温度而异，通常以1～72小时为宜另外，化合物[6]的另一制法方法如下所述制法2 式中，R1、R2如前所述，X1表示氟、氯、溴、碘等卤素工序1本反应是公知化合物[10]的酯化反应，可按照公知方法(参照非专利文献7)实施反应温度以20～200℃为宜反应溶剂一般因所制备的羧酸酯的种类而异，可例举例如甲醇、乙醇等醇类作为酸，可例举盐酸、硫酸等无机酸反应时间因所用原料的种类、反应温度而异，通常以1～72小时为宜工序2本反应是化合物[11]和葡萄糖或半乳糖衍生物[12]的缩合反应，该反应可按照公知方法实施作为本反应的缩合剂，可例举碱本反应中，由于无法控制端基的构型，所以必须利用硅胶色谱法分离精制出单一的非对映体通过该分离操作，可获得对应于端基的构型的2种化合物(α体和β体)作为用于本反应的碱，可例举例如1，5-二氮杂双环[4.3.0]-5-壬烯、1，4-二氮杂双环[2.2.2]辛烷、1，8-二氮杂双环[5.4.0]-7-十一碳烯反应溶剂只要是一般对反应无影响的溶剂即可，无特别限定，可例举例如乙腈、二甲亚砜反应温度以0～100℃为宜反应时间因所用原料的种类、反应温度等而异，通常以1～72小时为宜另外，可根据需要利用公知的方法除去制得的化合物[6]的R2的各羟基的保护基以上制得的本发明化合物可通过公知的方法，例如，浓缩、液性变换、相转移、溶剂萃取、结晶化、重结晶、分馏、色谱法进行分离精制本发明化合物可直接作医药品使用，也可通过公知方法加工成在医药领域中所允许的盐的形式本发明化合物的“盐”是指在医药领域中所允许的盐，可例举例如氢氯酸、硫酸、硝酸、磷酸、氢氟酸、氢溴酸等无机酸的盐，乙酸、酒石酸、乳酸、柠檬酸、富马酸、马来酸、琥珀酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、甲苯磺酸、萘磺酸、樟脑磺酸等有机酸的盐，钠、钾、钙等碱金属或碱土类金属的盐优选的盐可例举盐酸盐例如，通过用氯化氢的醇溶液或乙醚溶液对本发明化合物进行处理，滤取析出的结晶，或者在无结晶析出的情况下，浓缩溶液使结晶析出后滤取，可制得本发明化合物的盐酸盐如后述的试验例所示，本发明化合物具有几乎不会向血浆中转移这样的现有的与5-ASA相关的医药品所没有的优良特征，此外，通过口服给药能够有效地使作为活性本体的5-ASA到达作为病灶部位的盲肠、近端结肠、远端结肠及/或直肠的整个大肠的较大范围因此，本发明化合物作为安全的、能够长期给药的溃疡性结肠炎治疗剂是有用的其中，化合物[1]的效果特别明显如后述的试验例所示，探讨大鼠的三硝基苯磺酸(TNBS)诱发的结肠炎模型中的化合物[1]的有效性的结果是，本发明化合物显著地抑制了损伤评分(damage score)和大肠湿重，是良好的溃疡性结肠炎治疗剂本发明化合物作为医药品给药时，可将本发明化合物或其在医药领域中所允许的盐直接给药，或者以例如0.1％～99.5％、较好是0.5％～90％的含量使其包含于医药领域中所允许的无毒性且惰性的载体中，供包括人在内的哺乳动物服用作为在医药领域中所允许的载体，可采用1种以上固态、半固态或液状的稀释剂、填充剂及其它处方用助剂医药组合物最好以给药单元的形式给药医药组合物可口服或非口服(例如，经直肠等)给药当然是以适合这些给药形式的剂型给药例如，较好为口服给药本发明化合物或其在医药领域中所允许的盐的用量较好是考虑年龄、体重、疾病的性质、程度等患者的状态及给药途径后进行调整，通常，成人口服给药时，本发明化