一种龙眼壳黄酮的快速纯化方法[【技术领域】][0001]本发明涉及一种天然植物活性成分纯化方法，具体涉及一种龙眼壳黄酮的快速纯化方法，属于中药有效成分提取纯化【技术领域】。[[0002]龙眼DimocarpusLongan Lour.拉丁名 Dimocarpus longan Lour,俗名桂圆，是我国著名的亚热带水果。龙眼原产于我国南部和越南北部的南亚热带，在我国已有2000多年栽培历史，为四大岭南佳果之一。龙眼的肉、核、花和根均可以作为中药制剂。每年在龙眼肉加工过程中，产生大量的龙眼壳，这些龙眼壳往往被丢弃，或用作农家肥，采用高效低成本的方法提取龙眼壳中极具经济价值的黄酮类物质，将创造极高的经济效益。[0003]龙眼壳中含有大量的生物碱、黄酮、多酚等生物活性成分。国内外学者对龙眼研究得最多的是研究龙眼果肉的营养成分、化学成分、药理作用和保健作用；其次研究得较多的是龙眼核。前人对龙眼核的研究主要集中在龙眼核化学成分、营养成分及矿物成分的研究；研究得最少的是龙眼壳，对龙眼壳的研究偏向于龙眼保鲜过程中，龙眼壳的褐变，而对龙眼壳的化学成分的研究很少。在少量对龙眼壳进行的研究中可以看到，研究大多围绕龙眼壳化学成分分析，抗氧化成分的超声波辅助提取或微波辅助提取，以及抗氧化成分的鉴定方面开展。其中周 孟清等在“微波辅助法提取龙眼壳中黄酮类化合物的研究”中进行了微波辅助法提取龙眼壳中黄酮类化合物的研究。[0004]在龙眼壳黄酮纯化方面的研究做的还比较少，其中王嵬等在“龙眼中抗氧化活性物质的研究”中采用了经聚酰胺树脂对乙醇提取的龙眼中的抗氧化成分进行了纯化，经过高效液相检测分析显示可能含有没食子酸、芦丁和鞣花酸。廖娜在“龙眼壳化学成分的研究”中通过硅胶柱层析，薄层层析的方法来纯化乙醇提取的龙眼壳抗氧化成分，得到了槲皮素。目前对各种黄酮类物质的纯化基本都采用柱层析、薄层层析、制备型高效液相法等方法。在蒋惠娣等的发明专利“菊花总黄酮树脂纯化方法”中，采用HPD-100大孔径树脂来纯化玉米须总黄酮。但是以上黄酮纯化方法均具有效率低，成本高，溶剂消耗量和残留量大、生产量受限制等问题。[0005]本发明利用调节龙眼壳黄酮提取液pH值，使龙眼壳黄酮在等电点结晶析出，该方法纯化龙眼壳黄酮，纯度可达到98%以上，得率达到1.50%-1.65%，操作方法简单、纯化效率高、成本低，值得推广。[
[0006]本发明的目的是提供一种龙眼壳黄酮的快速纯化方法，操作简单、纯化效率高、成本低。
[0007]为实现上述发明的目的，本发明采取的技术方案如下:
[0008]一种龙眼壳黄酮的快速纯化方法，其特征在于包括如下步骤:
[0009](I)过滤:准备龙眼壳黄酮提取液，将龙眼壳黄酮提取液用循环水真空泵进行抽滤，弃去滤渣，留滤液；
[0010](2)调节pH值:用NaOH溶液、HCl溶液调节龙眼壳提取液pH值到等电点；
[0011](3)结晶:龙眼壳黄酮在此pH下溶解度大幅降低，有结晶析出；
[0012](4)过滤:等待结晶完成，采用循环水真空泵进行抽滤，得到结晶体；
[0013](5)水洗:用蒸馏水冲洗结晶体，洗去杂质后将晶体转移；
[0014](6)溶解:用乙醇溶液溶解龙眼壳黄酮晶体；
[0015](7)重结晶:重复步骤(2)~(5)的方法重结晶，得到高纯度龙眼壳黄酮晶体。
[0016]如上所述，步骤(1)具体过程如下:龙眼壳粉以80%乙醇为提取溶剂，质量固液比为1:25，浸泡I小时后，在超声-微波协同作用下提取两次并合并滤液，然后用循环水真空泵进行抽滤，得到龙眼壳黄酮提取液。
[0017]如上所述的超声-微波协同作用是指微波功率300W，超声波开启。
[0018]如上所述，步骤(2)所述的用NaOH溶液、HCl溶液调节龙眼壳提取液pH值是指当PH值过高则用HCl溶液进行微调，若pH值过低则用NaOH溶液微调，将pH值调到等电点，直到有晶体析出。
[0019]如上所述，步骤(1)和步骤(4)中循环水真空泵是在真空度0.1MPa下进行抽滤。
[0020]如上所述，步骤(2)所述的等电点为pH值4.30~4.60。
[0021]如上所述，步骤(2)所述的NaOH溶液浓度为0.1moL.L-1~0.5moL.L-1，HCl溶液浓度为 0.5moL.L -1 ~ImoL.L-1、
[0022]如上所述，步骤(4)中等待结晶完成时间为3~5min。
