专利名称：一种具有降血糖功效的真菌药性菌质及其制备方法糖尿病治疗难度大，费用高，已成为各国政府关注的全球性问题。目前我国医药市场上专治糖尿病的药品只有六七种，分为三大类生物药胰岛素，化学药磺酰脲类双胍类， 以及中成药类。胰岛素制剂价格昂贵，难以推广并有8大副作用；化学药虽降糖作用明显， 但对肝、肾等毒副作用较大，还容易导致心血管并发症加重等。中成药虽有一定治疗作用， 但目前临床使用的多为粗提物制剂或医生自拟的处方汤药，缺乏药效显著、有效成分和作用机理清楚、质量可控、制剂先进的现代中药。目前，中成药的研究范围多在下述范围内，同样存在上述问题一类是以不同的中草药组方，或烘干粉碎或水煎按传统方法制取的中成药。如专利CN02157912. 1《蚂蚁尿糖丸及其加工方法》，以人参，蚂蚁，蝉退，黄连等中药材为配料，经烘干粉碎、水煎煮浓缩后，混合药粉与药液制成颗粒。专利200910094733《一种治疗糖尿病的中药胶囊》其特征在于含有碧叶黄花、八面威风、五倍子、黄精、西洋参等23种中草药。专利(AP)02133230《一种治疗糖尿病的愈三消药物及制备方法>》是将当归、黄连、红参、鹿茸分别粉碎与黄芪、地黄、熟地黄等13味中药的水提取物混合。专利201010188883《一种治疗糖尿病的药物及其制备方法》由以下药物为原料药 柴胡、白芍、香附子、牡丹皮等，将中药与粗粮混合物和营养物一起配伍使用。第二类是以中药植物为主，传统法加工配以化学药成分的合成药。如专利CN97103536. 9《一种治疗糖尿病的药物及其制备方法》属于医用配制品，发明特征由多味中药猪芩、泽泻、黄柏、糯稻芽尖等经烤干炒制配兑盐酸二甲双胍、糖适平。第三类是以中药提取物配伍的复方药。如专利CN02138362. 6《一种中药降血糖药及其制备方法》主要由鬼箭羽的乙酸乙酯提取物或萃取物组成。专利200610066305《一种治疗糖尿病的药物组合物及其制备方法》该药物主要由苦荞麦、桑叶组合经乙醇回流提取加吡啶甲酸铬制成。迄今为止，将食药用真菌生物制剂用于治疗糖尿病及其并发症方面的研究尚少， 更无用双向发酵工程获得的药性菌质制品。如专利200810064886《治疗糖尿病的药用真菌生物制剂及其制备工艺》是由野生蕈类提取物、桑叶与山药混合物的提取物配制而成。专利 ZL03111130. 0《食药用真菌固体发酵菌粉》也仅限于用营养基质做固体发酵获得的菌丝体经配伍而成。
本发明采用的是迄今糖尿病领域尚未涉及到的微生物双向发酵技术及“多菌”发酵技术。即用中草药做药性基质，在诸多食药用真菌和中草药之间进行双向性多菌发酵，使二届或三界生物间进行有机结合而获得的全新降血糖药性菌质。本发明的理论依据如下A 双向发酵工程是指，发酵基质全部采用中草药(或在其中添加适量农副产品) 而构成药性基质，再用药用真菌发酵，致使发酵具有双向性，其发酵产物由单纯的真菌菌丝体转为药性菌质。该药性菌质比初发(原始)真菌或药性基质本身或两者简单相加有更良好的药效，能够产生1+1 > 2的生理功能效用，可以显著增强其活性成分，提高药效与疗效等作用。本发明采用的双向发酵工艺，是将发酵菌种和药性基质所构成发酵组合内，其药性基质由以往仅用富含碳、氮等营养的农副产品作为营养基质，改变为采用具有一定降糖活性成分的中药材作为药性基质，它既能为具有降糖功效的真菌提供生长所需营养，又因真菌的酶而被改变组织成分，从而产生新的性味功能。又因本发明是在二界或三界生物间进行有机活性成分的转化与结合，其功效成分更丰富，降糖效果更明显。本发明的工艺流程如下称取药性基质原料一加水一灭菌一按比例分配药性基质一分别接入真菌菌种一双向发酵一收集所有药性菌质一烘干粉碎一获得药性菌质制品。