合物或其在医药领域中所允许的盐的有效成分量1天在10mg～10g/成人的范围内，较好是在1g～4g/成人的范围内根据情况，有时在上述用量范围以下即可，相反有时需要在上述范围之上的用量通常可1天1次或分数次进行给药口服给药时可以固态或液状的用量单元，例如细粒剂、散剂、片剂、糖衣剂、胶囊剂、颗粒剂、溶液剂、糖浆剂、栓剂及其它剂型进行细粒剂通过将本发明化合物或其在医药领域中所允许的盐适当研细而制得散剂通过将本发明化合物或其在医药领域中所允许的盐适当研细，然后将其与被同样研细的医药品用载体混合而制得，所述载体有例如玉米淀粉、甘露糖醇这样的可食用性碳水化合物，结晶纤维素等根据需要其中还可混入矫味剂、保存剂、分散剂、着色剂、香料等胶囊剂按照以下方法制得即，将首先如上所述形成为粉末状的细粒剂、散剂或片剂的项目中所描述的那样颗粒化的制剂，填入到例如明胶胶囊这样的胶囊外皮中而制得也可以在粉末状的制剂中混入润滑剂或流化剂，例如胶体状的二氧化硅、滑石、硬脂酸镁、硬脂酸钙、固态的聚乙二醇等，再进行填充操作而制得如果添加崩解剂或增溶剂，例如羧甲基纤维素、羧甲基纤维素钙、低取代度羟丙基纤维素、羟丙基纤维素、交联羧甲基纤维素钠、羧甲基淀粉钠、碳酸钙、碳酸钠、无水磷酸氢钙，则可改善胶囊剂被摄入时的药效片剂通过加入赋形剂制得粉末混合物，将该混合物颗粒化或渣化，然后加入崩解剂或润滑剂后打片而制得在制造粉末混合物时，将适当粉末化的物质和上述稀释剂或基质混合，根据需要可并用粘合剂(例如，羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇)、溶解延迟剂(例如，石蜡)、再吸收剂(例如，季盐)或吸附剂(例如，膨润土、高岭土、磷酸二钙)首先，用例如糖浆、淀粉糊、阿拉伯胶、纤维素溶液或高分子物质溶液等粘合剂浸湿粉末混合物，搅拌混合，将其干燥、粉碎，可制得颗粒也可替代上述粉末的颗粒化，首先将粉末混合物装入打片机，再粉碎所得的不完全形态的渣，形成颗粒通过作为润滑剂添加硬脂酸、硬脂酸盐、滑石粉、矿物油等，可防止以上制得的颗粒的互相粘附然后，将该经过润滑的混合物打片可在以上制得的素片外包裹薄膜或糖衣此外，本发明化合物或其在医药领域中所允许的盐也可不经过上述颗粒化或渣化的工序，而是与流动性的惰性载体混合后直接打片也可采用由虫胶的密封膜形成的透明或半透明的保护膜，糖或高分子材料形成的膜，以及由蜡形成的光滑的膜进行包覆例如溶液剂、糖浆剂、酏剂等其它的口服剂型也可形成为其一定量中含有一定量的药物的用量单元形态糖浆剂可通过将本发明化合物或其在医药领域中所允许的盐溶于适当的香味水溶液制得此外，酏剂可采用无毒性的醇性载体制得根据需要，用于口服的用量单元处方也可微囊化该处方的药物通过包覆或埋入高分子·蜡等中，也可延长作用时间或持续释放非口服给药时可采用栓剂等直肠给药可通过使用栓剂等实现，该栓剂通过以下方法制得，即，使本发明化合物或其在医药领域中所允许的盐溶解或悬浮于例如聚乙二醇、可可脂、半合成的油脂(例如，Witepsol/注册商标)、高级酯类(例如，棕榈酸肉豆蔻酯)低熔点的可溶或不溶于水的固体及它们的混合物而制得附图的简单说明

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法律状态

