专利名称：苦豆双黄酮苷在制备抗病毒或/和抗肿瘤药物中的应用的制作方法病毒性传染病的发病率很高，死亡率也很高，其传播不仅造成严重的社会影响和 经济损失，而且随时随地象恶魔般杀死无数生灵。在人类已发现众多病毒中，流感病毒堪 称元老，由于其变异性极高，科学家们至今还没有弄清其变异规律，当针对流行株的疫苗 研制成功后，往往又出现新的传播性更强的变异株，使人类无法获得终身免疫。在这种形 势下，应用抗病毒药物对人群进行保护，或控制感染者的病情就显得十分重要。乙型肝炎也是世界性的流行病，我国属高地方流行区，在全球3. 5亿乙肝病毒感 染者中，中国人占三分之一，每年有数百万人死于由乙型肝炎导致的肝硬化和原发性肝 癌。由于社会和经济方面的原因，计划免疫在我国还无法全面普及，乙型肝炎的流行已成为 我国最大的公共卫生问题之一。由于抗乙肝药物的开发在国际上一直未取得理想的进展， 目前临床上可选择的有效药物寥寥无几，而且都存在治疗周期长、反弹率高、副作用大、价 格昂贵等种种无法克服的问题。爱滋病自被发现后，其传播速度惊人，在短短20年时间里，已扩散到了全球各个 角落。目前，我国HIV感染每年增加人数列世界第1位，感染人数已超过100万。新疆为我 国艾滋病重灾区之一，于1995年发现第一例艾滋病病毒感染者，截至2005年，已累计报 告艾滋病病毒感染者11303人，艾滋病病毒感染者人数居全国第4位。艾滋病的防治已成 为我区不容忽视的社会问题和重大科研课题。近年来，虽然政府一直在不断加强各级医疗 部门防控艾滋病的能力，全面推进艾滋病的预防与控制仍是一项极其艰巨的工程。由于为世人瞩目的HIV疫苗研制工作在众多科学家付出了 20年的艰辛努力之后， 成功的希望依然“非常渺茫”，使抗爱滋病毒药物的研发在国际上备受瞩目，许多发达国家 一直在努力通过药物筛选争取实质性的进展。随着对HIV病毒及其感染机制的研究不断深 入，积极运用现代技术手段，进行抗HIV药物的筛选及评价，促使更多高效、低毒的抗AIDS 药物问世，是攻克艾滋病防治的这一世纪性难题的有效途径。恶性肿瘤也是目前危害人类生命健康的严重疾病之一。世界卫生组织的统计资料 表明，癌症每年发病1000万人，死亡700万人，是仅次于心血管病的人类第2杀手。目前， 化疗、放疗和手术治疗是临床治疗恶性肿瘤的主要手段。通常，对于有转移淋巴结癌灶的早 期癌症及全部进展期癌症，均需进行化学药物治疗，合理的化疗能最大限度地通过细胞毒 作用抑制肿瘤扩散，消灭残存癌灶，防止复发和转移，晚期癌症患者也可通过化疗延长生存 期，改善生存质量。但现有的化学抗癌药均存在疗效有限、价格昂贵、毒副作用大等缺点， 天然药物在癌症治疗中的作用受到备受关注。能否找到既能杀伤肿瘤细胞，毒副作用又比较小的药物及治疗方法，对肿瘤的临床治疗意义重大。从天然产物中发现的抗肿瘤活性物质具有作用广泛，副作用小和调节免疫功能等 特性，对很多常规化疗效果欠佳的肿瘤有较好疗效。据研究报道，我国传统中药中存在许 多抗癌有效成分，如黄酮类、生物碱类、多糖类成分，作为抗肿瘤活性物质都具有广阔的开 发前景。许多研究表明，黄酮类化合物具有广泛的抗肿瘤活性，可抑制多种肿瘤细胞的生 长，如人结肠癌细胞、人胃癌细胞和人肝癌细胞等的增殖。通过对该类物质抗肿瘤作用机 理的研究，发现黄酮类化合物可通过多种机制发挥抗肿瘤效应，如细胞生长抑制，影响信号 转导，凋亡诱导，抑制基质金属蛋白酶分泌，抑制肿瘤侵袭行为等。这些研究结果为黄酮类 化合物在抗肿瘤领域的应用提供了依据。目前，针对黄酮类化合物抗肿瘤作用的基础和应 用研究仍在积极进行，发达国家在此方面作了大量的工作。在我国现有国情下，应当充分发 挥中草药资源丰富的优势，加快该领域的研究，尽早开发出高效的抗肿瘤新药。苦豆子Sophora alopecuroides L.为豆科槐属植物，药用全草或种子，主产于我 国西北地区。苦豆子中含有生物碱、黄酮、有机酸和多糖等多种化学成分。苦豆双黄酮苷为 从苦豆子中提取分离的双黄酮苷类化合物，为苦豆子中含量较高的一种黄酮类成分，其化 学结构式如下有关苦豆双黄酮苷在制备抗病毒及抗肿瘤药物的应用在国内外均未见研究报道，也未 检索到有相关的文献。本发明首次提出苦豆双黄酮苷作为药物的用途，并首次将苦豆双黄酮苷用于制备 抗病毒药物和抗肿瘤药物。
本发明提供了一种抗病毒或/和抗肿瘤药物及其制备方法、苦豆双黄酮苷在制备 抗病毒或/和抗肿瘤药物中的应用，本发明首次提出苦豆子中的化学成分苦豆双黄酮苷作 为药物的用途，并首次将苦豆双黄酮苷应用于制备抗病毒药物和抗肿瘤药物。本发明的技术方案之一是通过以下方式得到的一种抗病毒或/和抗肿瘤药物， 其为含有苦豆双黄酮苷的单位剂量形式，单位剂量中含苦豆双黄酮苷按重量计为45毫克 至220毫克。下面是对上述技术方案之一的进一步优化和/或选择5上述抗病毒或/和抗肿瘤药物采用片剂或硬胶囊剂剂型。上述的抗病毒或/和抗肿瘤药物按以下方法得到第一步，苦豆子种子或全草以水或乙醇粗提，其中水粗提为将苦豆子的种子或全草加 8倍量至10倍量水，在80°C至100°C下提取两次，每次2小时至3小时，过滤，合并滤液； 乙醇粗提为将苦豆子的种子或全草加8倍量至10倍量30%至70%的乙醇，在60°C至80°C 提取两次，每次2小时至3小时，过滤，合并滤液并浓缩得粗提物浓缩液；第二步，将上述粗提物浓缩液加相当于1倍量至2倍量体积的无水乙醇，放置沉淀24 小时，滤除沉淀得到乙醇溶液，浓缩乙醇溶液并回收乙醇得浓缩液；第三步，将上述第二步中的浓缩液上AB-8型大孔树脂层析柱吸附，以相当于2至5个 层析柱体积的去离子水冲洗上述层析柱除去杂质，再以50%的乙醇为洗脱剂洗脱层析柱， 每浓度洗脱剂的用量相当于2至8个层析柱体积，流速为2至5个层析柱体积/小时，收集 乙醇洗脱液并合并，在50°C至80°C下浓缩，回收乙醇，得提取物浸膏；
第四步，取上述提取物浸膏加3倍量至8倍量的水溶解后，以体积百分比浓度为10%的 盐酸调节PH值为2至3，用等体积的饱和正丁醇萃取3至5次，萃取液合并后减压浓缩， 回收正丁醇，得流浸膏；
第五步，将上述流浸膏用2倍量至10倍量的水溶解后上聚酰胺层析柱吸附， 以3至8个柱体积的水洗脱聚酰胺层析柱除去杂质，再以40%至60%浓度的乙醇梯 度洗脱上述层析柱，收集乙醇洗脱液并合并，减压浓缩，回收乙醇得浓缩液；
第六步，将上述第五步中的浓缩液上S印hadex LH-20层析柱吸附，以30%至50%的甲 醇梯度洗脱层析柱，收集洗脱液并合并，于50°C至60°C减压浓缩成流浸膏，再以3倍量至 5倍量的甲醇或无水乙醇溶解，放置24小时，析出淡黄色结晶，将所得结晶真空干燥，即 得淡黄色苦豆双黄酮苷粉末；
第七步，取上述苦豆双黄酮苷粉末与赋形剂混合后，按单位剂量中含苦豆双黄酮苷45 毫克至220毫克制成片剂或硬胶囊剂。本发明的技术方案之二是通过以下方式得到的一种上述的抗病毒或/和抗肿瘤 药物的制备方法，其按以下方法制备
第一步，苦豆子种子或全草以水或乙醇粗提，其中水粗提为将苦豆子的种子或全草加 8倍量至10倍量水，在80°C至100°C下提取两次，每次2小时至3小时，过滤，合并滤液； 乙醇粗提为将苦豆子的种子或全草加8倍量至10倍量30%至70%的乙醇，在60°C至80°C 提取两次，每次2小时至3小时，过滤，合并滤液并浓缩得粗提物浓缩液；