B:采用多种具有显著降糖活性成分而又无毒无副作用的食药用真菌做为发酵菌禾中桦褐孑L菌(Inonqqus obliquus),冬虫夏草[Cordyceps sinensis (Berk. ) Sacc],桑黄 [(pHelIinus igniariusL.es Fr.) Quel.],灰树花(Grifola frondosa)、云芝[Coriolus versicolor(L. :Fr.)]。上述菌种均来源于辽宁省大连珍蕈菌物研究开发中心。采用的各种真菌的降血糖功能如下桦褐孔菌桦褐孔菌在俄罗斯民间作为治疗疾病的药用真菌，长期动物试验和临床试验表明无任何毒副作用，对肝炎、高血压也有防治效果。曾小龙的，《桦褐孔菌的化学成分与药理作用研究》表明，其人工培养菌丝体含有大量的降血糖、复活免疫作用的植物纤维类多糖体，对糖尿病的治愈率达93%。冬虫夏草据杜梅等《食用菌多糖降血糖机理研究》报道，其主要药用成分虫草素对高血糖有抑制作用，两种多糖虫草菌丝杂多糖Cs0H(是含L-阿拉伯糖、L-木糖、D-甘露糖、D-半乳糖和D-葡萄糖的杂多糖)和多糖粗制品CHWc (含D-甘露糖、D-半乳糖和D-葡萄糖)可显著提高胰岛β细胞的生理活性，对高血糖有明显的降低作用。并能保护肾脏提高肌体的免疫力，有效控制糖尿病的各种并发症。桑黄桑黄多糖所激发的IL-I细胞素，有促进胰岛素分泌，降低血糖之功效。同时含有丰富的氨基酸及锌，具有活化胰脏机能的作用。并且可有效提高糖尿病患的免疫能力。桑黄菌还有增进细胞功能、降低胆固醇，抗血栓，缓和血管的收缩等功效，皆有助于糖尿病患者血压正常化(见孙培龙等《珍稀药用真菌桑黄的国内外研究进展》)。灰树花杜梅等《食用菌多糖降血糖机理研究》中揭示，灰树花的功效成分主要是多糖和糖蛋白，为一种真菌来源的β-(Id)-D-葡聚糖，具有降低血糖的功能。灰树花中含量较高的有机铬与有机硒同时具有协助胰岛素维持正常的糖耐量的效果。此外还有激活细胞免疫功能、降低血压、血脂和血清胰岛素的功能。对肝硬化、糖尿病均有效果且无任何毒副作用。5: 中(polysaccharide of Corlolus versicolor, PSK) WK^n 血糖升高作用，对正常血糖无影响。口服用药无长期毒性反应。实验表明PSK为一毒性很低的物质，也无致突变作用(见杜梅等《食用菌多糖降血糖机理研究》)。C 选取具有降血糖效用、适用人群广、无毒副作用、对正常血糖值无影响(不降低)的中草药或动物做为药性基质山茱萸山茱萸所含总萜能提高正常小鼠糖耐量，明显降低四氧嘧啶诱导的血糖值，提高血清胰岛素水平；显著降低链脲佐菌素糖尿病模型的血糖值，增加肝糖原含量。对正常血糖水平无明显影响。被国家列为药食两用中药材品种之一(见梁雷等《中药降血糖活性成分研究近况》)。绞股兰据徐世明，郭欲晓的《绞股蓝的研究与应用》记载，绞股兰多糖的降糖活性与一般降糖药不同，它能延缓葡萄糖在肠道的吸收，抑制α-葡萄糖苷酶活性，可降低四氧嘧啶诱导的高血糖病患改善糖代谢。对正常血糖无影响，还有保护肾上腺、胸腺及内分泌器官的作用，降血压血脂、控制并发症。罗汉果戚向阳等《罗汉果对糖尿病小鼠的降血糖作用》研究表明，其含有丰富的糖甙，这种糖甙对四氧嘧啶诱导的T2DM-II型糖尿病具有显著降血糖作用，而对正常小鼠血糖无影响。还有防治高血压、降血脂及减肥作用，可控制并发症。鬼箭羽尹贵宇、杨金平的《鬼箭羽药理学研究浅谈》中报道，其含有多种降低血糖的成分，能明显降低四氧嘧啶诱导的血糖值，对正常鼠血糖无影响。其草酰乙酸钠成分能刺激细胞增生，调整不正常的代谢过程，加强胰岛素的分泌。无毒，长期服用或大剂量 (30g以下)水煎服也没有明显副作用。还能治疗冠心病、高血压、动脉硬化等症，对糖尿病的并发症有控制作用。苦瓜其苦瓜皂甙是降糖的主要有效成分，能明显降低四氧嘧啶糖尿病患者的血糖，总有效率达82%且无毒副反应(见梁雷、边宝林等《中药降血糖活性成分研究近况》)。拟黑多刺蚁有研究表明，它是具有药食两用价值的新资源食品，是能够维持机体生理平衡的双向免疫调节剂，能双向调整血糖和血压。所含生物活性铬能协助胰岛素维持糖耐量。