专利名称：5－氨基水杨酸的糖苷前体药物的制作方法图1表示血浆中的5-ASA的浓度变化，纵轴表示存在于大鼠血浆中的5-ASA的浓度(ng/ml)，横轴表示时间(小时)，黑色圆形标记表示给予化合物[1]时的5-ASA的浓度变化，白色菱形标记表示给予化合物[2]时的5-ASA的浓度变化，白色三角形标记表示给予化合物[3]时的5-ASA的浓度变化，白色圆形标记表示给予Pentasa(注册商标)时的5-ASA的浓度变化。图2表示盲肠内容物中的5-ASA量的变化，纵轴表示存在于大鼠盲肠内容物中的5-ASA量(一剂中的％)，横轴表示时间(小时)，黑色圆形标记表示给予化合物[1]时的5-ASA量的变化，白色圆形标记表示给予Pentasa(注册商标)时的5-ASA量的变化，黑色三角形标记表示给予5-ASA时的5-ASA量的变化。图3表示近端结肠内容物中的5-ASA量的变化，纵轴表示存在于大鼠近端结肠内容物中的5-ASA量(一剂中的％)，横轴表示时间(小时)，黑色圆形标记表示给予化合物[1]时的5-ASA量的变化，白色圆形标记表示给予Pentasa(注册商标)时的5-ASA量的变化，黑色三角形标记表示给予5-ASA时的5-ASA量的变化。图4表示远端结肠内容物中的5-ASA量的变化，纵轴表示存在于大鼠远端结肠内容物中的5-ASA量(一剂中的％)，横轴表示时间(小时)，黑色圆形标记表示给予化合物[1]时的5-ASA量的变化，白色圆形标记表示给予Pentasa(注册商标)时的5-ASA量的变化，黑色三角形标记表示给予5-ASA时的5-ASA量的变化。图5表示直肠内容物中的5-ASA量的变化，纵轴表示存在于大鼠直肠内容物中的5-ASA量(一剂中的％)，横轴表示时间(小时)，黑色圆形标记表示给予化合物[1]时的5-ASA量的变化，白色圆形标记表示给予Pentasa(注册商标)时的5-ASA量的变化，黑色三角形标记表示给予5-ASA时的5-ASA量的变化。图6表示结肠组织中的5-ASA的浓度变化，纵轴表示存在于1g大鼠结肠中的5-ASA的浓度(μg/g)，横轴表示时间(小时)，白色菱形标记表示给予化合物[2]时的5-ASA的浓度变化，白色圆形标记表示给予Pentasa(注册商标)时的5-ASA的浓度变化。图7表示直肠组织中的5-ASA的浓度变化，纵轴表示存在于1g大鼠直肠中的5-ASA的浓度(μg/g)，横轴表示时间(小时)，白色菱形标记表示给予化合物[2]时的5-ASA的浓度变化，白色圆形标记表示给予Pentasa(注册商标)时的5-ASA的浓度变化。图8以损伤评分表示Pentasa(注册商标)及化合物[1]对大鼠TNBS引发的结肠炎的治疗效果，纵轴表示损伤评分，横轴表示各被验药物的给药量(mg/kg/次)。
图9表示Pentasa(注册商标)及化合物[1]对于伴随大鼠TNBS引发的结肠炎的发病而出现的组织湿重的增加的作用，纵轴表示大肠湿重(g)，横轴表示各被验药物的给药量(mg/kg/次)。
实施发明的最佳方式以下，揭示实施例、试验例及制剂例，对本发明进行更详细的说明，但本发明并不仅限于这些实施例。
实施例1 5-氨基-2-(β-D-吡喃半乳糖氧基)苯甲酸工序1 5-硝基水杨酸甲酯在30g的5-硝基水杨酸的无水甲醇(500ml)中滴加浓硫酸，加热回流2天。减压浓缩反应液，用乙酸乙酯(500ml)稀释，加水(500ml)，冰冷下慢慢加入饱和碳酸氢钠水溶液使其呈碱性(pH＝9)。过滤析出的黄色沉淀，用乙酸乙酯萃取滤液的水层，用水、饱和食盐水洗涤合并的有机层，用无水硫酸镁干燥后过滤，浓缩溶剂，获得5-硝基水杨酸甲酯31.26g。