第二步，将上述粗提物浓缩液加相当于1倍量至2倍量体积的无水乙醇，放置沉淀24 小时，滤除沉淀得到乙醇溶液，浓缩乙醇溶液并回收乙醇得浓缩液；
第三步，将上述第二步中的浓缩液上AB-8型大孔树脂层析柱吸附，以相当于2至5个 层析柱体积的去离子水冲洗上述层析柱除去杂质，再以50%的乙醇为洗脱剂洗脱层析柱， 每浓度洗脱剂的用量相当于2至8个层析柱体积，流速为2至5个层析柱体积/小时，收集 乙醇洗脱液并合并，在50°C至80°C下浓缩，回收乙醇，得提取物浸膏；
第四步，取上述提取物浸膏加3倍量至8倍量的水溶解后，以体积百分比浓度为10%的 盐酸调节PH值为2至3，用等体积的饱和正丁醇萃取3至5次，萃取液合并后减压浓缩， 回收正丁醇，得流浸膏；第五步，将上述流浸膏用2倍量至10倍量的水溶解后上聚酰胺层析柱吸附， 以3至8个柱体积的水洗脱聚酰胺层析柱除去杂质，再以40%至60%浓度的乙醇梯 度洗脱上述层析柱，收集乙醇洗脱液并合并，减压浓缩，回收乙醇得浓缩液；
第六步，将上述第五步中的浓缩液上S印hadex LH-20层析柱吸附，以30%至50%的甲 醇梯度洗脱层析柱，收集洗脱液并合并，于50°C至60°C减压浓缩成流浸膏，再以3倍量至 5倍量的甲醇或无水乙醇溶解，放置24小时，析出淡黄色结晶，将所得结晶真空干燥，即 得淡黄色苦豆双黄酮苷粉末；
第七步，取上述苦豆双黄酮苷粉末与赋形剂混合后，按单位剂量中含苦豆双黄酮苷45 毫克至220毫克制成片剂或硬胶囊剂。本发明的技术方案之三是通过以下方式得到的苦豆双黄酮苷在制备抗病毒或 /和抗肿瘤药物中的应用。下面是对上述技术方案之三的进一步优化和/或选择
上述苦豆双黄酮苷在制备治疗流感和/或乙型肝炎和/或艾滋病或/和肝癌和/或胃 癌和/或肠癌和/或肺癌和/或宫颈癌药物中的应用。本发明首次提出苦豆双黄酮苷作为药物的用途，并首次将苦豆双黄酮苷片或苦豆 双黄酮苷胶囊应用于治疗病毒性疾病和恶性肿瘤。体内、外实验研究表明，本发明苦豆双 黄酮苷片或苦豆双黄酮苷胶囊具有显著的抗流感病毒作用，其抗流感药效优于现有西药利 巴韦林片。苦豆双黄酮苷片或苦豆双黄酮苷胶囊在体外实验中还显示了较强的抗乙肝病毒 作用及抗爱滋病毒作用。苦豆双黄酮苷片或苦豆双黄酮苷胶囊对肝癌、胃癌、肠癌、肺癌及 宫颈癌细胞均有明显的抗增殖作用，其抗肿瘤作用优于现有化学成分制剂羟基喜树碱注射 液。本发明苦豆双黄酮苷片或苦豆双黄酮苷胶囊可作为抗病毒药物治疗流感、乙肝和爱滋 病，并可作为抗肿瘤药物用于治疗肝癌、胃癌、肠癌、肺癌及宫颈癌。

实施例1 苦豆子的种子或全草加8倍量至10倍量水，在80°C至10(TC下提取两次，每 次2小时至3小时，过滤，合并滤液并浓缩得粗提物浓缩液；加相当于粗提物浓缩液1倍 量至2倍量体积的无水乙醇，放置沉淀24小时，滤除沉淀，浓缩并回收乙醇得浓缩液；浓 缩液上AB-8型大孔树脂层析柱吸附，以相当于2至5个层析柱体积的去离子水冲洗上述 层析柱除去杂质，再以50%的乙醇为洗脱剂洗脱层析柱，每浓度洗脱剂的用量相当于2至8 个层析柱体积，流速为2至5个层析柱体积/小时，收集乙醇洗脱液并合并，在50°C至80°C 下浓缩，回收乙醇，得提取物浸膏；加5倍量至10倍量的水溶解提取物浸膏后，以稀盐酸 调节PH值为2至3，用等体积的饱和正丁醇萃取3至5次，合并萃取液并减压浓缩，回收 正丁醇得流浸膏；用3倍量至8倍量的水溶解流浸膏后，上聚酰胺层析柱吸附，以3至 8个柱体积的水洗脱聚酰胺层析柱除去杂质，再以40%浓度的乙醇梯度洗脱上述层析柱， 收集乙醇洗脱液并合并，减压浓缩，回收乙醇得浓缩液；浓缩液上S印hadex LH-20层析柱 吸附，以30%的甲醇梯度洗脱层析柱，收集洗脱液并合并，并于50°C至60°C减压浓缩成浸膏，再以3倍量至5倍量的甲醇或无水乙醇溶解浸膏，放置24小时，析出淡黄色结晶，将 所得结晶真空干燥，即得苦豆双黄酮苷；取苦豆双黄酮苷与微晶纤维素、羧甲基淀粉钠、硬 脂酸镁按重量比1比0. 3比1比0. 2配比制成颗粒，压片或装入硬胶囊壳，即得苦豆双黄 酮苷片或苦豆双黄酮苷胶囊。实施例2 苦豆子的种子或全草加8倍量至10倍量水，在80°C至100°C下提取两 次，每次2小时至3小时，过滤，合并滤液并浓缩得粗提物浓缩液；加相当于粗提物浓缩液 1倍量至2倍量体积的无水乙醇，放置沉淀24小时，滤除沉淀，浓缩并回收乙醇得浓缩液； 浓缩液上AB-8型大孔树脂层析柱吸附，以相当于2至5个层析柱体积的去离子水冲洗上 述层析柱除去杂质，再以50%的乙醇为洗脱剂洗脱层析柱，每浓度洗脱剂的用量相当于2 至8个层析柱体积，流速为2至5个层析柱体积/小时，收集乙醇洗脱液并合并，在50°C至 80°C下浓缩，回收乙醇，得提取物浸膏；加5倍量至10倍量的水溶解提取物浸膏后，以稀 盐酸调节PH值为2至3，用等体积的饱和正丁醇萃取3至5次，合并萃取液并减压浓缩， 回收正丁醇得流浸膏；用3倍量至8倍量的水溶解流浸膏后，上聚酰胺层析柱吸附，以 3至8个柱体积的水洗脱聚酰胺层析柱除去杂质，再以40%浓度的乙醇梯度洗脱上述层析 柱，收集乙醇洗脱液并合并，减压浓缩，回收乙醇得浓缩液；浓缩液上Si^phadex LH-20层 析柱吸附，以40%的甲醇梯度洗脱层析柱，收集洗脱液并合并，并于50°C至60°C减压浓 缩成浸膏，再以3倍量至5倍量的甲醇或无水乙醇溶解浸膏，放置24小时，析出淡黄色结 晶，将所得结晶真空干燥，即得苦豆双黄酮苷；取苦豆双黄酮苷与微晶纤维素、羧甲基淀 粉钠、硬脂酸镁按重量比1比0. 3比1比0. 2配比制成颗粒，压片或装入硬胶囊壳，即得 苦豆双黄酮苷片或苦豆双黄酮苷胶囊。实施例3 苦豆子的种子或全草加8倍量至10倍量水，在80°C至100°C下提取两 次，每次2小时至3小时，过滤，合并滤液并浓缩得粗提物浓缩液；加相当于粗提物浓缩液 1倍量至2倍量体积的无水乙醇，放置沉淀24小时，滤除沉淀，浓缩并回收乙醇得浓缩液； 浓缩液上AB-8型大孔树脂层析柱吸附，以相当于2至5个层析柱体积的去离子水冲洗上 述层析柱除去杂质，再以50%的乙醇为洗脱剂洗脱层析柱，每浓度洗脱剂的用量相当于2 至8个层析柱体积，流速为2至5个层析柱体积/小时，收集乙醇洗脱液并合并，在50°C至 80°C下浓缩，回收乙醇，得提取物浸膏；加5倍量至10倍量的水溶解提取物浸膏后，以稀 盐酸调节PH值为2至3，用等体积的饱和正丁醇萃取3至5次，合并萃取液并减压浓缩， 回收正丁醇得流浸膏；用3倍量至8倍量的水溶解流浸膏后，上聚酰胺层析柱吸附，以 3至8个柱体积的水洗脱聚酰胺层析柱除去杂质，再以40%浓度的乙醇梯度洗脱上述层析 柱，收集乙醇洗脱液并合并，减压浓缩，回收乙醇得浓缩液；浓缩液上Si^phadex LH-20层 析柱吸附，以50%的甲醇梯度洗脱层析柱，收集洗脱液并合并，并于50°C至60°C减压浓 缩成浸膏，再以3倍量至5倍量的甲醇或无水乙醇溶解浸膏，放置24小时，析出淡黄色结 晶，将所得结晶真空干燥，即得苦豆双黄酮苷；取苦豆双黄酮苷与微晶纤维素、羧甲基淀 粉钠、硬脂酸镁按重量比1比0. 3比1比0. 2配比制成颗粒，压片或装入硬胶囊壳，即得 苦豆双黄酮苷片或苦豆双黄酮苷胶囊。实施例4 苦豆子的种子或全草加8倍量至10倍量水，在80°C至100°C下提取两 次，每次2小时至3小时，过滤，合并滤液并浓缩得粗提物浓缩液；加相当于粗提物浓缩液 1倍量至2倍量体积的无水乙醇，放置沉淀24小时，滤除沉淀，浓缩并回收乙醇得浓缩液；
