专利名称：多肽在制备ace抑制剂及降血压药物中的应用的制作方法实施例1 多肽VYNEGLPAP的制备 采用凝胶色谱和LC-MS/MS相结合的方法，以中国抚顺清原马鹿鹿血 (Cen/t/se/ap/7t/s)为原料，经离心，丙酮沉淀，酶解蛋白及柱分离获得 乳白色粉末，溶于水。其具体的提取分离方法如下采用柱分离技术，用溶剂淋洗，凝胶层 析柱与LC-MS/MS相结合，可按如下步骤分离提取操作以清原马鹿鹿血 (Cen/us e/ap/ us)为原料，取10_100毫升血浆蛋白，用60—200毫升 的丙酮沉淀蛋白，弃上清，将沉淀离心，弃上清；将沉淀于40—100。C水浴， 挥发丙酮并使蛋白变性；加入等体积5 — 1000毫摩尔，PH8.0, NH4HC03 缓冲液，按1: 10—500 (质量比)加入蛋白酶，于30—10(TC水浴，搅拌 进行酶解1一12小时；50—100。C灭酶IO—IOO分钟；上述酶解产物经 SephadexG-25凝胶柱层析分离，将得到的不同组分冷冻干燥，为乳白色粉 末状产品。肽序列搜库将经SephadexG-25凝胶柱层析后得到的组分分别用LTQ (线性离子阱四级杆)进行质谱分析，离子源为ESI，得到的数据在 red.deer.fasta库中进行搜库检索，获得序列为 Val-Tyr-Asn-Glu-Gly-Leu-Pro-Ala-Pro的多月太。实施例2 多肽VYNEGLPAP的ACE抑制活性检测 ACE在37° C、 PH8.3的条件下催化分解血管紧张素I的模拟底物 Hippuryl-L-Histidyl-L-Leucine(HHL)产生马尿酸，该物质在228nm处有特征 紫外吸收峰。当加入ACE抑制物时，ACE对HHL的催化作用受到抑制， 马尿酸的生成量会减少。通过测定加入抑制剂前后的马尿酸紫外吸收值可 以计算出抑制活性的大小。反应体系缓冲液为 0.05M ， PH8.3 硼酸盐缓冲液；底物为 Hippuryl-L-Histidyl-L-Leucine(HHL)， MW 429.47,用上述缓冲液配成 5mM; ACE (angiotensin画converting enzyme)用上述缓冲液配成0.1U/ml。ODA (对照组，为不存在抑制剂但存在酶时的吸光值)50 Ul缓冲液 +50ulHHL+50lU缓冲液于37° C水浴5min，然后加入50tUACE， 37° C 水浴30min，加入200 y 1， 1M的HC1终止反应，再加入1ml乙酸乙酯萃取 产物马尿酸，振荡15S， 3500r/min离心5min，取0.8ml上清，卯° C水浴 干燥15min,重溶于0.8ml蒸馏水中，228nm处检测吸光值为ODA。ODB (样品组，为存在抑制剂和酶时的吸光值)50lU样品+50tUHHL+50 lU缓冲液于37。 C水浴5min，然后加入50ulACE， 37° C水浴30min， 加入200 u 1， 1M的HC1终止反应，再加入lml乙酸乙酯萃取产物马尿酸， 振荡15S， 3500r/min离心5min，取0.8ml上清，90。 C水浴干燥15min,重 溶于0.8ml蒸馏水中，228nm处检测吸光值为ODB。ODc (空白纟l，为不存在抑制剂和酶时的吸光值)50 lU缓冲液+50u lHHL+50ul缓冲液于37。 C水浴5min，然后加入50 " 1缓冲液，37° C水 浴30min，加入200ul， 1M的HC1终止反应，再加入lml乙酸乙酯萃取产 物马尿酸，振荡15S, 3500r/mhi离心5min，取0.8ml上清，90° C水浴干 燥15min,重溶于0.8ml蒸馏水中，228nm处检测吸光值为ODc。ACE抑制率(％) =(ODA—ODB)/(ODA—ODc) X100%分别用0.5mg/ml, 0.1mg/ml , O.Olmg/ml ， O.OOlmg/ml , 0.0001mg/ml的浓
度，按上述方法进行ACE抑制活性检测。结果如下表
浓度湖制率⑧
0.593.99
0.171.92
0.0149.88
O細34.92
O細l28.59
经IC5()计算器计算该序列的ICso为0.00298mg/ml，即3.1 u M。ACE抑制剂
SEQUENCE LISTING <110>中国科学院大连化学物理研究所 <120〉多肽在制备ACE抑制剂及降血压药物中的应用 <130〉 〈160〉 1
<170〉 Patentln version 3. 1
<210〉 1
<211> 9
<212〉 PRT
〈213> Cervus el即hus <220〉
<221> CONFLICT
<222〉 (1)..(9) <223〉
<400> 1
Vsl Tyr Asn Glu Gly Leu Pro Als Pro 1

本发明涉及抑制血管紧张素转换酶(angiotensin-converting enzyme，ACE)活性及降血压的一种多肽化合物VYNEGLPAP，其氨基酸序列分别为Val-Tyr-Asn-Glu-Gly-Leu-Pro-Ala-Pro。多肽VYNEGLPAP具有ACE抑制活性及降血压活性，作为高血压、心脏病和心血管病的保健品和药物先导化合物具有良好的应用前景。