工序2-1溴化2’，3’，4’，6’-四-O-乙酰基-α-D-吡喃半乳糖冰冷65g的1’，2’，3’，4’，6’-五-O-乙酰基-β-D-吡喃半乳糖的二氯甲烷(500ml)溶液，滴加30％溴化氢乙酸溶液(177.5g)。室温下搅拌反应混合物14小时后，将其投入加冰的饱和碳酸氢钠水溶液中。有机层用饱和食盐水洗涤，用无水硫酸镁干燥后过滤，浓缩溶剂，获得68.7g溴化2’，3’，4’，6’-四-O-乙酰基-α-D-吡喃半乳糖。
工序2-2 5-硝基-2-(2’，3’，4’，6’-四-O-乙酰基-β-D-吡喃半乳糖氧基)苯甲酸甲酯在30.55g工序1获得的5-硝基水杨酸甲酯和63.7g工序2-1获得的溴化2’，3’，4’，6’-四-O-乙酰基-α-D-吡喃半乳糖的喹啉(250ml)溶液中加入氧化银(35.92g)，在遮光条件下于室温搅拌62小时。用乙酸乙酯(1000ml)稀释反应混合物后用硅藻土过滤。用2N的盐酸(1000ml)对乙酸乙酯层洗涤2次后，用乙酸乙酯对水层萃取2次。用饱和碳酸氢钠水溶液、水和饱和食盐水洗涤合并的有机层后，用硫酸钠干燥，再过滤，浓缩溶剂，获得5-硝基-2-(2’，3’，4’，6’-四-O-乙酰基-β-D-吡喃半乳糖氧基)苯甲酸甲酯71.7g。
工序2-3 5-硝基-2-(β-D-吡喃半乳糖氧基)苯甲酸甲酯于60℃搅拌10.55g工序2-2获得的5-硝基-2-(2’，3’，4’，6’-四-O-乙酰基-β-D-吡喃半乳糖氧基)苯甲酸甲酯的甲醇溶液，加入甲醇钠。搅拌30分钟后，用Amberlite IRC-50(5.0g，商品名，阳离子交换树脂)中和反应混合物。过滤后浓缩有机层，获得5-硝基-2-(β-D-吡喃半乳糖氧基)苯甲酸甲酯4.90g。
工序3 5-氨基-2-(β-D-吡喃半乳糖氧基)苯甲酸甲酯在工序2-3获得的4.90g的5-硝基-2-(β-D-吡喃半乳糖氧基)苯甲酸甲酯的甲醇(100ml)溶液中加入10％披钯炭(0.49g)，在1气压的氢气气氛下于室温进行催化还原反应。20小时后过滤反应液，除去催化剂，浓缩有机层，获得5-氨基-2-(β-D-吡喃半乳糖氧基)苯甲酸甲酯4.18g。
工序4 5-氨基-2-(β-D-吡喃半乳糖氧基)苯甲酸在工序3获得的4.18g的5-氨基-2-(β-D-吡喃半乳糖氧基)苯甲酸甲酯的无水甲醇(120ml)悬浮液中滴加1N氢氧化钠水溶液(12.7ml)，加热回流下搅拌16小时。直接减压浓缩反应液，用蒸馏水稀释残渣。然后，用2N盐酸(6.4ml)中和。浓缩该混合物，获得3.41g目标化合物。
无色粉末
MS(EI)m/z＝338[M+Na]+旋光度[α]D20＝-19.84(C＝1.28，H2O)元素分析值(以C13H17NO8计)计算值(％)C49.52，H5.43，N4.44实测值(％)C49.12，H5.37，N4.381H NMR(D2O)3.74～4.01(m，6H，H-2～6)，5.04(d，1H，J1，2＝7.4Hz，H-1)，7.30～7.39(m，3H，Ph)实施例2 5-氨基-2-(α-D-吡喃半乳糖氧基)苯甲酸工序1 2-氟-5-硝基苯甲酸甲酯冰冷12.0g的2-氟-5-硝基苯甲酸的无水四氢呋喃(60ml)及二甲基甲酰胺(60μl)溶液，滴加草酰氯(9.05g)。滴加结束后，于室温搅拌5小时。在反应液中滴加无水四氢呋喃(30ml)及甲醇(30ml)溶液，室温下彻夜搅拌。减压浓缩反应液，用乙酸乙酯(240ml)稀释，再用5％碳酸氢钠水溶液、饱和食盐水洗涤，用无水硫酸镁干燥后过滤，浓缩溶剂。在浓缩残渣中加入异丙醚(24ml)使其溶解，冷却至5℃，使结晶析出。减压过滤析出的结晶后，室温下减压干燥，获得2-氟-5-硝基苯甲酸甲酯10.5g。