“草体蚁醛”和所含的特种昆虫蛋白，能够强有力地刺激机体产生保护性抗体，与甾醇和三萜类化合物一起可使糖尿病患者免受各种器官的损害(见舒任庚等《几种动物中药降血糖作用的研究》)。本发明具体通过以下方式实现本发明的一方面在于本发明涉及一种具有降血糖功效的真菌药性菌质的原料， 包括药性基质和真菌菌种，其中药性基质由下述原料组成山茱萸、绞股兰、罗汉果、鬼箭羽、苦瓜、拟黑多刺蚁、营养基质；其中，营养基质的来源是谷物、豆类、米糠、麦麸；真菌菌种由下述菌种组成桦褐孔菌、冬虫夏草、桑黄菌、云芝、灰树花；真菌菌种的接种重量为药性基质的8 12wt%。上述真菌药性菌质的原料中，当药性基质和真菌菌种按下述比例配比时，效果较佳药性基质由下述干燥的原料按质量百分比混合山茱萸1~90绞股兰1~80罗汉果1~40鬼箭羽1~80
苦瓜1~50
拟黑多刺蚁1~10
大米0~35各真菌菌种与所用药性基质的对应关系，按质量百分比分别为
桦褐孔菌10~70%的药性基质
冬虫夏草20~60%的药性基质
桑黄菌10~30%的药性基质
灰树花10~50%的药性基质
云芝10~50%的药性基质真菌菌种的接种重量为药性基质的8 12wt%。上述真菌药性菌质的原料中，当药性基质和真菌菌种按下述比例配比吋，效果最 佳药性基质由下述干燥的原料按质量百分比混合
山茱萸10~25
绞股兰13~30
罗汉果6~20
鬼箭羽5~20
苦瓜10~30
拟黑多刺蚁レ7
大米0~34各真菌菌种与所用药性基质的对应关系，按质量百分比分别为
桦褐孔菌10~50%的药性基质
冬虫夏草20~40%的药性基质
桑黄菌10~20%的药性基质
灰树花10~20%的药性基质
云芝10~20%的药性基质
真菌菌种的接种重量为药性基质的10wt%。本发明的另外一方面在于一种具有降血糖功效的真菌药性菌质的制备方法，其具体工艺步骤如下(e)按质量百分比称取干燥的药性基质原料并混合；(f)向步骤a所得的混合物中，加入1 10倍混合物质量的pH7 8的自来水，于 100 127°C灭菌1 10h，获得药性基质；(g)按各真菌菌种与所用药性基质的对应关系，分配步骤b所得的药性基质，在无菌条件下分别接入真菌菌种，接种比例为药性基质的8 12wt%，在23 27°C双向发酵 4 45天，分别获得药性菌质；(h)收集步骤c获得的所有药性菌质，混合烘干粉碎后得到本产品。具体的上述真菌药性菌质的制备方法中，采用的双向发酵方式为固体发酵或液体深层发酵。具体的上述真菌药性菌质的制备方法中，液体深层发酵条件为温度25 27°C， 罐压0. 7 0. 8kg/cm2，通气量1 lv/v/分。具体的上述真菌药性菌质的制备方法中，所述真菌菌种的接种比例为药性基质的 IOwt %。本发明的另外一方面在于通过上述方法制备的真菌药性菌质。本发明的另外一方面在于上述的真菌药性菌质在制备冲剂、丸剂、片剂、胶囊剂中的应用。食用菌的液体深层发酵技术属于现代生物技术之一。深层发酵技术直接生产食用菌菌体，同时获得富含氨基酸及次生代谢物等营养成分的发酵液。食用菌液体深层发酵技术研究的关键是，不同食用菌要用不同的发酵基质进行培养，因此，选择与配制发酵基质是食用菌液体深层发酵技术的关键。利用食(药)用菌液体深层发酵可以在较短时间内获得大量菌丝体及其发酵产物，由于这一过程周期短、产量高、成本低、工艺设备简单，因此在食用菌生产中具有广阔的应用前景。食(药)用真菌在深层发酵过程中会产生多糖、生物碱、 萜类化合物、留醇、酶、核酸、维生素、具抗生素作用的多种化合物以及植物激素等多种生理活性物质，这些物质分别具有对心血管、肝脏、神经系统、肾、性等人体器官的防病治病作用以及抗癌、消炎、抗衰老、抗菌、提高免疫力等功效。本发明涉及到的产品采用有机化食用化，无污染无毒副作用的药性基质和各种真菌，并且在整个生产工艺中不添加使用任何化学物质，以确保产品的安全性，避免在治疗和保健中对人体形成二次伤害。