氧化蛋白水解酶活性增强剂制作方法

八木雅之, 高桥朋子

2012年5月23日

2010年6月29日

2009年7月8日

爱科来株式会社

A61P25/00GK102470153SQ20108003078

水解酶 蛋白 活性 氧化 增强

1.氧化蛋白质水解酶活性增强剂，其特征在于，含有选自包括菊科春黄菊属、三白草科蕺菜属、蔷薇科山楂属和葡萄科葡萄属的组中的至少一种植物的提取物2.根据权利要求1所述的氧化蛋白质水解酶活性增强剂，含有菊科春黄菊属的植物的提取物、三白草科蕺菜属的植物的提取物、蔷薇科山楂属的植物的提取物以及葡萄科葡萄属的植物的提取物3.根据权利要求1或2所述的氧化蛋白质水解酶活性增强剂，含有菊科春黄菊属的植物的提取物和三白草科蕺菜属的植物的提取物中的至少一种提取物，以及蔷薇科山楂属的植物的提取物和葡萄科葡萄属的植物的提取物中的至少一种提取物4.根据权利要求1至3中任意一项所述的氧化蛋白质水解酶活性增强剂，其中，所述菊科春黄菊属的植物为罗马洋甘菊，所述三白草科蕺菜属的植物为鱼腥草，所述蔷薇科山楂属的植物为西洋山楂，所述葡萄科葡萄属的植物为葡萄5.氧化蛋白质水解酶活性增强方法，其特征在于，所述方法包括将根据权利要求1至 4中任意一项所述的氧化蛋白质水解酶活性增强剂添加到含有氧化蛋白质水解酶的试样中的步骤6.蛋白质分解促进方法，其特征在于，所述方法包括将权利要求1至4中任意一项所述的氧化蛋白质水解酶活性增强剂添加到含有蛋白质和氧化蛋白质水解酶的试样中的步骤，所述蛋白质包括氧化蛋白质和糖基化蛋白质中的至少一者7.治疗方法，其特征在于，将权利要求1至4中任意一项所述的氧化蛋白质水解酶活性增强剂施用给生物体，治疗由氧化蛋白质或者糖基化蛋白质的生成引起的疾病、组织的老化和组织的功能降低