工序2 5-硝基-2-(2’，3’，4’，6’-四-O-乙酰基-α-D-吡喃半乳糖氧基)苯甲酸甲酯在7.13g工序1获得的2-氟-5-硝基苯甲酸甲酯和12.50g的2’，3’，4’，6’-四-O-乙酰基-D-吡喃半乳糖的乙腈(70ml)溶液中滴加4.95g的DBU，室温下搅拌2小时。减压浓缩反应液，用乙酸乙酯(300ml)稀释，用1N盐酸(150ml)、5％碳酸氢钠水溶液(150ml)和饱和食盐水(150ml)洗涤，用无水硫酸镁干燥后过滤，浓缩溶剂。用柱色谱法(Wako gel(注册商标)C-200(和光纯药株式会社制)，正己烷∶乙酸乙酯＝4～1.5)对浓缩物进行精制，获得7.51g的5-硝基-2-(2’，3’，4’，6’-四-O-乙酰基-α-D-吡喃半乳糖氧基)苯甲酸甲酯和7.92g的5-硝基-2-(2’，3’，4’，6’-四-O-乙酰基-β-D-吡喃半乳糖氧基)苯甲酸甲酯。
工序3-1 5-氨基-2-(2’，3’，4’，6’-四-O-乙酰基-α-D-吡喃半乳糖氧基)苯甲酸甲酯在7.00g工序2-1制得的5-硝基-2-(2’，3’，4’，6’-四-O-乙酰基-α-D-吡喃半乳糖氧基)苯甲酸甲酯的甲醇(210ml)溶液中加入10％披钯炭(0.70g)，在1气压的氢气气氛下于室温进行催化还原。18小时后过滤反应液，除去催化剂，浓缩有机层。用柱色谱法(Wako gel(注册商标)C-200(和光纯药株式会社制)，正己烷∶乙酸乙酯＝3∶1～3∶2)对浓缩物进行精制，获得5-氨基-2-(2’，3’，4’，6’-四-O-乙酰基-α-D-吡喃半乳糖氧基)苯甲酸甲酯5.73g。
工序3-2 5-氨基-2-(α-D-吡喃半乳糖氧基)苯甲酸甲酯在5.52g工序3-1获得的5-氨基-2-(2’，3’，4’，6’-四-O-乙酰基-α-D-吡喃半乳糖氧基)苯甲酸甲酯的无水四氢呋喃-无水甲醇(1∶1，110ml)溶液中加入碳酸钾(307mg)，室温下搅拌15小时。减压浓缩反应液，浓缩物用柱色谱法(Wakogel(注册商标)C-200(和光纯药株式会社制)，氯仿∶甲醇＝10∶1～5∶1)精制，获得5-氨基-2-(α-D-吡喃半乳糖氧基)苯甲酸甲酯2.71g。
工序4 5-氨基-2-(α-D-吡喃半乳糖氧基)苯甲酸在2.00g工序3-2获得的5-氨基-2-(α-D-吡喃半乳糖氧基)苯甲酸甲酯的水(40ml)悬浮液中滴加1N氢氧化钠水溶液(6.07ml)，于50℃搅拌2小时。过滤反应液除去不溶物，在滤液中加入1N盐酸(6.07ml)进行中和。减压浓缩反应液，获得1.34g目标化合物。
微黄色粉末MS(FAB)m/z＝316[M+1]+旋光度[α]D20＝79.37(C＝1.28，H2O)元素分析值(以C13H17NO8·0.8H2O计)计算值(％)C47.36，H5.69，N4.25实测值(％)C47.20，H5.48，N4.221H NMR(D2O)3.70～4.10(m，6H，H-2～6)，5.76(d，1H，J1，2＝3.6Hz，H-1)，7.37～7.40(m，3H，Ph)参考例1 5-氨基-2-(β-D-吡喃葡糖氧基)苯甲酸工序1 5-硝基水杨酸甲酯采用与实施例1的工序1同样的方法合成。