本发明将三界生物间的主要降血糖因子虫草素、多种真菌多糖和多种药用植物多糖以及生物铬的成分经过双向性发酵和生理转化有机的结合起来，形成具有新的活性分子团和次生代谢物的药性菌质。有益效果本发明属于生物医药领域。采用迄今糖尿病领域尚未涉及到的微生物双向发酵技术及多菌发酵技术，使二届或三界生物间进行有机结合而获得全新降血糖菌质。本产品具有明显的降低血糖又不增加胰岛素浓度的作用，对于辅助治疗和控制糖尿病的并发症有明显和积极的效果，而且不引发常见药物所产生的急性低血糖症。较之现有降糖中药质量可控，剂型先进。该产品属纯生物制剂，无任何毒副作用；该制剂适合用于糖尿病患者的治疗、糖尿病的预防，可作为降低血糖的口服药剂或调节血糖的保健药品。

(b)将步骤a所得的混合物装入容器，按1 1的重量比加入pH7. 5的自来水，于 127°C灭菌2h，冷却至30°C以下后，获得药性基质。(c)在无 菌条件下，向3000g药性基质中接入桦褐孔菌菌株；向3000g药性基质中接入冬虫夏草菌株；向2000g药性基质中接入桑黄菌菌株；向IOOOg药性基质中接入灰树花菌株；向IOOOg药性基质中接入云芝菌株；上述菌种的接种比例均为所接种的药性基质重量的10%。(d)接菌后置25士 1°C发酵45天。收集步骤d获得的所有药性菌质，经40 50°C烘干至含水量5 %以下，混合后经纳米细胞破壁粉碎机粉碎至IOOnm以下，获得药性菌质制品。(二)终产品检测依据中华人民共和国药典2005年版一部附录VID，高效液相色谱法，测定虫草素达3. 3mg/g ；按照紫外-可见分光光度法(中国药典2005年版一部附录VA)测定总多糖为 14.6% ；依据国家标准GB/T5009. 123-2003食品中铬含量的测定方法，测定生物铬含量为 0.89mg/kg。实施例3(一)药性菌质的制备(a)将中草药于50 60°C烘干后，按下述质量百分比称取干燥的药性基质原料并混合山茱萸2400g、绞股兰2000g、罗汉果2000g、鬼箭羽500g、苦瓜1000g、拟黑多刺蚁 IOOgo将上述原料粉碎至1 2mm后、加入大米2000g。(b)将步骤a所得的混合物装入容器，按1 1的重量比加入pH7. 5的自来水，于 127°C灭菌2h，冷却至30°C以下后，获得药性基质。(c)在无菌条件下，向4000g药性基质中接入桦褐孔菌菌株；向2000g药性基质中接入冬虫夏草菌株；向2000g药性基质中接入桑黄菌菌株；向IOOOg药性基质中接入灰树花菌株；向IOOOg药性基质中接入云芝菌株；上述菌种的接种比例均为所接种的药性基质重量的10%。(d)接菌后置25士 1°C发酵45天。(e)收集步骤d获得的所有药性菌质，经40 50°C烘干至含水量5%以下，混合后经纳米细胞破壁粉碎机粉碎至IOOnm以下，获得药性菌质制品。(二)终产品检测依据中华人民共和国药典2005年版一部附录VID，高效液相色谱法，测定虫草素达1.3mg/g;按照紫外-可见分光光度法(中国药典2005年版一部附录VA)测定总多糖为11% ；依据国家标准GB/T5009. 123-2003食品中铬含量的测定方法，测定生物铬含量为 0.21mg/kg。实施例4(一)药性菌质的制备(a)将中草药于50 60°C烘干后，按下述质量百分比称取干燥的药性基质原料并混合山茱萸600g、绞股兰600g、罗汉果500g、鬼箭羽600g、苦瓜500g、拟黑多刺蚁200g。 将上述原料粉碎至100目。(b)将步骤a所得的混合物装入发酵罐，按1 10的重量比加入pH7. 5的自来水，于127°C灭菌40分钟，冷却至30°C以下后，获得药性基质。(c)在无菌条件下，按照所接种的药性基质重量的10wt%接入桦褐孔菌菌株。(d)接菌后置25 士 1°C，罐压0. 7 0.8kg/cm2，通气量1 lv/v/分，发酵培养8 天。(e)收集步骤d获得桦褐孔菌药性菌质，用单效浓缩器真空浓缩至1. 