8浓缩液上AB-8型大孔树脂层析柱吸附，以相当于2至5个层析柱体积的去离子水冲洗上 述层析柱除去杂质，再以50%的乙醇为洗脱剂洗脱层析柱，每浓度洗脱剂的用量相当于2 至8个层析柱体积，流速为2至5个层析柱体积/小时，收集乙醇洗脱液并合并，在50°C至 80°C下浓缩，回收乙醇，得提取物浸膏；加5倍量至10倍量的水溶解提取物浸膏后，以稀 盐酸调节PH值为2至3，用等体积的饱和正丁醇萃取3至5次，合并萃取液并减压浓缩， 回收正丁醇得流浸膏；用3倍量至8倍量的水溶解流浸膏后，上聚酰胺层析柱吸附，以 3至8个柱体积的水洗脱聚酰胺层析柱除去杂质，再以50%浓度的乙醇梯度洗脱上述层析 柱，收集乙醇洗脱液并合并，减压浓缩，回收乙醇得浓缩液；浓缩液上Si^phadex LH-20层 析柱吸附，以30%的甲醇梯度洗脱层析柱，收集洗脱液并合并，并于50°C至60°C减压浓 缩成浸膏，再以3倍量至5倍量的甲醇或无水乙醇溶解浸膏，放置24小时，析出淡黄色结 晶，将所得结晶真空干燥，即得苦豆双黄酮苷；取苦豆双黄酮苷与微晶纤维素、羧甲基淀 粉钠、硬脂酸镁按重量比1比0. 3比1比0. 2配比制成颗粒，压片或装入硬胶囊壳，即得 苦豆双黄酮苷片或苦豆双黄酮苷胶囊。实施例5 苦豆子的种子或全草加8倍量至10倍量水，在80°C至100°C下提取两 次，每次2小时至3小时，过滤，合并滤液并浓缩得粗提物浓缩液；加相当于粗提物浓缩液 1倍量至2倍量体积的无水乙醇，放置沉淀24小时，滤除沉淀，浓缩并回收乙醇得浓缩液； 浓缩液上AB-8型大孔树脂层析柱吸附，以相当于2至5个层析柱体积的去离子水冲洗上 述层析柱除去杂质，再以50%的乙醇为洗脱剂洗脱层析柱，每浓度洗脱剂的用量相当于2 至8个层析柱体积，流速为2至5个层析柱体积/小时，收集乙醇洗脱液并合并，在50°C至 80°C下浓缩，回收乙醇，得提取物浸膏；加5倍量至10倍量的水溶解提取物浸膏后，以稀 盐酸调节PH值为2至3，用等体积的饱和正丁醇萃取3至5次，合并萃取液并减压浓缩， 回收正丁醇得流浸膏；用3倍量至8倍量的水溶解流浸膏后，上聚酰胺层析柱吸附，以 3至8个柱体积的水洗脱聚酰胺层析柱除去杂质，再以50%浓度的乙醇梯度洗脱上述层析 柱，收集乙醇洗脱液并合并，减压浓缩，回收乙醇得浓缩液；浓缩液上Si^phadex LH-20层 析柱吸附，以40%的甲醇梯度洗脱层析柱，收集洗脱液并合并，并于50°C至60°C减压浓 缩成浸膏，再以3倍量至5倍量的甲醇或无水乙醇溶解浸膏，放置24小时，析出淡黄色结 晶，将所得结晶真空干燥，即得苦豆双黄酮苷；取苦豆双黄酮苷与微晶纤维素、羧甲基淀 粉钠、硬脂酸镁按重量比1比0. 3比1比0. 2配比制成颗粒，压片或装入硬胶囊壳，即得 苦豆双黄酮苷片或苦豆双黄酮苷胶囊。实施例6 苦豆子的种子或全草加8倍量至10倍量水，在80°C至100°C下提取两 次，每次2小时至3小时，过滤，合并滤液并浓缩得粗提物浓缩液；加相当于粗提物浓缩液 1倍量至2倍量体积的无水乙醇，放置沉淀24小时，滤除沉淀，浓缩并回收乙醇得浓缩液； 浓缩液上AB-8型大孔树脂层析柱吸附，以相当于2至5个层析柱体积的去离子水冲洗上 述层析柱除去杂质，再以50%的乙醇为洗脱剂洗脱层析柱，每浓度洗脱剂的用量相当于2 至8个层析柱体积，流速为2至5个层析柱体积/小时，收集乙醇洗脱液并合并，在50°C至 80°C下浓缩，回收乙醇，得提取物浸膏；加5倍量至10倍量的水溶解提取物浸膏后，以稀 盐酸调节PH值为2至3，用等体积的饱和正丁醇萃取3至5次，合并萃取液并减压浓缩， 回收正丁醇得流浸膏；用3倍量至8倍量的水溶解流浸膏后，上聚酰胺层析柱吸附，以 3至8个柱体积的水洗脱聚酰胺层析柱除去杂质，再以50%浓度的乙醇梯度洗脱上述层析柱，收集乙醇洗脱液并合并，减压浓缩，回收乙醇得浓缩液；浓缩液上Si^phadex LH-20层 析柱吸附，以50%的甲醇梯度洗脱层析柱，收集洗脱液并合并，并于50°C至60°C减压浓 缩成浸膏，再以3倍量至5倍量的甲醇或无水乙醇溶解浸膏，放置24小时，析出淡黄色结 晶，将所得结晶真空干燥，即得苦豆双黄酮苷；取苦豆双黄酮苷与微晶纤维素、羧甲基淀 粉钠、硬脂酸镁按重量比1比0. 3比1比0. 2配比制成颗粒，压片或装入硬胶囊壳，即得 苦豆双黄酮苷片或苦豆双黄酮苷胶囊。实施例7 苦豆子的种子或全草加8倍量至10倍量水，在80°C至100°C下提取两 次，每次2小时至3小时，过滤，合并滤液并浓缩得粗提物浓缩液；加相当于粗提物浓缩液 1倍量至2倍量体积的无水乙醇，放置沉淀24小时，滤除沉淀，浓缩并回收乙醇得浓缩液； 浓缩液上AB-8型大孔树脂层析柱吸附，以相当于2至5个层析柱体积的去离子水冲洗上 述层析柱除去杂质，再以50%的乙醇为洗脱剂洗脱层析柱，每浓度洗脱剂的用量相当于2 至8个层析柱体积，流速为2至5个层析柱体积/小时，收集乙醇洗脱液并合并，在50°C至 80°C下浓缩，回收乙醇，得提取物浸膏；加5倍量至10倍量的水溶解提取物浸膏后，以稀 盐酸调节PH值为2至3，用等体积的饱和正丁醇萃取3至5次，合并萃取液并减压浓缩， 回收正丁醇得流浸膏；用3倍量至8倍量的水溶解流浸膏后，上聚酰胺层析柱吸附，以 3至8个柱体积的水洗脱聚酰胺层析柱除去杂质，再以60%浓度的乙醇梯度洗脱上述层析 柱，收集乙醇洗脱液并合并，减压浓缩，回收乙醇得浓缩液；浓缩液上Si^phadex LH-20层 析柱吸附，以30%的甲醇梯度洗脱层析柱，收集洗脱液并合并，并于50°C至60°C减压浓 缩成浸膏，再以3倍量至5倍量的甲醇或无水乙醇溶解浸膏，放置24小时，析出淡黄色结 晶，将所得结晶真空干燥，即得苦豆双黄酮苷；取苦豆双黄酮苷与微晶纤维素、羧甲基淀 粉钠、硬脂酸镁按重量比1比0. 3比1比0. 2配比制成颗粒，压片或装入硬胶囊壳，即得 苦豆双黄酮苷片或苦豆双黄酮苷胶囊。实施例8 苦豆子的种子或全草加8倍量至10倍量水，在80°C至100°C下提取两 次，每次2小时至3小时，过滤，合并滤液并浓缩得粗提物浓缩液；加相当于粗提物浓缩液 1倍量至2倍量体积的无水乙醇，放置沉淀24小时，滤除沉淀，浓缩并回收乙醇得浓缩液； 浓缩液上AB-8型大孔树脂层析柱吸附，以相当于2至5个层析柱体积的去离子水冲洗上 述层析柱除去杂质，再以50%的乙醇为洗脱剂洗脱层析柱，每浓度洗脱剂的用量相当于2 至8个层析柱体积，流速为2至5个层析柱体积/小时，收集乙醇洗脱液并合并，在50°C至 80°C下浓缩，回收乙醇，得提取物浸膏；加5倍量至10倍量的水溶解提取物浸膏后，以稀 盐酸调节PH值为2至3，用等体积的饱和正丁醇萃取3至5次，合并萃取液并减压浓缩， 回收正丁醇得流浸膏；用3倍量至8倍量的水溶解流浸膏后，上聚酰胺层析柱吸附，以 3至8个柱体积的水洗脱聚酰胺层析柱除去杂质，再以60%浓度的乙醇梯度洗脱上述层析 柱，收集乙醇洗脱液并合并，减压浓缩，回收乙醇得浓缩液；浓缩液上Si^phadex LH-20层 析柱吸附，以40%的甲醇梯度洗脱层析柱，收集洗脱液并合并，并于50°C至60°C减压浓 缩成浸膏，再以3倍量至5倍量的甲醇或无水乙醇溶解浸膏，放置24小时，析出淡黄色结 晶，将所得结晶真空干燥，即得苦豆双黄酮苷；取苦豆双黄酮苷与微晶纤维素、羧甲基淀 粉钠、硬脂酸镁按重量比1比0. 