工序25-硝基-2-(2’，3’，4’，6’-四-O-乙酰基-β-D-吡喃葡糖氧基)苯甲酸甲酯在6.0g工序1获得的5-硝基水杨酸甲酯和18.8g的溴化2’，3’，4’，6’-四-O-乙酰基-α-D-吡喃葡糖的喹啉(60ml)溶液中加入氧化银(10.5g)，室温下剧烈搅拌1小时。用乙酸乙酯(300ml)稀释反应混合物后用硅藻土过滤。用2N盐酸(2ml)洗涤乙酸乙酯层后，用乙酸乙酯(300ml)对水层萃取2次。用饱和碳酸氢钠水溶液、水和饱和食盐水洗涤合并的有机层后，用硫酸钠干燥，再过滤，浓缩溶剂，获得5-硝基-2-(2’，3’，4’，6’-四-O-乙酰基-β-D-吡喃葡糖氧基)苯甲酸甲酯15.63g。
工序3-1 5-氨基-2-(2’，3’，4’，6’-四-O-乙酰基-β-D-吡喃葡糖氧基)苯甲酸甲酯在12.0g工序2获得的5-硝基-2-(2’，3’，4’，6’-四-O-乙酰基-β-D-吡喃葡糖氧基)苯甲酸甲酯的甲醇(400ml)悬浮液中加入10％披钯炭(2.4g)，在30℃、3atm的氢气气氛下进行催化还原反应。3小时后用硅藻土过滤反应液。浓缩溶剂，获得5-氨基-2-(2’，3’，4’，6’-四-O-乙酰基-β-D-吡喃葡糖氧基)苯甲酸甲酯11.2g。
工序3-2 5-氨基-2-(β-D-吡喃葡糖氧基)苯甲酸甲酯在0.68g工序3-1获得的5-氨基-2-(2’，3’，4’，6’-四-O-乙酰基-β-D-吡喃葡糖氧基)苯甲酸甲酯的无水四氢呋喃-甲醇(1∶1，16ml)溶液中加入碳酸钾(37.8mg)，于室温彻夜搅拌。在反应液中滴加4N氯化氢乙酸乙酯溶液(0.14ml)，直接浓缩溶剂。所得粗制品用硅胶柱色谱法(Wako gel(注册商标)C-200(和光纯药株式会社制)，二氯甲烷∶甲醇＝10∶1～8∶1～5∶1)精制，获得5-氨基-2-(β-D-吡喃葡糖氧基)苯甲酸甲酯332mg。
工序4 5-氨基-2-(β-D-吡喃葡糖氧基)苯甲酸在100mg工序3-2获得的5-氨基-2-(β-D-吡喃葡糖氧基)苯甲酸甲酯的甲醇(3ml)悬浮液中滴加1N氢氧化钠水溶液(0.3ml)，于50℃进行搅拌。5小时后将温度返回至室温，减压蒸除溶剂。将所得油状残渣溶于1ml水中，冰冷下一边搅拌一边滴加1N盐酸(0.3ml)。对该溶液进行浓缩直至其约1/3的量，滤取析出物，获得93mg目标化合物。
元素分析值(以C13H17NO8·0.2H2O计)计算值(％)C48.97，H5.50，N4.39
实测值(％)C48.80，H5.35，N4.31试验例1血浆中的5-ASA浓度的测定对7周龄的SD系雄性大鼠静脉注射作为被验药物的5-ASA，并以换算成5-ASA为50mg/kg的量将化合物[1]、化合物[2]、化合物[3]及Pentasa(注册商标)口服给药，用高效液相色谱法(HPLC)测定血浆中的5-ASA浓度。Pentasa(注册商标)使用将Pentasa(注册商标)片剂粉碎后获得的颗粒物。
结果示于表1。
表1基于大鼠的血浆中的5-ASA的药动学参数值

n＝2～31)(各被验化合物口服后的AUC÷静脉注射5-ASA后的AUC)×(5-ASA的静脉给药量÷各被验化合物的口服给药量)×100从上述结果可知，口服Pentasa(注册商标)时，血浆中的5-ASA以较高浓度被检出(参照图1)。本试验例的结果显示，在作为吸收部位的小肠上部，有一部分服下的Pentasa释放出5-ASA。