本发明涉及氧化蛋白质水解酶(分解酵素)活性增强剂

本发明中，酶活性的增强，例如可以是指酶的活化和抑制失活中任何一者的意思 本发明中，上述OPH也称为酰基氨基酸释放酶(AARE)或者酰基肽水解酶(ACPH)如前所述，本发明的OPH活性增强剂的特征在于，含有选自包括菊科春黄菊属、三白草科蕺菜属、蔷薇科山楂属和葡萄科葡萄属的组的至少一种植物的提取物上述OPH活性增强剂可以含有前述植物中的例如一种的提取物，也可以含有两种以上的提取物上述 OPH活性增强剂可以含有例如菊科春黄菊属的植物的提取物和三白草科蕺菜属的植物的提取物中的至少一种提取物、蔷薇科山楂属的植物的提取物和葡萄科葡萄属的植物的提取物中的至少一种提取物上述OPH活性增强剂例如优选含有菊科春黄菊属的植物的提取物、三白草科蕺菜属的植物的提取物、蔷薇科山楂属的植物的提取物和葡萄科葡萄属的植物的提取物上述各提取物中，推定上述菊科春黄菊属的植物的提取物和三白草科蕺菜属的植物的提取物例如活化0ΡΗ，上述蔷薇科山楂属的植物的提取物和葡萄科葡萄属的植物的提取物例如抑制OPH的失活该推定并不限制本发明在上述OPH活性增强剂含有菊科春黄菊属的植物的提取物(A)、三白草科蕺菜属的植物的提取物(B)、蔷薇科山楂属的植物的提取物(C)和葡萄科葡萄属的植物的提取物 (D)的情况下，上述各提取物的调配比(干燥重量比、A B C D)不特别限制，例如优选 1 0.01 100 0.01 100 0.01 100上述菊科春黄菊属(Compositae Anthemis (Chamaemelum))的植物例如有罗马洋甘菊(Anthemis nobilis L^( = Chamaemelum nobile))等上述菊科春黄菊属的植物的提取物例如可以是花、花穗、果皮、果实、茎、叶、根茎、根皮、根和种子等中的任何的提取物， 可以是一个部位的提取物，也可以是两个以上的部位的提取物上述提取物可以是植物体全体的提取物上述菊科春黄菊属的植物的提取物中，提取部位没有特别限制，例如可以是花球(頭状花)的提取物上述三白草科蕺菜属(Saururaceae Houttuynia)的植物例如有鱼腥草 (Houttuynia cordata Thunberg)等上述三白草科蕺菜属的植物的提取物例如可以是花、 花穗、果皮、果实、茎、叶、根茎、根皮、根和种子等中的任何的提取物，可以是一个部位的提取物，也可以是两个以上的部位的提取物上述提取物可以是植物体全体的提取物上述三白草科蕺菜属的植物的提取物中，提取部位没有特别限制，例如可以是花、花穗、果皮、果实、茎、叶、枝、枝叶、干、树皮和种子等的地上部分的提取物上述蔷薇科山楂属(Rosaceae Crataegus)的植物例如可以是西洋山楂 (CrataeRUs oxyacantha k)、山楂(C. cuneata Sieb. et Zucc.)等上述蔷薇科山楂属的植物的提取物例如可以是花、花穗、果皮、果实、茎、叶、枝、枝叶、干、树皮、根茎、根皮、根和种子等中的任何的提取物，可以是一个部位的提取物，也可以是两种以上的部位的提取物 上述提取物可以是植物体全体的提取物上述蔷薇科山楂属的植物的提取物中，提取部位不特别限制，例如可以是果实的提取物上述葡萄科葡萄属(Vitaceae Vitis)的植物例如可以是葡萄(Vitis vinifera L^)、美洲葡萄(Vitis labrusca k)、甘蔓(V. saccharifera Makino)、桑叶葡萄 (V. ficifolia BunRe var. Iobata (ReRel) Nakai)、三角蔓(V. flexuosa Thunb.)、山葡萄 (V. coiRuetiae Pulliat)、欧美杂种葡萄(V. Iabruscana Bailey)等上述葡萄科葡萄属的植物的提取物例如可以是花、花穗、果皮、果实、茎、叶、枝、枝叶、干、树皮、根茎、根皮、根和种子等中的任何的提取物，可以是一个部位的提取物，也可以是两个以上的部位的提取物 上述提取物可以是植物体全体的提取物上述葡萄科葡萄属的植物的提取物中，提取部位没有特别限制，例如可以是叶的提取物本发明的OPH活性增强剂例如优选含有选自包括上述罗马洋甘菊、鱼腥草、西洋山楂和葡萄的组中的至少一种植物的提取物上述OPH活性增强剂可以含有前述植物中例如一种的提取物，也可以含有两种以上的提取物上述OPH活性增强剂例如可以含有上述罗马洋甘菊提取物和鱼腥草提取物中的至少一种提取物和上述西洋山楂提取物和葡萄提取物中的至少一种提取物上述OPH活性增强剂例如优选含有上述罗马洋甘菊提取物、鱼腥草提取物、西洋山楂提取物和葡萄提取物上述各提取物中，推定上述罗马洋甘菊提取物和鱼腥草提取物例如活化0ΡΗ，上述西洋山楂提取物和葡萄提取物例如抑制OPH的失活该推定并不限制本发明在上述OPH活性增强剂含有上述罗马洋甘菊提取物(a)、鱼腥草提取物(b)、西洋山楂提取物(c)和葡萄提取物(c)的情况下，上述各提取物的调配比(干燥重量比 a b c d)不特别限制，例如优选1 0.01 100 0. 