器官脱细胞循环灌流再生培养瓶的制作方法【技术领域】，具体涉及一种器官脱细胞循环灌流再生培养瓶。[0002]生物性人造器官是利用动物身上的细胞或组织，“制造”出一些具有生物活性的器官或组织。研发人工器官用于器官移植对于解决目前器官移植来源匮乏、提高人类的健康水平有着极其重要的意义，也是生物医学发展的重点方向。随着科学技术的进步和对器官再生研究的不断发展，目前国外已经报道了人工生物心脏、人工生物肝脏、人工生物肾脏、人工生物肺的体外构建，这些人工器官处于初级阶段，动物移植证明了可以存活一段时间，但尚不支持临床移植。如何优化培养方法和进一步研究器官再生机理是目前迫切需要解决的问题。在人工器官再生研究中，第一步是离体器官灌流，主要用来观察和研究动物的器官功能、脱除器官细胞获得器官支架。目前，国内外用于这一研究的装置大多数采用Iangendorff装置,另外也有一些定型配套的器官灌流装置出售,但是其结构复杂、造价昂贵。第二步是利用生物反应器模拟体内的物理环境，并将细胞种植到器官脱细胞支架，研究细胞在基质材料上的生长、发育、功能形成等。生物反应器只有在大型实验室才有配备，价值几百万元人民币。此外，从第一步到第二步，器官脱细胞支架容易污染，影响到后续的器官再生。目前国内外惯用的方法是灌脱器官时添加抗生素或者在培养前Co60辐照灭菌，不可避免地影响器官基质成分，影响其结构。实用新型内容[0003]本实用新型所要解决的技术问题在于针对上述现有技术的不足，提供一种器官脱细胞循环灌流再生培养瓶，该器官脱细胞循环灌流再生培养瓶将器官脱细胞和循环灌流培养融合在一起，一体化操作的流程，避免了污染，且结构简单，运行稳定，制造所需费用低。[0004]为解决上述技术问题，本实用新型采用的技术方案是，一种器官脱细胞循环灌流再生培养瓶，包括瓶体和与瓶口密封设置的盖子，瓶体上相对应的位置设置有进气管和排气管，所述进气管和排气管位于瓶体的上部，瓶体的底端设置有出液管；盖子上设置有进液管，进液管位于瓶体内的一端与用于放置器官的内灌流管相连接；进液管位于瓶体外的一端通过循环管与出液管连接，出液管与循环管之间连接有第一三通阀，第一三通阀的第三个接口用于连接废液排出管，循环管接近第一三通阀的一端设有提供循环动力的蠕动泵；进液管与循环管之间连接有第二三通阀，第二三通阀的第三接口与用于器官灌流液流入的管子连接。[0005]进一步地，该进气管的进口处安装有防止外界杂质进入的第一过滤器，第一过滤器的滤网的孔径为0.22 μ m。[0006]进一步地，该进气管的出口处与硅胶管连接，所述硅胶管伸至瓶底处，并连接有气泡石。[0007]进一步地，该排气管的出口处安装有防止外界杂质进入的第二过器，第二过滤器的滤网的孔径为0.22 μ m。
[0008]进一步地，该第二三通阀的第三接口安装有防止外界杂质进入的第三过滤器，第三过滤器的滤网的孔径为0.22 μ m。
[0009]进一步地，该瓶体的口部为磨砂口。
[0010]进一步地，该进气管和排气管位于瓶体的2/3高度处。
[0011]本实用新型器官脱细胞循环灌流再生培养瓶，其结构简单，克服了现有装置需要将心脏/肾脏/肝脏体外脱细胞、消毒，然后才能放置在生物反应器内种植细胞，所需步骤繁琐且对环境要求苛刻的缺点；该再生培养瓶集灌流脱细胞、细胞种植、组织再生等功能于一体，瓶子底部有气泡石，方便在组织培养时灌入氧气，满足组织再生的需要。