另一方面，口服作为5-ASA糖衍生物的化合物[1]、化合物[2]及化合物[3]时，血浆中的5-ASA浓度与Pentasa(注册商标)相比有所降低(参照图1)。此外，服用化合物[1]及化合物[2]时，血浆中的5-ASA浓度低于服用化合物[3]时的该浓度，几乎未检测出5-ASA(参照图1)。口服化合物[1]、化合物[2]、化合物[3]及Pentasa(注册商标)时的生物利用度(参照表1)分别算出为2％、0.8％、6％及15％。即，确认化合物[1]、化合物[2]及化合物[3]与Pentasa相比，来自消化管的吸收率低。特别是化合物[1]和化合物[2]，它们是生物利用度明显低的化合物。
其原因是化合物[1]和化合物[2]与化合物[3]相比，在胃及小肠中难被水解，在胃及小肠上部未生成5-ASA。
试验例2消化管内容物中的5-ASA浓度变化给7周龄的SD系雄性大鼠以换算成5-ASA为50mg/kg的量口服作为被验药物的化合物[1]、Pentasa(注册商标)及5-ASA，对盲肠、近端结肠、远端结肠及直肠内的内容物进行匀浆处理，离心分离后取用其上清部分，利用高效液相色谱法(HPLC)测定大肠各部位中的5-ASA量。Pentasa(注册商标)使用将Pentasa(注册商标)片剂粉碎后获得的颗粒物。
结果示于图2～图5。
大肠各部位的5-ASA量在给予化合物[1]时达到最高(参照图2、3、4、5).
此外，同样作为被验药物以换算成5-ASA为50mg/kg的量口服化合物[2]及Pentasa(注册商标)，对结肠及直肠进行匀浆处理，离心分离后取用其上清部分，利用高效液相色谱法(HPLC)测定结肠组织中及直肠组织中的5-ASA浓度。Pentasa(注册商标)使用将Pentasa(注册商标)片剂粉碎后获得的颗粒物。
结果示于图6及图7。
化合物[2]与Pentasa(注册商标)相比，结肠组织中及直肠组织中的5-ASA浓度高(参照图6和图7)。
由试验例1确认，化合物[1]和化合物[2]在胃及小肠中难被水解，在胃及小肠上部未生成5-ASA，来自消化管的吸收率低。
由试验例2的结果明确，化合物[1]和化合物[2]到达作为病灶部位的大肠，被肠道细菌代谢为5-ASA。特别是化合物[1]，在大肠各部位都检测出对溃疡性结肠炎的治疗有效的5-ASA。
试验例3大鼠的三硝基苯磺酸(以下称为“TNBS”)诱发的结肠炎模型中的化合物[1]的有效性的研究对于绝食24小时的雌性SD大鼠，在戊巴比妥麻醉下采用口服用探针给予TNBS/50％乙醇水溶液(30mg/0.25ml/大鼠)至距离肛门8cm的大肠内，引发结肠炎。给予TNBS 3天后摘除大肠，在测定自肛门起8cm的大肠的湿重的同时，按照Wallace等(Gastroenterology，96，p.29-36(1989))的方法对结肠炎症的程度进行评分。1天2次(在给予TNBS这天，仅在给予TNBS前4小时给药1次)口服给药作为被验化合物的Pentasa(注册商标)30、100mg/kg，化合物[1]61.8、205.9mg/kg(以5-ASA换算相当于30、100mg/kg)。Pentasa(注册商标)使用将Pentasa(注册商标)片剂粉碎后获得的颗粒物。
结果示于图8和图9。
化合物[1]的用量为61.8mg/kg(换算为5-ASA相当于30mg/kg)时，损伤评分得到显著抑制，其用量为205.9mg/kg(换算为5-ASA相当于100mg/kg)时，大肠湿重得到显著抑制(参照图8、图9)。另一方面，Pentasa(注册商标)对于损伤评分及大肠湿重均未显现明显的作用。