01 100 0. 01 100本发明的OPH活性增强剂例如优选含有选自包括菊科春黄菊属的植物的花球、三白草科蕺菜属的植物的地上部分、蔷薇科山楂属的植物的果实和葡萄科葡萄属的植物的叶的组中的至少一种提取物上述OPH活性增强剂可以含有前述提取物中例如一种提取物， 也可以含有两种以上的提取物，也可以含有全部具体来说，上述OPH活性增强剂例如优选含有选自包括上述罗马洋甘菊的花球、鱼腥草的地上部分、西洋山楂的果实和葡萄的叶的组中的至少一种提取物上述OPH活性增强剂可以含有上述提取物中例如一种提取物，也可以含有两种以上的提取物，也可以含有全部在本发明中，上述提取物例如可以从前述的提取部位或者植物体全体获得上述提取物的提取方法没有特别限制，例如有溶剂提取法、压榨法等公知的方法上述溶剂提取法中使用的提取溶剂不特别限制，例如可以是水性溶剂、有机溶剂等上述水性溶剂不特别限制，例如有水等上述有机溶剂不特别限制，例如有低级醇、多元醇、酮、酯、醚、腈、芳香族化合物和烷基氯等上述低级醇不特别限制，例如有甲醇、乙醇和无水乙醇等上述多元醇不特别限制，例如有丙二醇和1，3_ 丁二醇等上述酮不特别限制，例如有丙酮和蚁酸等上述酯不特别限制，例如有乙酸乙酯等上述醚不特别限制，例如有二乙醚和二恶烷(7才*寸 > )等上述腈不特别限制，例如有乙腈等上述芳香族化合物不特别限制，例如有苯、甲苯和二甲苯等上述烷基氯不特别限制，例如有氯仿等上述提取溶剂例如可以是一种溶剂，也可以组合两种以上另外，上述提取溶剂例如可以是上述水性溶剂和上述有机溶剂的混合溶剂上述混合溶剂不特别限制，例如有乙醇水溶液等低级醇水溶液等上述混合溶剂中上述有机溶剂的比例不特别限制，例如是 1 99体积％上述溶剂提取法例如可以以前述的提取部位或植物体全体为原料，将其浸渍在上述提取溶剂中来实施上述原料例如可以在上述浸渍前进行洗涤、干燥和粉碎等处理在上述原料为两种以上的情况下，可以分别提取处理各原料，也可以提取处理两种以上的原料的混合物在前者的情况下，例如可以混合得到的各提取物作为混合提取物上述混合提取物中各提取物的混合比例不特别限制，例如可以是等量(重量)例如，在使用前述的四种植物的情况下，优选将各提取物以1 11 1(重量比)混合，作为混合提取物 在后者的情况下，例如，上述混合物中各原料的比例不特别限制，例如可以是等量(重量) 例如，在使用前述四种植物的情况下，优选提取处理以1 11 1(干燥重量比)混合了各个原料的混合物提取中使用的上述原料和上述提取溶剂的比例不特别限制，相对于上述原料 IOOg (干燥重量)，例如上述提取溶剂为1 1000L，优选为1 100L上述浸渍时间，例如可以根据上述原料和上述提取溶剂的种类和量等适当设定，不特别限制具体而言，在将上述原料IOOg浸渍在上述提取溶剂IOL中的情况下，上述浸渍时间例如优选0. 5小时以上， 更优选的是0.5 对小时另外，上述提取时的上述提取溶剂的温度可以是室温，也可以是室温以上或者室温以下，不特别限制上述提取溶剂是水性溶剂的情况下，上述提取处理例如优选热水提取在上述热水提取的情况下，上述水性溶剂的温度不特别限制，例如为30°C以上，优选的是50 100°C另外，上述热水提取的处理时间，例如可以根据上述原料的种类和量，以及上述水性溶剂的量等而适当设定，不特别限制具体而言，在用上述水性溶剂IOL提取上述原料IOOg(干燥重量)的情况下，上述处理时间优选0. 5小时以上，更优选的是0. 