3比1比0. 2配比制成颗粒，压片或装入硬胶囊壳，即得 苦豆双黄酮苷片或苦豆双黄酮苷胶囊。实施例9 苦豆子的种子或全草加8倍量至10倍量水，在80°C至100°C下提取两次，每次2小时至3小时，过滤，合并滤液并浓缩得粗提物浓缩液；加相当于粗提物浓缩液 1倍量至2倍量体积的无水乙醇，放置沉淀24小时，滤除沉淀，浓缩并回收乙醇得浓缩液； 浓缩液上AB-8型大孔树脂层析柱吸附，以相当于2至5个层析柱体积的去离子水冲洗上 述层析柱除去杂质，再以50%的乙醇为洗脱剂洗脱层析柱，每浓度洗脱剂的用量相当于2 至8个层析柱体积，流速为2至5个层析柱体积/小时，收集乙醇洗脱液并合并，在50°C至 80°C下浓缩，回收乙醇，得提取物浸膏；加5倍量至10倍量的水溶解提取物浸膏后，以稀 盐酸调节PH值为2至3，用等体积的饱和正丁醇萃取3至5次，合并萃取液并减压浓缩， 回收正丁醇得流浸膏；用3倍量至8倍量的水溶解流浸膏后，上聚酰胺层析柱吸附，以 3至8个柱体积的水洗脱聚酰胺层析柱除去杂质，再以60%浓度的乙醇梯度洗脱上述层析 柱，收集乙醇洗脱液并合并，减压浓缩，回收乙醇得浓缩液；浓缩液上Si^phadex LH-20层 析柱吸附，以50%的甲醇梯度洗脱层析柱，收集洗脱液并合并，并于50°C至60°C减压浓 缩成浸膏，再以3倍量至5倍量的甲醇或无水乙醇溶解浸膏，放置24小时，析出淡黄色结 晶，将所得结晶真空干燥，即得苦豆双黄酮苷；取苦豆双黄酮苷与微晶纤维素、羧甲基淀 粉钠、硬脂酸镁按重量比1比0. 3比1比0. 2配比制成颗粒，压片或装入硬胶囊壳，即得 苦豆双黄酮苷片或苦豆双黄酮苷胶囊。实施例10 苦豆子的种子或全草加8倍量至10倍量水，在80°C至100°C下提取 两次，每次2小时至3小时，过滤，合并滤液并浓缩得粗提物浓缩液；加相当于粗提物浓缩 液1倍量至2倍量体积的无水乙醇，放置沉淀24小时，滤除沉淀，浓缩并回收乙醇得浓缩 液；浓缩液上AB-8型大孔树脂层析柱吸附，以相当于2至5个层析柱体积的去离子水冲洗 上述层析柱除去杂质，再以50%的乙醇为洗脱剂洗脱层析柱，每浓度洗脱剂的用量相当于2 至8个层析柱体积，流速为2至5个层析柱体积/小时，收集乙醇洗脱液并合并，在50°C至 80°C下浓缩，回收乙醇，得提取物浸膏；加5倍量至10倍量的水溶解提取物浸膏后，以稀 盐酸调节PH值为2至3，用等体积的饱和正丁醇萃取3至5次，合并萃取液并减压浓缩， 回收正丁醇得流浸膏；用3倍量至8倍量的水溶解流浸膏后，上聚酰胺层析柱吸附，以 3至8个柱体积的水洗脱聚酰胺层析柱除去杂质，再以40%浓度的乙醇梯度洗脱上述层析 柱，收集乙醇洗脱液并合并，减压浓缩，回收乙醇得浓缩液；浓缩液上Si^phadex LH-20层 析柱吸附，以30%的甲醇梯度洗脱层析柱，收集洗脱液并合并，并于50°C至60°C减压浓 缩成浸膏，再以3倍量至5倍量的甲醇或无水乙醇溶解浸膏，放置24小时，析出淡黄色结 晶，将所得结晶真空干燥，即得苦豆双黄酮苷；取苦豆双黄酮苷与微晶纤维素、羧甲基淀 粉钠、硬脂酸镁按重量比1比0. 3比1比0. 2配比制成颗粒，压片或装入硬胶囊壳，即得 苦豆双黄酮苷片或苦豆双黄酮苷胶囊。实施例11 苦豆子的种子或全草加8倍量至10倍量水，在80°C至100°C下提取 两次，每次2小时至3小时，过滤，合并滤液并浓缩得粗提物浓缩液；加相当于粗提物浓缩 液1倍量至2倍量体积的无水乙醇，放置沉淀24小时，滤除沉淀，浓缩并回收乙醇得浓缩 液；浓缩液上AB-8型大孔树脂层析柱吸附，以相当于2至5个层析柱体积的去离子水冲洗 上述层析柱除去杂质，再以50%的乙醇为洗脱剂洗脱层析柱，每浓度洗脱剂的用量相当于2 至8个层析柱体积，流速为2至5个层析柱体积/小时，收集乙醇洗脱液并合并，在50°C至 80°C下浓缩，回收乙醇，得提取物浸膏；加5倍量至10倍量的水溶解提取物浸膏后，以稀 盐酸调节PH值为2至3，用等体积的饱和正丁醇萃取3至5次，合并萃取液并减压浓缩，回收正丁醇得流浸膏；用3倍量至8倍量的水溶解流浸膏后，上聚酰胺层析柱吸附，以 3至8个柱体积的水洗脱聚酰胺层析柱除去杂质，再以50%浓度的乙醇梯度洗脱上述层析 柱，收集乙醇洗脱液并合并，减压浓缩，回收乙醇得浓缩液；浓缩液上Si^phadex LH-20层 析柱吸附，以30%的甲醇梯度洗脱层析柱，收集洗脱液并合并，并于50°C至60°C减压浓 缩成浸膏，再以3倍量至5倍量的甲醇或无水乙醇溶解浸膏，放置24小时，析出淡黄色结 晶，将所得结晶真空干燥，即得苦豆双黄酮苷；取苦豆双黄酮苷与微晶纤维素、羧甲基淀 粉钠、硬脂酸镁按重量比1比0. 3比1比0. 2配比制成颗粒，压片或装入硬胶囊壳，即得 苦豆双黄酮苷片或苦豆双黄酮苷胶囊。实施例12 苦豆子的种子或全草加8倍量至10倍量水，在80°C至100°C下提取 两次，每次2小时至3小时，过滤，合并滤液并浓缩得粗提物浓缩液；加相当于粗提物浓缩 液1倍量至2倍量体积的无水乙醇，放置沉淀24小时，滤除沉淀，浓缩并回收乙醇得浓缩 液；浓缩液上AB-8型大孔树脂层析柱吸附，以相当于2至5个层析柱体积的去离子水冲洗 上述层析柱除去杂质，再以50%的乙醇为洗脱剂洗脱层析柱，每浓度洗脱剂的用量相当于2 至8个层析柱体积，流速为2至5个层析柱体积/小时，收集乙醇洗脱液并合并，在50°C至 80°C下浓缩，回收乙醇，得提取物浸膏；加5倍量至10倍量的水溶解提取物浸膏后，以稀 盐酸调节PH值为2至3，用等体积的饱和正丁醇萃取3至5次，合并萃取液并减压浓缩， 回收正丁醇得流浸膏；用3倍量至8倍量的水溶解流浸膏后，上聚酰胺层析柱吸附，以 3至8个柱体积的水洗脱聚酰胺层析柱除去杂质，再以60%浓度的乙醇梯度洗脱上述层析 柱，收集乙醇洗脱液并合并，减压浓缩，回收乙醇得浓缩液；浓缩液上Si^phadex LH-20层 析柱吸附，以30%的甲醇梯度洗脱层析柱，收集洗脱液并合并，并于50°C至60°C减压浓 缩成浸膏，再以3倍量至5倍量的甲醇或无水乙醇溶解浸膏，放置24小时，析出淡黄色结 晶，将所得结晶真空干燥，即得苦豆双黄酮苷；取苦豆双黄酮苷与微晶纤维素、羧甲基淀 粉钠、硬脂酸镁按重量比1比0. 3比1比0. 2配比制成颗粒，压片或装入硬胶囊壳，即得 苦豆双黄酮苷片或苦豆双黄酮苷胶囊。