多功能试剂盒的制作方法 【技术领域】，尤其涉及一种多功能试剂盒。 [0002]在生物化学领域，均需要采用多种不同的试剂对生物材料进行检测等操作，操作人员需要事先集中准备各种试剂、试剂管以及其他辅助工具(例如PCR管)，然后才能进行检测试验。为了方便操作人员进行检测试验，本领域设计了许多试剂盒，将多种需要的试剂装于试剂管中，这些试剂管预先集中放置于试剂盒内，统一管理和使用。但是，在现有技术中，装有试剂的试剂管仅仅是简单无序地放置于一个盒体内，这样，并不能适用于试剂管数量较多的情形，当试剂管数量较多的时候，则容易混淆试剂，导致试验容易出现误差，降低检测效率，而且试剂管之间也容易相互干扰和影响，进一步降低了检测数据的准确度。显然，对于一些对试验精度要求比较高的试验，以及试剂使用种类较多的试验，现有的试剂盒根本无法满足其要求:例如检测T细胞受体β链的V-J重排和T细胞受体β链CDR3的编码序列的试验。此外，操作人员在准备好试剂盒后，还需要另外准备其他辅助工具(例如PCR管)，这样，使得检测试验前的准备工作过度繁琐，影响工作效率。 [0003]免疫系统是机体抵御病原菌入侵与免疫调节的重要系统，对其进行研究有很重要的意义。免疫球蛋白、T细胞受体(TCR)和HLA(人类白细胞抗原)是人类基因组中最活跃的免疫大分子，决定和反映了人和环境的相互作用。免疫大分子的多样性使得机体能识别无数的外来物质和清除体内产生的部分代谢物。免疫大分子多样性产生的机制主要有基因重排、体细胞突变、非模板核苷酸的插入与缺失等。其中，T细胞受体的多样性主要是通过人外周血T细胞主要表达的T细胞受体的α链和β链的重排引起的，而T细胞受体β链重排引起的T细胞受体β链CDR3编码序列的多样性能较好地代表T细胞受体的多样性甚至个人的免疫状态，因此，对T细胞受体β链CDR3编码序列进行研究具有重大意义。可见，设计一种可用于检测T细胞受体β链的V-J重排和T细胞受体β链CDR3的编码序列的试剂盒是非常有必要的。 实用新型内容 [0004]本实用新型的目的在于克服现有技术之缺陷，提供了一种易于管理和转移、有效提高检测试验准确度和效率的多功能试剂盒。
[0005]本实用新型是这样实现的，一种多功能试剂盒，用于检测T细胞受体β链的V-J重排和T细胞受体β链⑶R3的编码序列，其包括:
[0006]用于识别T细胞受体β链家族中V基因片段并引导进行聚合酶链式反应的第一引物试剂管组，其包括至少一支装有引物的第一引物试剂管；
[0007]用于识别T细胞受体β链家族中J基因片段并引导进行聚合酶链式反应的第二引物试剂管组，其包括至少一支装有引物的第二引物试剂管；
[0008]用于进行PCR扩增的PCR管组，其包括至少一支PCR管；
[0009]用于存放所述第一引物试剂管组、所述第二引物试剂管组及所述PCR管组的盒体，所述盒体设有第一盒腔及第二盒腔；
[0010]用于将所述第一引物试剂管组及所述第二引物试剂管组固定设置于所述第一盒腔内的第一固定架；以及
[0011]用于将所述PCR管组固定设置于所述第二盒腔内的第二固定架；
[0012]所述第一引物试剂管组、所述第二引物试剂管组及所述第一固定架均设于所述第一盒腔内，所述PCR管组及所述第二固定架均设于所述第二盒腔内。
[0013]进一步地，所述第一引物试剂管组包括至少一支装有与V基因片段互补的序列的所述第一引物试剂管；所述第二引物试剂管组包括至少一支装有与J基因片段互补的序列的所述第二引物试剂管。
[0014]进一步地，所述第一引物试剂管组包括至少一支装有正义链引物的所述第一引物试剂管；所述第二引物试剂管组包括至少一支装有反义链引物的所述第二引物试剂管。
[0015]进一步地，所述第一引物试剂管组包括至少一支装有与V基因片段的保守区互补的序列的所述第一引物试剂管；所述第二引物试剂管组包括至少一支装有与J基因片段的保守区互补的序列的所述第二引物试剂管。
[0016]更进一步地，所述第一引物试剂管及所述第二引物试剂管均包括第一管体及第一管盖，所述第一管体呈圆筒状且其上端开设有第一管口，所述第一管盖盖合于所述第一管口上。