5 M 小时上述提取物可以在上述提取处理后例如实施精制处理等上述精制处理不特别限制，例如可以是蒸馏处理、过滤处理、色谱处理和干燥处理等公知的方法上述提取物的形态不特别限制，例如可以是液状、糊状和粉末状等，可以根据后述的OPH活性增强剂的形态适宜选择上述OPH活性增强剂可以仅含有前述提取物，也可以是含有前述提取物和其他成分的组合物上述成分例如可以含有赋形剂、粘合剂、润滑剂、崩解剂、吸收促进剂、乳化剂、 稳定剂和防腐剂等各种添加剂上述OPH活性增强剂中的上述各种添加剂的调配量不特别限制，可以适当设定上述OPH活性增强剂的形态不特别限制，例如可以是固体状、胶状和液状等作为上述形态的具体例子，例如可以举出散剂、细粒剂、颗粒剂、片剂、包衣片剂、胶囊剂、含片、 滴眼剂、液剂、贴剂、洗剂和软膏剂等本发明的OPH活性增强剂例如可以通过施用给生物体，增强生物体内的OPH的活性因此，上述OPH活性增强剂，如下文所述，例如，可以利用于由生物体内的氧化蛋白质或者糖基化蛋白质引起的疾病、组织的老化和功能降低等的治疗方法或者预防方法中上述 OPH活性增强剂例如与一般食品和营养辅助食品等食品、化妆品、准医药用品和医药用品等其他成分调配，作为组合物施用上述组合物中上述OPH活性增强剂的调配量例如可以根据上述其他成分和施用对象等适宜设定，不特别限制另外，本发明的OPH活性增强方法如前所述，包括将本发明的OPH活性增强剂添加到含有OPH的试样中的步骤上述OPH活性增强方法，例如可以利用于包含N末端酰化氨基酸的释放步骤的方法中，具体来说，例如可以利用于蛋白质序列分析等中在上述蛋白质序列分析中，例如可以在上述OPH活性增强剂的存在下，进行由OPH释放分析对象的蛋白质的N末端的酰化氨基酸的步骤，由此更高效地释放上述N末端酰化氨基酸上述蛋白质序列分析除了使用上述OPH活性增强方法之外，不特别限制，可以采用以往公知的方法在上述释放步骤中，反应液中的上述OPH活性增强剂的添加量例如可以根据分析对象的蛋白质量等适宜设定，不特别限制本发明的蛋白质分解促进方法，如前上述，包括将本发明的OPH活性增强剂添加到含有蛋白质和OPH的试样中的步骤，上述蛋白质含有氧化蛋白质和糖基化蛋白质中的至少一者上述蛋白质分解促进方法可以利用于例如包括N末端酰化氨基酸的释放步骤的方法中，具体来说，例如可以利用于前述的蛋白质序列分析等中上述氧化蛋白质和糖基化蛋白质例如可以是随着年龄增加或者显示老化病态的疾患而受到修饰的蛋白质、由于暴露于紫外线等而受到氧化损害的蛋白质、由于糖而受到修饰的蛋白质等上述蛋白质的修飾例如可以是氧化、糖基化、羰基化、酰化等上述羰基化中包括例如羟基壬烯醛化、丙二醛化、乙醇醛化、吡咯素(，>」>)化等具体而言，没有特别限制，例如上述氧化蛋白质可以是氧化oxiredOXin(酸化才* * > K * * > )等，上述糖基化蛋白质例如可以是HbAlc、糖化白蛋白、AGEs (终末糖基化产物)化蛋白质等本发明的治疗方法的特征在于，将本发明的OPH活性增强剂施用给生物体，治疗由氧化蛋白质或者糖基化蛋白质的生成而引起的疾病、组织的老化和/或组织的功能降低本发明的治疗方法可以是预防方法上述疾病例如可以是糖尿病并发症、阿尔茨海默氏症、白内障、动脉硬化、骨质疏松症、风湿和变形性骨关节疾患等上述组织例如可以是皮肤、神经、肾脏、血管、视网膜、水晶体、骨、关节、脑组织、肝脏和红血球等上述生物体的动物种物种不特别限制，例如，可以是人，或者猴、牛、猪、狗和猫等非人的哺乳动物，鸡等鸟类以及鱼贝类等上述施用方法不特别限制，例如有经口施用和非经口施用上述非经口施用例如有经皮施用和静脉注射等的注射等上述OPH活性增强剂的形态不特别限制，例如可以是前述的形态等另外，上述OPH活性增强剂如前上述，可以作为与其他成分调配的组合物施用上述组合物中上述OPH活性增强剂的调配量，如前上述，可以适当设定，不特别限制上述OPH活性增强剂的施用量例如可以根据动物物种、年龄等适宜设定，不特别限制 在健康成年人经口摄取的情况下，优选以上述提取物(固形物)换算摄取上述OPH活性增强剂10 2000mg，更优选的是50 lOOOmg上述本发明的OPH活性增强剂例如也可以说是上述疾病、组织的老化和/或功能降低的治疗药，也含有预防药的意思本发明的提取物是如下提取物用于在由氧化蛋白质或者糖基化蛋白质的生成而引起的疾病、组织的老化和/或功能降低的治疗中使用的、菊科春黄菊属、三白草科蕺菜属、蔷薇科山楂属或者葡萄科葡萄属的植物的提取物上述治疗也可以是预防本发明的组合物是如下组合物，所述组合物是用于在由氧化蛋白质或者糖基化蛋白质的生成而引起的疾病、组织的老化和功能降低的治疗中使用的，并且包括选自包括菊科春黄菊属、三白草科蕺菜属、蔷薇科山楂属和葡萄科葡萄属的组中的至少一种植物的提取物上述治疗也可以是预防本发明的提取物和组合物中，上述各提取物以及含有上述提取物的组合物，如前所述，组合、使用方法等也相同