实施例13 苦豆子的种子或全草加8倍量至10倍量水，在80°C至100°C下提取 两次，每次2小时至3小时，过滤，合并滤液并浓缩得粗提物浓缩液；加相当于粗提物浓缩 液1倍量至2倍量体积的无水乙醇，放置沉淀24小时，滤除沉淀，浓缩并回收乙醇得浓缩 液；浓缩液上AB-8型大孔树脂层析柱吸附，以相当于2至5个层析柱体积的去离子水冲洗 上述层析柱除去杂质，再以50%的乙醇为洗脱剂洗脱层析柱，每浓度洗脱剂的用量相当于2 至8个层析柱体积，流速为2至5个层析柱体积/小时，收集乙醇洗脱液并合并，在50°C至 80°C下浓缩，回收乙醇，得提取物浸膏；加5倍量至10倍量的水溶解提取物浸膏后，以稀 盐酸调节PH值为2至3，用等体积的饱和正丁醇萃取3至5次，合并萃取液并减压浓缩， 回收正丁醇得流浸膏；用3倍量至8倍量的水溶解流浸膏后，上聚酰胺层析柱吸附，以 3至8个柱体积的水洗脱聚酰胺层析柱除去杂质，再以60%浓度的乙醇梯度洗脱上述层析 柱，收集乙醇洗脱液并合并，减压浓缩，回收乙醇得浓缩液；浓缩液上Si^phadex LH-20层 析柱吸附，以40%的甲醇梯度洗脱层析柱，收集洗脱液并合并，并于50°C至60°C减压浓 缩成浸膏，再以3倍量至5倍量的甲醇或无水乙醇溶解浸膏，放置24小时，析出淡黄色结 晶，将所得结晶真空干燥，即得苦豆双黄酮苷；取苦豆双黄酮苷与微晶纤维素、羧甲基淀 粉钠、硬脂酸镁按重量比1比0. 3比1比0. 2配比制成颗粒，压片或装入硬胶囊壳，即得苦豆双黄酮苷片或苦豆双黄酮苷胶囊。实施例14 苦豆子的种子或全草加8倍量至10倍量水，在80°C至100°C下提取 两次，每次2小时至3小时，过滤，合并滤液并浓缩得粗提物浓缩液；加相当于粗提物浓缩 液1倍量至2倍量体积的无水乙醇，放置沉淀24小时，滤除沉淀，浓缩并回收乙醇得浓缩 液；浓缩液上AB-8型大孔树脂层析柱吸附，以相当于2至5个层析柱体积的去离子水冲洗 上述层析柱除去杂质，再以50%的乙醇为洗脱剂洗脱层析柱，每浓度洗脱剂的用量相当于2 至8个层析柱体积，流速为2至5个层析柱体积/小时，收集乙醇洗脱液并合并，在50°C至 80°C下浓缩，回收乙醇，得提取物浸膏；加5倍量至10倍量的水溶解提取物浸膏后，以稀 盐酸调节PH值为2至3，用等体积的饱和正丁醇萃取3至5次，合并萃取液并减压浓缩， 回收正丁醇得流浸膏；用3倍量至8倍量的水溶解流浸膏后，上聚酰胺层析柱吸附，以 3至8个柱体积的水洗脱聚酰胺层析柱除去杂质，再以60%浓度的乙醇梯度洗脱上述层析 柱，收集乙醇洗脱液并合并，减压浓缩，回收乙醇得浓缩液；浓缩液上Si^phadex LH-20层 析柱吸附，以50%的甲醇梯度洗脱层析柱，收集洗脱液并合并，并于50°C至60°C减压浓 缩成浸膏，再以3倍量至5倍量的甲醇或无水乙醇溶解浸膏，放置24小时，析出淡黄色结 晶，将所得结晶真空干燥，即得苦豆双黄酮苷；取苦豆双黄酮苷与微晶纤维素、羧甲基淀 粉钠、硬脂酸镁按重量比1比0. 3比1比0. 2配比制成颗粒，压片或装入硬胶囊壳，即得 苦豆双黄酮苷片或苦豆双黄酮苷胶囊。实施例15 将苦豆子的种子或全草加8倍量至10倍量30%至70%的乙醇，在60°C 至80°C提取两次，每次2小时至3小时，过滤，合并滤液并浓缩得粗提物浓缩液；加相当于 粗提物浓缩液1倍量至2倍量体积的无水乙醇，放置沉淀24小时，滤除沉淀，浓缩并回收 乙醇得浓缩液；浓缩液上AB-8型大孔树脂层析柱吸附，以相当于2至5个层析柱体积的去 离子水冲洗上述层析柱除去杂质，再以50%的乙醇为洗脱剂洗脱层析柱，每浓度洗脱剂的 用量相当于2至8个层析柱体积，流速为2至5个层析柱体积/小时，收集乙醇洗脱液并合 并，在50°C至80°C下浓缩，回收乙醇，得提取物浸膏；加5倍量至10倍量的水溶解提取 物浸膏后，以稀盐酸调节PH值为2至3，用等体积的饱和正丁醇萃取3至5次，合并萃取 液并减压浓缩，回收正丁醇得流浸膏；用3倍量至8倍量的水溶解流浸膏后，上聚酰胺 层析柱吸附，以3至8个柱体积的水洗脱聚酰胺层析柱除去杂质，再以40%浓度的乙醇 梯度洗脱上述层析柱，收集乙醇洗脱液并合并，减压浓缩，回收乙醇得浓缩液；浓缩液上 Sephadex LH-20层析柱吸附，以30%的甲醇梯度洗脱层析柱，收集洗脱液并合并，并于 50°C至60°C减压浓缩成浸膏，再以3倍量至5倍量的甲醇或无水乙醇溶解浸膏，放置24小 时，析出淡黄色结晶，将所得结晶真空干燥，即得苦豆双黄酮苷；取苦豆双黄酮苷与微晶 纤维素、羧甲基淀粉钠、硬脂酸镁按重量比1比0. 3比1比0. 2配比制成颗粒，压片或装入 硬胶囊壳，即得苦豆双黄酮苷片或苦豆双黄酮苷胶囊。实施例16 将苦豆子的种子或全草加8倍量至10倍量30%至70%的乙醇，在60°C 至80°C提取两次，每次2小时至3小时，过滤，合并滤液并浓缩得粗提物浓缩液；加相当于 粗提物浓缩液1倍量至2倍量体积的无水乙醇，放置沉淀24小时，滤除沉淀，浓缩并回收 乙醇得浓缩液；浓缩液上AB-8型大孔树脂层析柱吸附，以相当于2至5个层析柱体积的去 离子水冲洗上述层析柱除去杂质，再以50%的乙醇为洗脱剂洗脱层析柱，每浓度洗脱剂的 用量相当于2至8个层析柱体积，流速为2至5个层析柱体积/小时，收集乙醇洗脱液并合并，在50°C至80°C下浓缩，回收乙醇，得提取物浸膏；加5倍量至10倍量的水溶解提取 物浸膏后，以稀盐酸调节PH值为2至3，用等体积的饱和正丁醇萃取3至5次，合并萃取 液并减压浓缩，回收正丁醇得流浸膏；用3倍量至8倍量的水溶解流浸膏后，上聚酰胺 层析柱吸附，以3至8个柱体积的水洗脱聚酰胺层析柱除去杂质，再以40%浓度的乙醇 梯度洗脱上述层析柱，收集乙醇洗脱液并合并，减压浓缩，回收乙醇得浓缩液；浓缩液上 Sephadex LH-20层析柱吸附，以40%的甲醇梯度洗脱层析柱，收集洗脱液并合并，并于 50°C至60°C减压浓缩成浸膏，再以3倍量至5倍量的甲醇或无水乙醇溶解浸膏，放置24小 时，析出淡黄色结晶，将所得结晶真空干燥，即得苦豆双黄酮苷；取苦豆双黄酮苷与微晶 纤维素、羧甲基淀粉钠、硬脂酸镁按重量比1比0. 3比1比0. 2配比制成颗粒，压片或装入 硬胶囊壳，即得苦豆双黄酮苷片或苦豆双黄酮苷胶囊。实施例17 将苦豆子的种子或全草加8倍量至10倍量30%至70%的乙醇，在60°C 至80°C提取两次，每次2小时至3小时，过滤，合并滤液并浓缩得粗提物浓缩液；加相当于 粗提物浓缩液1倍量至2倍量体积的无水乙醇，放置沉淀24小时，滤除沉淀，浓缩并回收 乙醇得浓缩液；浓缩液上AB-8型大孔树脂层析柱吸附，以相当于2至5个层析柱体积的去 离子水冲洗上述层析柱除去杂质，再以50%的乙醇为洗脱剂洗脱层析柱，每浓度洗脱剂的 用量相当于2至8个层析柱体积，流速为2至5个层析柱体积/小时，收集乙醇洗脱液并合 并，在50°C至80°C下浓缩，回收乙醇，得提取物浸膏；加5倍量至10倍量的水溶解提取 物浸膏后，以稀盐酸调节PH值为2至3，用等体积的饱和正丁醇萃取3至5次，合并萃取 液并减压浓缩，回收正丁醇得流浸膏；用3倍量至8倍量的水溶解流浸膏后，上聚酰胺 层析柱吸附，以3至8个柱体积的水洗脱聚酰胺层析柱除去杂质，再以40%浓度的乙醇 梯度洗脱上述层析柱，收集乙醇洗脱液并合并，减压浓缩，回收乙醇得浓缩液；浓缩液上 Sephadex LH-20层析柱吸附，以50%的甲醇梯度洗脱层析柱，收集洗脱液并合并，并于 50°C至60°C减压浓缩成浸膏，再以3倍量至5倍量的甲醇或无水乙醇溶解浸膏，放置24小 时，析出淡黄色结晶，将所得结晶真空干燥，即得苦豆双黄酮苷；取苦豆双黄酮苷与微晶 纤维素、羧甲基淀粉钠、硬脂酸镁按重量比1比0. 