[0017]具体地，所述第一固定架包括一第一载板及若干管套，所述第一载板上设有若干个与所述第一管体适配的第一固定孔，所述管套具有容所述第一管体插入的内腔且其上端设有与所述第一固定孔对应的端口，所述管套设于所述第一载板的下表面上且其端口与所述第一固定孔对应，所述第一管体穿过所述第一固定孔并插设于所述管套内。
[0018]优选地，所述PCR管包括第二管体、第二管盖以及用于连接所述第二管盖与所述第二管体的连接臂；所述第二管体的上半段呈圆筒状，其下半段呈倒圆锥筒状，所述第二管体的上端开设有第二管口，所述第二管盖盖合于所述第二管口上。
[0019]具体地，所述第二固定架包括一第二载板，所述第二载板上设有若干个与所述第二管体的上半段适配的第二固定孔，所述第二管体插设于所述第二固定孔内。
[0020]进一步地，所述第一盒腔内设有用于固定所述第一固定架的第一卡固结构；所述第二盒腔内设有用于固定所述第二固定架的第二卡固结构。
[0021]更进一步地，所述多功能试剂盒还包括盒盖，所述盒盖盖合于所述盒体上。
[0022]本实用新型所提供的多功能试剂盒具有以下技术效果:
[0023]本实用新型通过将引物试剂管组及PCR管组集中放置于一个盒体内，对它们进行集中管理，操作人员既可以单独使用已装有引物的试剂管组进行检测试验，又可以结合或单独使用PCR管组进行检测试验，从而达到一个试剂盒实现多种功能的效果。进一步地，第一引物试剂管组及第二引物试剂管组通过第一固定架集中放置于第一盒腔内，PCR管组通过第二固定架集中放置于第二盒腔内，这样，除了可以将引物试剂管组和PCR管组区分管理之外，还可以方便操作人员批量整取整放引物试剂管组和/或PCR管组，便于对它们的更换和转移。




[0024]图1为本实用新型实施例中多功能试剂盒的立体示意图，其中，盒盖处于开启状态；
[0025]图2为本实用新型实施例中第一引物试剂管的立体示意图；
[0026]图3为本实用新型实施例中第一引物试剂管的另一立体示意图，其中，第一管盖为局部剖视图；
[0027]图4为本实用新型实施例中PCR管的立体示意图，其中，第二管盖处于开启状态；
[0028]图5为本实用新型实施例中PCR管的另一立体示意图，其中，第二管盖处于闭合状态；
[0029]图6为本实用新型实施例中第一固定架的立体示意图；
[0030]图7为本实用新型实施例中第二固定架的立体示意图，其上插设有若干PCR管；
[0031]图8为本实用新型实施例中盒体的立体示意图；
[0032]图9为图8中I的局部放大图。


[0033]为了使本实用新型的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本实用新型进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本实用新型，并不用于限定本实用新型。
[0034]本实用新型基于以下原理:假设有一种引物组合物，该引物组合物包括第一引物组和第二引物组。其中，第一引物组由至少一种V区引物组成，第二引物组由至少一种J区引物组成。在本文中，术语“V区引物”指的是这样的一种引物，其能够特异性地识别T细胞受体β链家族中的V基因片段，从而可以引导进行聚合酶链式反应，由此第一引物组中所包含的V区引物的每一种均包含与至少一个V基因片段互补的序列。术语“J区引物”指的是这样的一种引物，其能够特异性地识别T细胞受体β链家族中的J基因片段，从而可以引导进行聚合酶链式反应，由此第二引物组中所包含的J区引物的每一种均包含与至少一个J基因片段互补的序列。在V区引物和J区引物的引导下，可以通过扩增反应例如PCR扩增，从含有T细胞受体β链CDR3编码序列的核酸样本中特异性地扩增包含V基因片段和J基因片段的编码序列。由于T细胞受体β链的CDR3是由V、D、J基因片段重排产物所编码的，因而通过特异性识别V基因片段和J基因片段的引物，即第一引物组和第二引物组，能够有效地从包含⑶R3编码序列的核酸样本中扩增获得⑶R3编码序列的扩增产物，在T细胞受体β链中，CDR3是V-D-J重排的产物，因而通过采用上述引物组合物，能够高特异性地从样本中扩增富集获得CDR3的编码序列，而不会存在其他的干扰序列。从而能够实现对T细胞受体β链CDR3编码序列的有效富集，进而为针对T细胞受体β链CDR3进行深入研究提供了便利的工具。也就是说，上述引物组合物可用于检测T细胞受体β链的V-J重排，可用于检测T细胞受体β链⑶R3的编码序列。
