适用于刺参的免提dna的pcr快速扩增方法 [0002] 刺参属低等海洋生物。常规的PCR技术是建立在成功提取刺参的高质量DNA为 前提的。目前,常用的方法就是剪取刺参肉刺,用新鲜样品进行DNA提取,之后在获得DNA 后再进行下一步的分子研究,如最常用的PCR。这一过程往往所要时间较长,从提取DNA到 完成PCR至少要半天时间,且DNA提取的过程所使用的常规药品如苯酚、氯仿、SDS对人体 和环境具有潜在的危害。因此,开发一种不需提取DNA的PCR技术,将具有很大的技术优势 和应用前景。
[0003] 本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的不足,提供一种新的、方法简单合 理、操作方便的适用于刺参的免提DNA的PCR快速扩增方法。 [0004] 本发明所要解决的技术问题是通过以下的技术方案来实现的。本发明是一种适用 于刺参的免提DNA的PCR快速扩增方法,其特点是,其步骤如下 : (1) 取体液:将刺参处死后用微量注射器肌肉内抽取体液〇.〇2-WL入20〇μ? PCR管中, 置于冰浴备用;当不能立即PCR时将其置-20°C下保存,1周内有效; (2) -步法PCR :以上述PCR管的体液为模板,进行25μ?体系下的PCR扩增: 25μ?体系: 体液 0.02-?μ? 2 X Taq PCR MasterMix 12. 5? 引物2μ?,上下游混合引物,浓度均为2. 5Mffl〇l/L ; CldH2O 补足至 25μ? 反应条件:普通PCR条件,扩增程序为:94 °C预变性4 min;94 °C变性40 s,50-60 °C 退火40 s,72 °C延伸40 s,共35个循环;72 °C延伸6 min, 4 °C保存; (3) PCR产物检测:按照常规的琼脂糖凝胶电泳检测。 [0005] 本发明所述的刺参免提DNA的PCR快速扩增方法,进一步地,在步骤(1)中,用于 取体液的刺参的个体重量优选在2g以上。在步骤(2)-步法PCR中,体液量优选为0. 2μ?。 在步骤(2)所述的引物优选自:
适用于刺参的免提dna的pcr快速扩增方法
- 专利详情
- 全文pdf
- 权力要求
- 说明书
- 法律状态
查看更多专利详情
下载专利文献
下载专利
同类推荐
-
J-C·F·奥顿内特杜笑寒王虹, 王 虹
您可能感兴趣的专利
-
张春庆, 温大兴长部雅己
专利相关信息
-
凯文·D·奈斯