3比1比0. 2配比制成颗粒，压片或装入 硬胶囊壳，即得苦豆双黄酮苷片或苦豆双黄酮苷胶囊。实施例18 将苦豆子的种子或全草加8倍量至10倍量30%至70%的乙醇，在60°C 至80°C提取两次，每次2小时至3小时，过滤，合并滤液并浓缩得粗提物浓缩液；加相当于 粗提物浓缩液1倍量至2倍量体积的无水乙醇，放置沉淀24小时，滤除沉淀，浓缩并回收 乙醇得浓缩液；浓缩液上AB-8型大孔树脂层析柱吸附，以相当于2至5个层析柱体积的去 离子水冲洗上述层析柱除去杂质，再以50%的乙醇为洗脱剂洗脱层析柱，每浓度洗脱剂的 用量相当于2至8个层析柱体积，流速为2至5个层析柱体积/小时，收集乙醇洗脱液并合 并，在50°C至80°C下浓缩，回收乙醇，得提取物浸膏；加5倍量至10倍量的水溶解提取 物浸膏后，以稀盐酸调节PH值为2至3，用等体积的饱和正丁醇萃取3至5次，合并萃取 液并减压浓缩，回收正丁醇得流浸膏；用3倍量至8倍量的水溶解流浸膏后，上聚酰胺 层析柱吸附，以3至8个柱体积的水洗脱聚酰胺层析柱除去杂质，再以50%浓度的乙醇 梯度洗脱上述层析柱，收集乙醇洗脱液并合并，减压浓缩，回收乙醇得浓缩液；浓缩液上 Sephadex LH-20层析柱吸附，以30%的甲醇梯度洗脱层析柱，收集洗脱液并合并，并于 50°C至60°C减压浓缩成浸膏，再以3倍量至5倍量的甲醇或无水乙醇溶解浸膏，放置24小时，析出淡黄色结晶，将所得结晶真空干燥，即得苦豆双黄酮苷；取苦豆双黄酮苷与微晶 纤维素、羧甲基淀粉钠、硬脂酸镁按重量比1比0. 3比1比0. 2配比制成颗粒，压片或装入 硬胶囊壳，即得苦豆双黄酮苷片或苦豆双黄酮苷胶囊。实施例19 将苦豆子的种子或全草加8倍量至10倍量30%至70%的乙醇，在60°C 至80°C提取两次，每次2小时至3小时，过滤，合并滤液并浓缩得粗提物浓缩液；加相当于 粗提物浓缩液1倍量至2倍量体积的无水乙醇，放置沉淀24小时，滤除沉淀，浓缩并回收 乙醇得浓缩液；浓缩液上AB-8型大孔树脂层析柱吸附，以相当于2至5个层析柱体积的去 离子水冲洗上述层析柱除去杂质，再以50%的乙醇为洗脱剂洗脱层析柱，每浓度洗脱剂的 用量相当于2至8个层析柱体积，流速为2至5个层析柱体积/小时，收集乙醇洗脱液并合 并，在50°C至80°C下浓缩，回收乙醇，得提取物浸膏；加5倍量至10倍量的水溶解提取 物浸膏后，以稀盐酸调节PH值为2至3，用等体积的饱和正丁醇萃取3至5次，合并萃取 液并减压浓缩，回收正丁醇得流浸膏；用3倍量至8倍量的水溶解流浸膏后，上聚酰胺 层析柱吸附，以3至8个柱体积的水洗脱聚酰胺层析柱除去杂质，再以50%浓度的乙醇 梯度洗脱上述层析柱，收集乙醇洗脱液并合并，减压浓缩，回收乙醇得浓缩液；浓缩液上 Sephadex LH-20层析柱吸附，以40%的甲醇梯度洗脱层析柱，收集洗脱液并合并，并于 50°C至60°C减压浓缩成浸膏，再以3倍量至5倍量的甲醇或无水乙醇溶解浸膏，放置24小 时，析出淡黄色结晶，将所得结晶真空干燥，即得苦豆双黄酮苷；取苦豆双黄酮苷与微晶 纤维素、羧甲基淀粉钠、硬脂酸镁按重量比1比0. 3比1比0. 2配比制成颗粒，压片或装入 硬胶囊壳，即得苦豆双黄酮苷片或苦豆双黄酮苷胶囊。实施例20 将苦豆子的种子或全草加8倍量至10倍量30%至70%的乙醇，在60°C 至80°C提取两次，每次2小时至3小时，过滤，合并滤液并浓缩得粗提物浓缩液；加相当于 粗提物浓缩液1倍量至2倍量体积的无水乙醇，放置沉淀24小时，滤除沉淀，浓缩并回收 乙醇得浓缩液；浓缩液上AB-8型大孔树脂层析柱吸附，以相当于2至5个层析柱体积的去 离子水冲洗上述层析柱除去杂质，再以50%的乙醇为洗脱剂洗脱层析柱，每浓度洗脱剂的 用量相当于2至8个层析柱体积，流速为2至5个层析柱体积/小时，收集乙醇洗脱液并合 并，在50°C至80°C下浓缩，回收乙醇，得提取物浸膏；加5倍量至10倍量的水溶解提取 物浸膏后，以稀盐酸调节PH值为2至3，用等体积的饱和正丁醇萃取3至5次，合并萃取 液并减压浓缩，回收正丁醇得流浸膏；用3倍量至8倍量的水溶解流浸膏后，上聚酰胺 层析柱吸附，以3至8个柱体积的水洗脱聚酰胺层析柱除去杂质，再以50%浓度的乙醇 梯度洗脱上述层析柱，收集乙醇洗脱液并合并，减压浓缩，回收乙醇得浓缩液；浓缩液上 Sephadex LH-20层析柱吸附，以50%的甲醇梯度洗脱层析柱，收集洗脱液并合并，并于 50°C至60°C减压浓缩成浸膏，再以3倍量至5倍量的甲醇或无水乙醇溶解浸膏，放置24小 时，析出淡黄色结晶，将所得结晶真空干燥，即得苦豆双黄酮苷；取苦豆双黄酮苷与微晶 纤维素、羧甲基淀粉钠、硬脂酸镁按重量比1比0. 3比1比0. 2配比制成颗粒，压片或装入 硬胶囊壳，即得苦豆双黄酮苷片或苦豆双黄酮苷胶囊。实施例21 将苦豆子的种子或全草加8倍量至10倍量30%至70%的乙醇，在60°C 至80°C提取两次，每次2小时至3小时，过滤，合并滤液并浓缩得粗提物浓缩液；加相当于 粗提物浓缩液1倍量至2倍量体积的无水乙醇，放置沉淀24小时，滤除沉淀，浓缩并回收 乙醇得浓缩液；浓缩液上AB-8型大孔树脂层析柱吸附，以相当于2至5个层析柱体积的去
15离子水冲洗上述层析柱除去杂质，再以50%的乙醇为洗脱剂洗脱层析柱，每浓度洗脱剂的 用量相当于2至8个层析柱体积，流速为2至5个层析柱体积/小时，收集乙醇洗脱液并合 并，在50°C至80°C下浓缩，回收乙醇，得提取物浸膏；加5倍量至10倍量的水溶解提取 物浸膏后，以稀盐酸调节PH值为2至3，用等体积的饱和正丁醇萃取3至5次，合并萃取 液并减压浓缩，回收正丁醇得流浸膏；用3倍量至8倍量的水溶解流浸膏后，上聚酰胺 层析柱吸附，以3至8个柱体积的水洗脱聚酰胺层析柱除去杂质，再以60%浓度的乙醇 梯度洗脱上述层析柱，收集乙醇洗脱液并合并，减压浓缩，回收乙醇得浓缩液；浓缩液上 Sephadex LH-20层析柱吸附，以30%的甲醇梯度洗脱层析柱，收集洗脱液并合并，并于 50°C至60°C减压浓缩成浸膏，再以3倍量至5倍量的甲醇或无水乙醇溶解浸膏，放置24小 时，析出淡黄色结晶，将所得结晶真空干燥，即得苦豆双黄酮苷；取苦豆双黄酮苷与微晶 纤维素、羧甲基淀粉钠、硬脂酸镁按重量比1比0. 3比1比0. 2配比制成颗粒，压片或装入 硬胶囊壳，即得苦豆双黄酮苷片或苦豆双黄酮苷胶囊。实施例22 将苦豆子的种子或全草加8倍量至10倍量30%至70%的乙醇，在60°C 至80°C提取两次，每次2小时至3小时，过滤，合并滤液并浓缩得粗提物浓缩液；加相当于 粗提物浓缩液1倍量至2倍量体积的无水乙醇，放置沉淀24小时，滤除沉淀，浓缩并回收 乙醇得浓缩液；浓缩液上AB-8型大孔树脂层析柱吸附，以相当于2至5个层析柱体积的去 离子水冲洗上述层析柱除去杂质，再以50%的乙醇为洗脱剂洗脱层析柱，每浓度洗脱剂的 用量相当于2至8个层析柱体积，流速为2至5个层析柱体积/小时，收集乙醇洗脱液并合 并，在50°C至80°C下浓缩，回收乙醇，得提取物浸膏；加5倍量至10倍量的水溶解提取 物浸膏后，以稀盐酸调节PH值为2至3，用等体积的饱和正丁醇萃取3至5次，合并萃取 液并减压浓缩，回收正丁醇得流浸膏；用3倍量至8倍量的水溶解流浸膏后，上聚酰胺 层析柱吸附，以3至8个柱体积的水洗脱聚酰胺层析柱除去杂质，再以60%浓度的乙醇 梯度洗脱上述层析柱，收集乙醇洗脱液并合并，减压浓缩，回收乙醇得浓缩液；浓缩液上 Sephadex LH-20层析柱吸附，以40%的甲醇梯度洗脱层析柱，收集洗脱液并合并，并于 50°C至60°C减压浓缩成浸膏，再以3倍量至5倍量的甲醇或无水乙醇溶解浸膏，放置24小 时，析出淡黄色结晶，将所得结晶真空干燥，即得苦豆双黄酮苷；取苦豆双黄酮苷与微晶 纤维素、羧甲基淀粉钠、硬脂酸镁按重量比1比0. 