[0035]需要说明的是，在本文中所涉及的生物化学知识均可在相关领域查阅获得，本文仅复述较为重要和相关的知识，其余相关知识不再赘述。
[0036]参见图1，基于上述原理，本实用新型实施例提供了一种多功能试剂盒，用于检测T细胞受体β链的V-J重排和T细胞受体β链⑶R3的编码序列，其包括:
[0037]用于识别T细胞受体β链家族中V基因片段并引导进行聚合酶链式反应的第一引物试剂管组1，其包括至少一支装有引物的第一引物试剂管11 ；
[0038]用于识别T细胞受体β链家族中J基因片段并引导进行聚合酶链式反应的第二引物试剂管组2，其包括至少一支装有引物的第二引物试剂管21 ；
[0039]用于进行PCR扩增的PCR管组3，其包括至少一支PCR管31 ;
[0040]用于存放所述第一引物试剂管组1、所述第二引物试剂管组2及所述PCR管组3的盒体4，所述盒体4设有第一盒腔41及第二盒腔42 (参见图8);
[0041]用于将所述第一引物试剂管组I及所述第二引物试剂管组2固定设置于所述第一盒腔41内的第一固定架5;以及
[0042]用于将所述PCR管组3固定设置于所述第二盒腔42内的第二固定架6 ；
[0043]所述第一引物试剂管组1、所述第二引物试剂管组2及所述第一固定架5均设于所述第一盒腔41内，所述PCR管组3及所述第二固定架6均设于所述第二盒腔42内。
[0044]上述术语“PCR”为“Polymerase Chain React1n”的缩写简称,其中文全称为“聚合酶链锁反应”。
[0045]本实用新型通过将引物试剂管组及PCR管组3集中放置于一个盒体4内，对它们进行集中管理，操作人员既可以单独使用已装有引物的试剂管组进行检测试验，又可以结合或单独使用PCR管组进行检测试验，从而达到一个试剂盒实现多种功能的效果。进一步地，第一引物试剂管组I及第二引物试剂管组2通过第一固定架5集中放置于第一盒腔41内，PCR管组3通过第二固定架6集中放置于第二盒腔42内，这样，除了可以将引物试剂管组和PCR管组区分管理之外，还可以方便操作人员批量整取整放引物试剂管组和/或PCR管组，便于对它们的更换和转移。
[0046]本实施例中的盒体4设置了两个盒腔，但是制造时可以根据实际需要，设置多个盒腔，本实用新型的保护范围并不限于两个。
[0047]具体地，所述第一引物试剂管组I包括至少一支装有与V基因片段互补的序列的所述第一引物试剂管11 ;所述第二引物试剂管组2包括至少一支装有与J基因片段互补的序列的所述第二引物试剂管21。
[0048]作为本实用新型的一种优选实施方式，所述第一引物试剂管组I包括至少一支装有正义链引物的所述第一引物试剂管11 ;所述第二引物试剂管组2包括至少一支装有反义链引物的所述第二引物试剂管21。经试验发现，上述引物能够进一步提高将引物组合物用于富集T细胞受体β链CDR3编码序列时的富集效率。试剂盒通过增设上述引物的试剂管，可有效提闻检测的效率，扩大适用范围。
[0049]作为本实用新型的另一种优选实施方式，所述第一引物试剂管组I包括至少一支装有与V基因片段的保守区互补的序列的所述第一引物试剂管11 ;所述第二引物试剂管组2包括至少一支装有与J基因片段的保守区互补的序列的所述第二引物试剂管21。第一引物试剂管11内的试剂可以在减少引物的数量的同时，提高对T细胞受体β链CDR3编码序列进行富集的效率，提高各CDR3编码序列扩增的均一性，从而能够真实地反映CDR3编码序列在宿主中的分布比例。第二引物试剂管组2内的试剂可以在减少引物的数量的同时，提高对T细胞受体β链CDR3编码序列进行富集的效率，提高各CDR3编码序列扩增的均一性，从而能够真实地反映⑶R3编码序列在宿主中的分布比例。因此，试剂盒通过增设上述引物的试剂管，可有效提高检测的效率，扩大适用范围。
