专利名称：金银花微生物菌种制作及栽培方法 金银花又名银花、二花、忍冬、双苞花等。属多年生常绿、半常绿木质藤本药用植物。其未放开的干燥花蕾入药称为金银花。金银花微生物腐生于老龄金银花墩根系土壤与枯木质藤本相连处，系天然野生真菌类植物，是天然的广谱抗菌素植物，长期以来它被人们当作是治疗咽喉肿痛、湿病发热、关节疼痛、祛暑等症状的良药。该微生物除医疗作用外，还具有养颜保健功效，是微生物真菌类中的佳品。但由于金银花微生物属天然野生，其成因条件非常苛刻，而且大多都生长在小气候环境比较隐蔽湿润之处，主要生长在坡度陡峭、沟壑纵深之处的老龄金银花墩上，不易被人们发现采集，故较为珍稀，很难满足人们社会生活的需求，而且目前尚无人对其进行人工驯化和繁殖培育。
本发明的目的在于提供一种从采集天然野生微生物种开始，经人工进行科学分离驯化提纯，直至进行菌种分离与繁殖栽培的金银花微生物菌种制作及栽培方法。本发明的目的是通过如下技术方案实现的首先从金银花墩上生长的微生物菌的基质上或子实体上获得菌种，然后移入试管培养基上培养，当菌丝长满整个培养基斜面后，将其分成30份分别放入试管培养基上扩大培养，当菌丝再次长满整个培养基斜面后，再将每一试管菌种分成20份分别放入装有培养料的塑料袋内进行栽培。栽培时，菌种与培养料的重量比为10～15∶100，栽培环境温度在24℃左右，湿度80～90％，菌丝达到生理成熟时将包在培养料外的塑料袋揭开继续培养，当子实体的子实层面由白色渐变为淡黄褐色时即可进行采收。金银花微生物菌种可以采用子实体分离、菌木分离和孢子分离三种方法获得。子实体分离是将精心选取天然野生性形态完整、肥厚结实、水分少、无病虫害的子实体切取一小块组织，把它接种到适宜的培养基上，适温(27℃)培养，从中得到纯度较高的菌丝体；菌木分离的方法是选取天然野生老龄金银花微生物子实体生长良好、没有其他木腐菌混生、被子实体柄基凹陷包围的木质藤本，剪取含菌丝密集的菌木一块，把它接种到适宜的培养基上适温(27℃)培养，从中得到纯度较高的菌丝体；孢子分离是将从子实体层中弹射出来的孢子放在适宜的培养基上适温(25℃)培养，使其萌发、生长成菌丝体，从而得到纯度较高的金银花微生物菌种。培养基按如下比例配制而成，各成分的重量比例为马铃薯200g、葡萄糖10g、硫酸镁0.5g、磷酸二氢钾1g、琼脂20g、水1000ml。培养料主要由金银花木质藤木屑或阔叶树木屑、棉子壳，再适当的配以其他材料如麸皮、石膏粉、蔗糖、磷酸二氢钾、硫酸镁、黄豆粉制成。配方一木屑78％、麸皮20％、石膏粉1％、蔗糖1％；配方二棉子壳98％、磷酸二氢钾0.1％、硫酸镁0.05％、黄豆粉1％、石膏粉1％；配方三木屑35％、棉子壳35％、麸皮28％、黄豆粉1％、石膏粉1％。本发明从采集其天然野生微生物种开始，经人工进行科学分离驯化提纯，建立了一套完整有效的菌种分离与繁殖栽培体系，实现人工培育产业化，向社会提供更多优质的金银花微生物，以造福人类。首先按以下比例制备好培养基，即将去皮后的马铃薯200g切成薄片，加水约1000ml，加热煮沸，并保持微沸10-15分钟至薯片酥而不烂为止，然后用纱布过滤，再在滤液中加入琼脂20g再煮至琼脂全部溶解为止，然后再加入葡萄糖10g、硫酸镁0.5g、磷酸二氢钾1g，并用热水补足至总体积1000ml为止，搅拌均匀，分管试装，装量为试管高度的1/5，塞上棉塞放入灭菌锅中，在0.1mpa条件下灭菌半小时，待棉塞表面水分蒸发干后趁热取出培养基试管，并将其斜置，待其冷却、凝结并放置2-3天后即可使用。