3比1比0. 2配比制成颗粒，压片或装入 硬胶囊壳，即得苦豆双黄酮苷片或苦豆双黄酮苷胶囊。实施例23 将苦豆子的种子或全草加8倍量至10倍量30%至70%的乙醇，在60°C 至80°C提取两次，每次2小时至3小时，过滤，合并滤液并浓缩得粗提物浓缩液；加相当于 粗提物浓缩液1倍量至2倍量体积的无水乙醇，放置沉淀24小时，滤除沉淀，浓缩并回收 乙醇得浓缩液；浓缩液上AB-8型大孔树脂层析柱吸附，以相当于2至5个层析柱体积的去 离子水冲洗上述层析柱除去杂质，再以50%的乙醇为洗脱剂洗脱层析柱，每浓度洗脱剂的 用量相当于2至8个层析柱体积，流速为2至5个层析柱体积/小时，收集乙醇洗脱液并合 并，在50°C至80°C下浓缩，回收乙醇，得提取物浸膏；加5倍量至10倍量的水溶解提取 物浸膏后，以稀盐酸调节PH值为2至3，用等体积的饱和正丁醇萃取3至5次，合并萃取 液并减压浓缩，回收正丁醇得流浸膏；用3倍量至8倍量的水溶解流浸膏后，上聚酰胺 层析柱吸附，以3至8个柱体积的水洗脱聚酰胺层析柱除去杂质，再以60%浓度的乙醇 梯度洗脱上述层析柱，收集乙醇洗脱液并合并，减压浓缩，回收乙醇得浓缩液；浓缩液上Sephadex LH-20层析柱吸附，以50%的甲醇梯度洗脱层析柱，收集洗脱液并合并，并于 50°C至60°C减压浓缩成浸膏，再以3倍量至5倍量的甲醇或无水乙醇溶解浸膏，放置24小 时，析出淡黄色结晶，将所得结晶真空干燥，即得苦豆双黄酮苷；取苦豆双黄酮苷与微晶 纤维素、羧甲基淀粉钠、硬脂酸镁按重量比1比0. 3比1比0. 2配比制成颗粒，压片或装入 硬胶囊壳，即得苦豆双黄酮苷片或苦豆双黄酮苷胶囊。实施例24 将苦豆子的种子或全草加8倍量至10倍量30%至70%的乙醇，在60°C 至80°C提取两次，每次2小时至3小时，过滤，合并滤液并浓缩得粗提物浓缩液；加相当于 粗提物浓缩液1倍量至2倍量体积的无水乙醇，放置沉淀24小时，滤除沉淀，浓缩并回收 乙醇得浓缩液；浓缩液上AB-8型大孔树脂层析柱吸附，以相当于2至5个层析柱体积的去 离子水冲洗上述层析柱除去杂质，再以50%的乙醇为洗脱剂洗脱层析柱，每浓度洗脱剂的 用量相当于2至8个层析柱体积，流速为2至5个层析柱体积/小时，收集乙醇洗脱液并合 并，在50°C至80°C下浓缩，回收乙醇，得提取物浸膏；加5倍量至10倍量的水溶解提取 物浸膏后，以稀盐酸调节PH值为2至3，用等体积的饱和正丁醇萃取3至5次，合并萃取 液并减压浓缩，回收正丁醇得流浸膏；用3倍量至8倍量的水溶解流浸膏后，上聚酰胺 层析柱吸附，以3至8个柱体积的水洗脱聚酰胺层析柱除去杂质，再以40%浓度的乙醇 梯度洗脱上述层析柱，收集乙醇洗脱液并合并，减压浓缩，回收乙醇得浓缩液；浓缩液上 Sephadex LH-20层析柱吸附，以30%的甲醇梯度洗脱层析柱，收集洗脱液并合并，并于 50°C至60°C减压浓缩成浸膏，再以3倍量至5倍量的甲醇或无水乙醇溶解浸膏，放置24小 时，析出淡黄色结晶，将所得结晶真空干燥，即得苦豆双黄酮苷；取苦豆双黄酮苷与微晶 纤维素、羧甲基淀粉钠、硬脂酸镁按重量比1比0. 3比1比0. 2配比制成颗粒，压片或装入 硬胶囊壳，即得苦豆双黄酮苷片或苦豆双黄酮苷胶囊。实施例25 将苦豆子的种子或全草加8倍量至10倍量30%至70%的乙醇，在60°C 至80°C提取两次，每次2小时至3小时，过滤，合并滤液并浓缩得粗提物浓缩液；加相当于 粗提物浓缩液1倍量至2倍量体积的无水乙醇，放置沉淀24小时，滤除沉淀，浓缩并回收 乙醇得浓缩液；浓缩液上AB-8型大孔树脂层析柱吸附，以相当于2至5个层析柱体积的去 离子水冲洗上述层析柱除去杂质，再以50%的乙醇为洗脱剂洗脱层析柱，每浓度洗脱剂的 用量相当于2至8个层析柱体积，流速为2至5个层析柱体积/小时，收集乙醇洗脱液并合 并，在50°C至80°C下浓缩，回收乙醇，得提取物浸膏；加5倍量至10倍量的水溶解提取 物浸膏后，以稀盐酸调节PH值为2至3，用等体积的饱和正丁醇萃取3至5次，合并萃取 液并减压浓缩，回收正丁醇得流浸膏；用3倍量至8倍量的水溶解流浸膏后，上聚酰胺 层析柱吸附，以3至8个柱体积的水洗脱聚酰胺层析柱除去杂质，再以50%浓度的乙醇 梯度洗脱上述层析柱，收集乙醇洗脱液并合并，减压浓缩，回收乙醇得浓缩液；浓缩液上 Sephadex LH-20层析柱吸附，以30%的甲醇梯度洗脱层析柱，收集洗脱液并合并，并于 50°C至60°C减压浓缩成浸膏，再以3倍量至5倍量的甲醇或无水乙醇溶解浸膏，放置24小 时，析出淡黄色结晶，将所得结晶真空干燥，即得苦豆双黄酮苷；取苦豆双黄酮苷与微晶 纤维素、羧甲基淀粉钠、硬脂酸镁按重量比1比0. 3比1比0. 2配比制成颗粒，压片或装入 硬胶囊壳，即得苦豆双黄酮苷片或苦豆双黄酮苷胶囊。实施例26 将苦豆子的种子或全草加8倍量至10倍量30%至70%的乙醇，在60°C 至80°C提取两次，每次2小时至3小时，过滤，合并滤液并浓缩得粗提物浓缩液；加相当于粗提物浓缩液1倍量至2倍量体积的无水乙醇，放置沉淀24小时，滤除沉淀，浓缩并回收 乙醇得浓缩液；浓缩液上AB-8型大孔树脂层析柱吸附，以相当于2至5个层析柱体积的去 离子水冲洗上述层析柱除去杂质，再以50%的乙醇为洗脱剂洗脱层析柱，每浓度洗脱剂的 用量相当于2至8个层析柱体积，流速为2至5个层析柱体积/小时，收集乙醇洗脱液并合 并，在50°C至80°C下浓缩，回收乙醇，得提取物浸膏；加5倍量至10倍量的水溶解提取 物浸膏后，以稀盐酸调节PH值为2至3，用等体积的饱和正丁醇萃取3至5次，合并萃取 液并减压浓缩，回收正丁醇得流浸膏；用3倍量至8倍量的水溶解流浸膏后，上聚酰胺 层析柱吸附，以3至8个柱体积的水洗脱聚酰胺层析柱除去杂质，再以60%浓度的乙醇 梯度洗脱上述层析柱，收集乙醇洗脱液并合并，减压浓缩，回收乙醇得浓缩液；浓缩液上 Sephadex LH-20层析柱吸附，以30%的甲醇梯度洗脱层析柱，收集洗脱液并合并，并于 50°C至60°C减压浓缩成浸膏，再以3倍量至5倍量的甲醇或无水乙醇溶解浸膏，放置24小 时，析出淡黄色结晶，将所得结晶真空干燥，即得苦豆双黄酮苷；取苦豆双黄酮苷与微晶 纤维素、羧甲基淀粉钠、硬脂酸镁按重量比1比0. 3比1比0. 2配比制成颗粒，压片或装入 硬胶囊壳，即得苦豆双黄酮苷片或苦豆双黄酮苷胶囊。