[0023]如上所述，步骤(6)中采用的是质量固液比为1:20~1:25的浓度为80%乙醇溶
液来溶解龙眼壳黄酮晶体。
[0024]与现有技术相比，本发明具有以下有益效果:
[0025]1、本发明提供的龙眼壳黄酮的快速纯化方法操作简单、效率高、溶剂消耗量和残留量小；
[0026]2、所用试剂NaOH、HCl及乙醇溶液都廉价且无毒，成本低，安全性好，便于结晶；
[0027]3、用本发明方法纯化龙眼壳黄酮，其纯度高，且重现性好，容易应用于工业化生产。
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[0028]下面通过具体实施例子对本发明作进一步详细介绍，以便清楚本发明所保护的技术方案。
[0029]实施例1
[0030](I)龙眼壳黄酮提取:将10.1g龙眼壳粉以80%乙醇为提取溶剂，质量固液比为1:25，浸泡I小时后，在超声-微波协同作用(微波功率300W，超声波开启，45°C恒温)下提取两次并合并滤液，用循环水真空泵在真空度0.1MPa下抽滤20s后，旋转蒸发仪回收乙醇，得较高浓度提取液。
[0031](2)龙眼壳总黄酮纯化:用NaOH溶液和HCl溶液调节提取液的PH值至等电点
4.35， 龙眼壳黄酮析出结晶，用循环水真空泵在真空度0.1MPa下抽滤25s得龙眼壳黄酮结晶，将结晶用蒸馏水洗涤除去晶体表面杂质，后转移入小烧杯中用质量固液比为1:20的浓度为80%的乙醇溶液溶解龙眼壳黄酮晶体，重复上述步骤进行重结晶，得到龙眼壳黄酮晶体后进行称量，则得到0.162g，得率达到1.60%。
[0032]实施例2
[0033](I)龙眼壳黄酮提取:将10.0g龙眼壳粉以80%乙醇为提取溶剂，液固比为1:25，浸泡I小时后，在超声-微波协同作用(微波功率300W，超声波开启，45°C恒温)下提取两次并合并滤液，用循环水真空泵在真空度0.1MPa下抽滤30s后，旋转蒸发仪回收乙醇，得较高浓度提取液。
[0034](2)龙眼壳总黄酮纯化:用NaOH溶液和HCl溶液调节提取液的PH值至等电点4.31，龙眼壳黄酮析出结晶，用循环水真空泵在真空度0.1MPa下抽滤30s得龙眼壳黄酮结晶，将结晶用蒸馏水洗涤除去晶体表面杂质，后转移入小烧杯中用质量固液比为1:23的浓度为80%的乙醇溶液溶解龙眼壳黄酮晶体，重复上述步骤进行重结晶，得到龙眼壳黄酮晶体后进行称量，则得到0.158g，得率达到1.58%。
[0035]实施例3
[0036](I)龙眼壳黄酮提取:将10.0g龙眼壳粉以80%乙醇为提取溶剂，液固比为1:25，浸泡I小时后，在超声-微波协同作用(微波功率300W，超声波开启，45°C恒温)下提取两次并合并滤液，用循环水真空泵在真空度0.1MPa下抽滤20s后，旋转蒸发仪回收乙醇，得较高浓度提取液。
[0037](2)龙眼壳总黄酮纯化:用NaOH溶液和HCl溶液调节提取液的PH值至等电点
4.36，龙眼壳黄酮析出结晶，用循环水真空泵在真空度0.1MPa下抽滤20s得龙眼壳黄酮结晶，将结晶用蒸馏水洗涤除去晶体表面杂质，后转移入小烧杯中用质量固液比为1:25的浓度为80%的乙醇溶液溶解龙眼壳黄酮晶体，重复上述步骤进行重结晶，得到龙眼壳黄酮晶体后进行称量，则得到0.165g，得率达到1.65%。
[0038]实施例4
[0039](I)龙眼壳黄酮提取:将10.2g龙眼壳粉以80%乙醇为提取溶剂，液固比为1:25，浸泡I小时后，在超声-微波协同作用(微波功率300W，超声波开启，45°C恒温)下提取两次并合并滤液，用循环水真空泵在真空度0.1MPa下抽滤35s，旋转蒸发仪回收乙醇，得较高浓度提取液。
[0040](2)龙眼壳总黄酮纯化:用NaOH溶液和HCl溶液调节提取液的PH值至等电点
4.50，龙眼壳黄酮析出结晶，用循环水真空泵在真空度0.1MPa下抽滤35s得龙眼壳黄酮结晶，将结晶用蒸馏水洗涤除去晶体表面杂质，后转移入小烧杯中用质量固液比为1:20的浓度为80%的乙醇溶液溶解龙眼壳黄酮晶体，重复上述步骤进行重结晶，得到龙眼壳黄酮晶体后进行称量，则得到0.160g，得率达到1.57%。
[0041]在本发明上述实施例中，得到的高纯度龙眼壳黄酮晶体通过高效液相色谱法检测其为芦丁，如上所述，以上实施例仅为本发明的优选实施方式，不能以此来限定本发明的保护范围，本领域的技术人员在本发明的基础上所做的任何非实质性的变化及替换均属于本发明的保护范围。