[0012]本实用新型器官脱细胞循环灌流再生培养瓶兼具器官脱细胞和后期的细胞重新种植的功能，无需复杂的离体器官灌流装置和昂贵的生物反应器，在小型实验室即可开展器官再生研究。
[0013]在循环管上设置了蠕动泵，提供了循环动力；该培养瓶为广口磨口玻璃瓶，方便在组织培养时打开瓶子注射不同的细胞，操作简单，可以实时观察再生情况，且其制造所需的费用低。



[0014]图1是本实用新型器官脱细胞循环灌流再生培养瓶结构示意图。

[0015]如图1所示，一种器官脱细胞循环灌流再生培养瓶，包括瓶体I和与瓶口密封设置的盖子4，瓶体I上相对应的位置设置有进气管2和排气管9，进气管2和排气管9位于瓶体的上部，瓶体I的底端设置有出液管13 ;盖子4上设置有进液管5，进液管5位于瓶体I内的一端与用于放置器官的内灌流管11相连接；进液管5位于瓶体I外的一端通过循环管7与出液管13连接，出液管13与循环管7之间连接有第一三通阀15，第一三通阀15的第三个接口 16用于连接废液排出管，循环管7接近第一三通阀15的一端设有提供循环动力的蠕动泵14 ;进液管5与循环管7之间连接有第二三通阀6，第二三通阀6的第三接口 8与用于器官灌流液流入的管子连接。进气管2的进口处安装有防止外界杂质进入的第一过滤器3，第一过滤器3的滤网的孔径为0.22 μ m。进气管2的出口处与硅胶管连接，所述硅胶管伸至瓶底处，并连接有气泡石12。排气管9的出口处安装有防止外界杂质进入的第二过滤器10，第二过滤器10的滤网的孔径为0.22 μ m。第二三通阀6的第三接口 8安装有防止外界杂质进入的第三过滤器17，第三过滤器17的滤网的孔径为0.22 μ m0体I的口部为磨砂口。进气管2和排气管9位于瓶体I的2/3高度处。
[0016]本实用新型器官脱细胞循环灌流再生培养瓶的使用过程包括如下两步:
[0017]第一步:.器官脱细胞:
[0018](I)将器官脱细胞循环灌流再生培养瓶和其他辅助装置经高温或2%戊二醛浸泡灭菌，无菌水适当冲洗。
[0019](2)调节第二三通阀6，将第二三通阀6的第三接口与用于器官灌流液流入的管子连接，使用于灌流液流入的管子与进液管5相通，循环管7关闭。
[0020](3)调节第一三通阀15，出液管13通过第一三通阀15的第三接口 16与用于废液排出的管子连接，循环管7关闭。
[0021](4)将配好的器官灌流液放置高处，接到将第二三通阀6的第三接口 8，经第三过滤器17进入进液管5。
[0022](5)器官无菌取下，接到灌流管11上，放置入瓶体，待行血管逆行灌流。
[0023](6)器官灌流液由于重力作用，通过灌流管11灌注到器官，进行脱细胞阶段。
[0024](7)废液经第一三通阀15的第三接口 16排出。
[0025](8)整个脱细胞过程需要3-5天，可以观察到器官逐渐变透明。
[0026]第二步:器官再生:
[0027]( I)灌流液换成器官培养液，直至培养瓶的液体替换成培养液。
[0028](2)调节第二三通阀6，关闭第二三通阀6的第三接口 8，进液管5与循环管7相通。
[0029](3)调节第一三通阀15，关闭第一三通阀15的第三接口 16，出液管11与循环管7相通。
[0030](4)启动蠕动泵14，培养液形成循环回路。
[0031](5)往培养液里面添加种子细胞，再往器官组织注射细胞。
[0032](6)含有95%02和5%C02的混合气体经第一过滤器3后经进气管2输入瓶体。
[0033](7)观察器官再生情况。