实施例27 将苦豆子的种子或全草加8倍量至10倍量30%至70%的乙醇，在60°C 至80°C提取两次，每次2小时至3小时，过滤，合并滤液并浓缩得粗提物浓缩液；加相当于 粗提物浓缩液1倍量至2倍量体积的无水乙醇，放置沉淀24小时，滤除沉淀，浓缩并回收 乙醇得浓缩液；浓缩液上AB-8型大孔树脂层析柱吸附，以相当于2至5个层析柱体积的去 离子水冲洗上述层析柱除去杂质，再以50%的乙醇为洗脱剂洗脱层析柱，每浓度洗脱剂的 用量相当于2至8个层析柱体积，流速为2至5个层析柱体积/小时，收集乙醇洗脱液并合 并，在50°C至80°C下浓缩，回收乙醇，得提取物浸膏；加5倍量至10倍量的水溶解提取 物浸膏后，以稀盐酸调节PH值为2至3，用等体积的饱和正丁醇萃取3至5次，合并萃取 液并减压浓缩，回收正丁醇得流浸膏；用3倍量至8倍量的水溶解流浸膏后，上聚酰胺 层析柱吸附，以3至8个柱体积的水洗脱聚酰胺层析柱除去杂质，再以60%浓度的乙醇 梯度洗脱上述层析柱，收集乙醇洗脱液并合并，减压浓缩，回收乙醇得浓缩液；浓缩液上 Sephadex LH-20层析柱吸附，以40%的甲醇梯度洗脱层析柱，收集洗脱液并合并，并于 50°C至60°C减压浓缩成浸膏，再以3倍量至5倍量的甲醇或无水乙醇溶解浸膏，放置24小 时，析出淡黄色结晶，将所得结晶真空干燥，即得苦豆双黄酮苷；取苦豆双黄酮苷与微晶 纤维素、羧甲基淀粉钠、硬脂酸镁按重量比1比0. 3比1比0. 2配比制成颗粒，压片或装入 硬胶囊壳，即得苦豆双黄酮苷片或苦豆双黄酮苷胶囊。实施例28 将苦豆子的种子或全草加8倍量至10倍量30%至70%的乙醇，在60°C 至80°C提取两次，每次2小时至3小时，过滤，合并滤液并浓缩得粗提物浓缩液；加相当于 粗提物浓缩液1倍量至2倍量体积的无水乙醇，放置沉淀24小时，滤除沉淀，浓缩并回收 乙醇得浓缩液；浓缩液上AB-8型大孔树脂层析柱吸附，以相当于2至5个层析柱体积的去 离子水冲洗上述层析柱除去杂质，再以50%的乙醇为洗脱剂洗脱层析柱，每浓度洗脱剂的 用量相当于2至8个层析柱体积，流速为2至5个层析柱体积/小时，收集乙醇洗脱液并合 并，在50°C至80°C下浓缩，回收乙醇，得提取物浸膏；加5倍量至10倍量的水溶解提取 物浸膏后，以稀盐酸调节PH值为2至3，用等体积的饱和正丁醇萃取3至5次，合并萃取 液并减压浓缩，回收正丁醇得流浸膏；用3倍量至8倍量的水溶解流浸膏后，上聚酰胺层析柱吸附，以3至8个柱体积的水洗脱聚酰胺层析柱除去杂质，再以60%浓度的乙醇 梯度洗脱上述层析柱，收集乙醇洗脱液并合并，减压浓缩，回收乙醇得浓缩液；浓缩液上 Sephadex LH-20层析柱吸附，以50%的甲醇梯度洗脱层析柱，收集洗脱液并合并，并于 50°C至60°C减压浓缩成浸膏，再以3倍量至5倍量的甲醇或无水乙醇溶解浸膏，放置24小 时，析出淡黄色结晶，将所得结晶真空干燥，即得苦豆双黄酮苷；取苦豆双黄酮苷与微晶 纤维素、羧甲基淀粉钠、硬脂酸镁按重量比1比0. 3比1比0. 2配比制成颗粒，压片或装入 硬胶囊壳，即得苦豆双黄酮苷片或苦豆双黄酮苷胶囊。将上述实施例所得苦豆双黄酮苷片或苦豆双黄酮苷胶囊进行药效学试验，其过程 和结果如下
苦豆双黄酮苷片或苦豆双黄酮苷胶囊的规格为每片或每粒含苦豆双黄酮苷按重量计 为45毫克至220毫克，临床用量为每次1至2片或粒，每天2至3次。试验例1 本发明苦豆双黄酮苷片或苦豆双黄酮苷胶囊抗流感病毒作用
实验材料流感甲型病毒(H3N2亚型粤防72243株)、流感乙型病毒(济防97-13株)及狗 肾传代细胞MDCK，分别购自中国预防医学科学院病毒学研究所，自行传代后备用。阳性对照 药利巴韦林片，江西汇仁药业有限公司生产，批号0911025。 样品苦豆双黄酮苷片或 苦豆双黄酮苷胶囊，由新疆药物研究所药理室提供，实验时将片剂粉碎或取胶囊内容物配 成所需要浓度的溶液或混悬液给药，给药浓度或剂量均按苦豆双黄酮苷原料计。苦豆双黄酮苷片样品对MDCK细胞毒性的测定苦豆双黄酮苷片用营养液配成2毫 克/毫升原液，以营养液作2倍稀释，取1000微克/毫升至62. 5微克/毫升6个浓度；阳 性对照利巴韦林片配成400微克/毫升原液，以营养液作2倍稀释，取200微克/毫升至 6. 25微克/毫升6个浓度，分别加到接种MDCK和Hela细胞并已长成单层的培养板中，100 微升/孔，每浓度4个平行孔，同时设细胞对照。将培养板置37°C、5% CO 2条件培养四天， 每日观察细胞生长情况，以细胞不出现明显退变的最小稀释倍数为最大无毒浓度(TCtl)15并 按Reed-Muench法计算50%有毒浓度(TC5tl)。详见表一。苦豆双黄酮苷片样品对病毒致细胞病变的影响取接种后已长成单层的MDCK细 胞培养板，吸弃上清液，设细胞对照组、病毒对照组、阳性对照利巴韦林片(取25微克/毫升 至0. 8微克/毫升共六个2倍稀释度)组和不同浓度苦豆双黄酮苷片给药组(取62. 5微克 /毫升至2. 0微克/毫升共六个2倍稀释度)，每组4个平行孔。病毒对照组、阳性对照组和 给药组每孔接种病毒液100微升，细胞对照组加等体积的维持液，置35°C吸附2小时后吸 弃上清液，以不含血清的维持液洗细胞表面2次，给药组加入相应稀释度的苦豆双黄酮苷 片样品溶液，细胞对照组、病毒对照组加等体积的维持液。于37° (、5%0)2条件培养，每日 观察细胞病变情况，细胞病变程度按六级标准判断(一无病变；士 细胞病约占整个单层 的10%以下；1 细胞病变约占整个单层的25%以下；2 细胞病变约占整个单层的50%以 下；3:细胞病变约占整个单层的75%以下；4:细胞病变约占整个单层的75%以上)。当病毒对照组细胞病变为4时记录实验结果。按Reed-Muench法计算半数有效浓 度IC5。，并计算苦豆双黄酮苷片样品的选择指数SI (TC50/IC50)，结果如表二所示。苦豆双黄酮苷片抑制甲、乙型流感病毒的选择指数SI均大于利巴韦林，表明苦豆 双黄酮苷片对流感病毒的抑制作用优于利巴韦林。以苦豆双黄酮苷胶囊进行上述实验，所 得结果与苦豆双黄酮苷片相符。
试验例2 本发明苦豆双黄酮苷片或苦豆双黄酮苷胶囊对小鼠流感病毒性肺炎模 型的保护作用
测定流感病毒鼠肺适应株PR8 -M5的毒力，取感染后15天内小鼠死亡率在90%以 上的浓度作为实验浓度。取小鼠100只，随机分为病毒感染对照组、利巴韦林对照组(剂量为40毫克/千克) 和苦豆双黄酮苷片20、40、80毫克/千克三个剂量的给药组，每组20只。按剂量灌胃给药， 每天一次，连续7天，病毒感染对照组灌胃等体积的蒸馏水。于第二天给药后，各组小鼠以 乙醚吸入法麻醉，流感病毒鼠肺适应株PR8 - M5以上述实验浓度滴鼻感染小鼠，0. 05毫升/ 只。观察记录小鼠死亡情况，计算死亡保护率、平均存活天数及生命延长率，结果如表三所
7J ο苦豆双黄酮苷片20毫克/千克、40毫克/千克和80毫克/千克剂量对感染小鼠 均有明显的保护作用，可明显降低感染小鼠的死亡率并延长存活时间。从上述实验所测得 的死亡保护率和生命延长率数据可知，在临床等效剂量下，苦豆双黄酮苷片对小鼠流感病 毒性肺炎模型的保护作用优于利巴韦林。以苦豆双黄酮苷胶囊进行上述实验，所得结果与 苦豆双黄酮苷片相符。试验例1和试验例2的研究结果表明，苦豆双黄酮苷片或苦豆双黄酮苷胶囊的抗 流感病毒作用明显优于西