然后从金银花墩上生长的微生物菌的基质上或子实体上用无菌操作方法获得菌种，然后移入试管培养基上培养，当菌丝长满整个培养基斜面后，将其分成30份分别放入试管培养基上扩大培养。试管最好放置在无强光照射、空气流通、含氧量在21％左右、空气相对湿度为60～80％、温度为22～24℃的环境中。当菌丝长满整个培养斜面(约30天)后，再将每一试管菌种分成20份分别放入装有培养料的塑料袋内进行栽培。栽培季节最好选择在谷雨、霜降时节。栽培时，菌种与培养料的重量比为10～15∶100，栽培环境温度最好在24℃左右，湿度80～90％，空气要流通，氧气要充足。培养40天左右，菌丝已达生理成熟，可将包在培养料外的塑料袋揭开，使其能暴露在空气中，并放置在14～18℃的环境中继续培养，约两周左右，子实体便可形成。当子实体的子实层面由白色渐变为淡黄褐色时即可进行采收。培养料主要由金银花木质藤屑或阔叶树木屑、棉子壳，再适当配以其他材料如麸皮、石膏粉、蔗糖、磷酸二氢钾、硫酸镁、黄豆粉制成，其配方如下配方1木屑78％、麸皮20％、石膏粉1％、蔗糖1％；配方2棉子壳98％、磷酸二氢钾0.1％、硫酸镁0.05％、黄豆粉1％、石膏粉1％；配方3木屑35％、棉子壳35％、麸皮28％、黄豆粉1％、石膏粉1％。
实施例1精心选取天然野生性形成完整、肥厚结实、水分少、无病虫害的子实体，用解剖刀切取子实体边缘稍内部长势旺盛、新生力强的菌块，挑取黄豆粒大小菌髓中的少许菌丝，然后再用镊子将其移入试管培养基上，将试管斜面向下，用黑色或灰色硬纸制成与试管粗细相适应的套袋将其套上，再放于22～26℃左右条件下培养，5～7天后组织上可长出菌丝，去掉有杂菌感染的菌丝后继续培养，直至菌丝基本长满培养基斜面，即可挑取米粒大小(约斜面的1/30)接种块移植到另一新的培养基上，置于22～26℃条件下培养，两周左右即可长满整个试管斜面，然后再将其分成20份分别放入装有培养料的塑料袋内进行栽培。
实施例2选取天然野生老龄金银花微生物子实体生长良好、没有其他木腐菌混生、被子实体柄基凹陷包围的木质藤本，用剪枝刀剪取含菌丝密集的菌木一块，并剔除外层较脏部分，然后移入已灭菌的接种箱，用酒精灯灼烧5-10秒钟，烧掉菌木表面杂菌，再将菌木做成木针状，用镊子将中间部分移入有培养基的试管中，再塞好棉塞，放于22～26℃条件下培养3～4天，此时菌木上即长出菌丝，继续培养7-8天后，取米粒大小健康菌丝移入另一新的培养基上，再放于22～26℃的环境下培养两周左右就可以长满整个试管斜面，然后将其分成20份分别放入装有培养料的塑料袋内进行栽培。
实施例3采集野生金银花微生物菌体个大、肉质肥厚、外光泽内密实、无病虫害、已经成熟且开始散发孢子的子实体，置于接种箱内，放在搪瓷器皿上，再用经灭菌的纱布将其盖上，然后移于培养室在18～22℃条件下培养，1～2天后孢子会散落在下面的搪瓷器皿上，然后将孢子连同器皿一起移到接种箱内，用接种针沾取孢子，接在试管培养基上并轻轻划动使孢子均匀分布于培养基上，在22～26℃条件下培养，直至孢子萌发长成菌丝。剔除不健康菌丝。然后放于24℃条件下继续培养，直至长满试管后，再扩大培养。


本发明通过子实体分离、菌木分离和孢子分离三种方法从金银花墩上生长的微生物菌的基质上或子实体上获得菌种，然后移入试管培养基上培养，以得到更多的菌种，然后放入装有培养料的塑料袋中进行栽培。当子实体的子实层面由白色渐变为淡黄褐色时进行采收。本发明建立了一套完整有效的菌种分离与繁殖栽培体系，实现人工培育产业化，可向社会提供更多优质的金银花微生物造福人类。