[0050]参见图2与图3，图2及图3所示均为第一引物试剂管11的示意图，然而，作为本实用新型的一种实施方式，在本实施例中，第二引物试剂管21与第一引物试剂管11的结构完全相同，因此，在附图中不再另外示出第二引物试剂管21的示意图，第二引物试剂管21的结构示意图可以参考图2与图3:所述第一引物试剂管11及所述第二引物试剂管21均包括第一管体111及第一管盖112，所述第一管体111呈圆筒状且其上端开设有第一管口1111，所述第一管盖112盖合于所述第一管口 1111上。本实用新型所提及的引物均装于第一管体111的管腔内。本实用新型还可通过为第一管盖112设置不同的颜色，进一步加强识别的效果。第一管盖112与第一管体111之间可以通过螺纹的形式接合，也可以通过卡扣等其他形式接合，图3所示为螺纹接合，以螺纹连接的形式接合第一管盖112与第一管体111，能够保证试剂管的密封性，使试剂不溢出、不易受污染、不易变质。
[0051]参见图6，所述第一固定架5包括一第一载板51及若干管套52，所述第一载板51上设有若干个与所述第一管体111适配的第一固定孔511，所述管套52具有容所述第一管体111插入的内腔且其上端设有与所述第一固定孔511对应的端口，所述管套52设于所述第一载板51的下表面上且其端口与所述第一固定孔511对应，所述第一管体111穿过所述第一固定孔511并插设于所述管套52内。管套52可用于保护每一支试剂管，使其即使受到强烈碰撞，也不至于受损，而且可以分隔相邻的试剂管，使它们之间不相互影响。另外，多个管套52设于同一块载板上，方便整体批量移动转移多个试剂管。值得说明的是，第一固定孔511、管套52及试剂管的数量可根据具体需要设置，而不以附图所示的为限。
[0052]参见图4与图5，所述PCR管31包括第二管体311、第二管盖312以及用于连接所述第二管盖312与所述第二管体311的连接臂313 ;所述第二管体311的上半段呈圆筒状，其下半段呈倒圆锥筒状，所述第二管体311的上端开设有第二管口 3111，所述第二管盖312盖合于所述第二管口 3111上。由第二管体311的形状可以理解，向其注入试剂后，位于下半段的试剂量较少，而且其横截面也由上至下逐渐减小；位于上半段的试剂量较多，其横截面不变。这样，当试剂量较少时，该PCR管31依然能够保证试剂的液位足够的高，以保证试验能够顺利进行。PCR管31装入试剂后，盖上第二管盖312，即可保证试剂不流出外界。该PCR管31符合检测T细胞受体β链的V-J重排和T细胞受体β链⑶R3的编码序列的要求。
[0053]参见图7，所述第二固定架6包括一第二载板61，所述第二载板61上设有若干个与所述第二管体311的上半段适配的第二固定孔611，所述第二管体311插设于所述第二固定孔611内。第二固定孔611及PCR管31的数量可根据需要设置，在本实施例中，PCR管31与第二载板61之间非一体成型，PCR管31可从第二载板61上抽离。当然，PCR管31与第二载板61之间可以一体成型，形成PCR管板。
[0054]参见图8，所述第一盒腔41内设有用于固定所述第一固定架5的第一^^固结构43 ;所述第二盒腔42内设有用于固定所述第二固定架6的第二卡固结构44。参见图9，在本实施例中，第一^^固结构43与第二卡固结构44的结构相同，它们均包括支撑块431及凸块432，凸块432位于支撑块431上方位置，支撑块431用于支撑第一固定架5或第二固定架6,凸块432用于防止第一固定架5或第二固定架6上下窜动,第一固定架5和第二固定架6的边缘夹置于支撑块431与凸块432之间。其中，凸块432呈半球体状，其形状可便于第一固定架5或第二固定架6卡入第一卡固结构43或第二卡固结构44中。上述卡固结构分别设于每一个盒腔的侧壁上。
[0055]参见图1，所述多功能试剂盒还包括盒盖7，所述盒盖7盖合于所述盒体4上。盒盖7与盒体4之间可以以分体的形式实现，也可以以铰接的形式实现，具体根据需要而定。
[0056]实际上，本实用新型所提供的多功能试剂盒不仅仅适用于T细胞受体β链的V-J重排的检测和T细胞受体β链CDR3的编码序列的检测，其还适用于其他类似的生化检测试验。
[0057]以上所述仅为本实用新型的较佳实施例而已，并不用以限制本实用新型，凡在本实用新型的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换或改进等，均应包含在本实用新型的保护范围之内。