制剂例1散剂(内服剂)处方1剂700mg中化合物[1]500mg玉米淀粉 127mg结晶纤维素 35mg聚乙烯醇 35mg硬脂酸镁 3mg在流化床造粒干燥机中投入250g化合物[1]、63.5g玉米淀粉和17.5g结晶纤维素，喷雾聚乙烯醇的10％水溶液(175ml)造粒。在其中加入硬脂酸镁(0.4％(w/w))，获得700mg中含本化合物500mg的散剂。
制剂例2片剂(内服剂)处方1剂600mg中化合物[1] 400mg玉米淀粉153mg结晶纤维素 42mg硬脂酸镁5mg用干式造粒机压缩400g化合物[1]、153g玉米淀粉和42g结晶纤维素的混合粉末后，粉碎成颗粒状。在其中加入硬脂酸镁(0.8％(w/w))，成形为1片重量600mg、片径11mm的片剂，获得含本化合物400mg的片剂。
制剂例3胶囊剂(内服剂)处方1剂500mg中化合物[1]250mg无水磷酸氢钙 222.5mg交联羧甲基纤维素钠 25mg硬脂酸镁 2.5mg用干式造粒机压缩250g化合物[1]、222.5g无水磷酸氢钙和25g交联羧甲基纤维素钠的混合粉末后，粉碎成颗粒状。在其中加入硬脂酸镁(0.5％(w/w))，在0号硬胶囊中填入500mg混合物，获得含本化合物250mg的胶囊剂。
制剂例4圆柱状颗粒(内服剂)处方1剂1000mg中化合物[1]750mg玉米淀粉 170mg结晶纤维素 50mg聚乙烯醇 30mg在捏合机中投入375g化合物[1]、85g玉米淀粉、25g结晶纤维素，加入聚乙烯醇的12％水溶液(125ml)捏合后，用装有直径0.7mm的滤网的颗粒挤压成形机进行挤压成形。将其干燥后造粒，获得1000mg中含有本化合物750mg的颗粒剂。
制剂例5球形包衣颗粒(内服剂)处方1剂1000mg中Nonpareil200mg化合物[1]500mg玉米淀粉 170mg低取代度羟丙基纤维素 40mg羟丙基纤维素 50mg羟丙基甲基纤维素 30mg丙二醇 6mg氧化钛 4mg在离心流化造粒包衣装置中投入200g的丸芯用糖丸(Nonpareil)(24～32号筛)，在喷雾羟丙基纤维素的8％水溶液(50％乙醇)的同时慢慢添加500g化合物[1]、170g玉米淀粉、40g低取代度羟丙基纤维素的混合粉末，造粒，干燥，获得约900g的球状素颗粒。
然后，将400g该球状素颗粒投入流化床造粒干燥机中，喷雾含有12.5g羟丙基甲基纤维素、2.5g丙二醇和1.7g氧化钛的水溶液(250ml)，获得1000mg中包含本混合物500mg的包衣颗粒。
产业上利用的可能性本发明化合物具备能够使对溃疡性结肠炎的治疗有效的5-ASA高效地到达作为作用部位的大肠、且5-ASA不会转移至血浆中的特征。即，能够减弱全身性副作用，且能够加大给药量直至获得最大治疗效果。

本发明的目的是提供使作为溃疡性结肠炎治疗剂有用的5－氨基水杨酸(5－ASA)在胃和小肠上部几乎不被吸收或代谢，能够有效地到达作为病灶部位的大肠，安全的、可长期给药的溃疡性结肠炎治疗剂。本发明涉及以下的通式[1]表示的导入了D－半乳糖的5－ASA。本发明化合物能够有效地到达作为作用部位的大肠，可被肠道菌群分解而在大肠内生成作为活性本体的5－ASA。

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