2，经40 50°C烘干至含水量5%以下，获得桦褐孔菌药性菌质。(f)用上述桦褐孔菌的深层 发酵方法分别获得冬虫夏草菌、桑黄菌，灰树花、云芝的相应药性菌质。(g)取桦褐孔菌药性菌质2000g，冬虫夏草菌药性菌质1500g，桑黄菌药性菌质 500g，灰树花药性菌质500g、云芝药性菌质500g，混合后经纳米细胞破壁粉碎机粉碎至 IOOnm以下，获得药性菌质制品。(二)终产品检测依据中华人民共和国药典2005年版一部附录VID，高效液相色谱法，测定虫草素达2. 5mg/g ；按照紫外-可见分光光度法(中国药典2005年版一部附录V A)测定总多糖为18.7% ；依据国家标准GB/T5009. 123-2003食品中铬含量的测定方法，测定生物铬含量为 0.43mg/kg。实施例5(一)药性菌质的制备(a)将中草药于50 60°C烘干后，按下述质量百分比称取并混合山茱萸3000g、 绞股兰2000g、罗汉果1000g、鬼箭羽1500g、苦瓜1500g、拟黑多刺蚁1000g。将上述混合物经三次浸提第一次加2倍混合物重量的pH7. 5的自来水煮开后20分钟，收集滤液，第二次加2倍混合物重量的pH7. 5的自来水煮开后15分钟，收集滤液，第三次加2倍混合物重量的PH7. 5的自来水煮开后10分钟，收集滤液，然后将三次的滤液合并，浓缩至6000ml，将其加入到5000克大米中。(b)将步骤a所得的混合物装入容器，于127°C灭菌2h，冷却至30°C以下后，获得
药性基质。(c)在无菌条件下，向500g药性基质中接入桦褐孔菌菌株；向2000g药性基质中接入冬虫夏草菌株；向500g药性基质中接入桑黄菌菌株；向IOOOg药性基质中接入灰树花菌株；向IOOOg药性基质中接入云芝菌株；上述菌种的接种比例均为所接种的药性基质重量的10%。(d)接菌后置25 士 1°C发酵45天。(e)收集步骤d获得的所有药性菌质，经40 50°C烘干至含水量5%以下，混合后经纳米细胞破壁粉碎机粉碎至IOOnm以下，获得药性菌质制品。(二)中间产品检测按照紫外-可见分光光度法(中国药典2005年版一部附录VA)测定药性基质的多糖为6.7%，桦褐孔菌发酵后所得药性菌质的多糖增加至9. ；依据国家标准GB/ T5009. 123-2003食品中铬含量的测定方法，测定药性基质的生物铬含量0. 73mg/kg,经灰树花发酵后的药性菌质提高到1. 16mg/kg。依据中华人民共和国药典2005年版一部附录VID，高效液相色谱法，测定虫草素含量由其药性基质中的0mg/g提高到虫草菌质中的9. 2mg/g0由此说明，经过双向发酵的药性菌质比初发(原始)真菌或药性基质本身或两者简单相加有更良好的药效，能够产生1+1 > 2的生理功能效用，可以显著增强其活性成分， 提高药效与疗效等作用。(三)终产品检测依据中华人民共和国药典2005年版一部附录VID，高效液相色谱法，虫草素达 4.3mg/g;按照紫外-可见分光光度法(中国药典2005年版一部附录V A)测定总多糖为 20.6% ；依据国家标准GB/T500 9. 123-2003食品中铬含量的测定方法，测定生物铬含量为 3.8mg/kg。实施例6动物实验分组将54只体重18 22g的供试昆明小鼠饲养5天后，随机分为三组每组18 只雌雄各半。三组分别为空白对照组、高血糖模型组、真菌药物组。除了空白对照组之外， 另外两组小鼠连续3天以200mg/kg剂量注射四氧嘧啶，诱导高血糖达到14. 4mmol/L。施药空白对照组和高血糖模型组小鼠以生理盐水连续灌胃30天，真菌药物组以 25mg/kg药量连续灌胃30天。然后各组小鼠眼球采血并以血糖试纸(市售)测定小鼠血清葡萄糖。结果上述小白鼠动物实验的结果如表1，真菌药物组与模型组相比差异具有统计学意义(P < 0. 05)，真菌药物组与正常组相比差异无统计学意义(P > 0. 05)。此结果证明，本发明所述产品能显著降低小鼠体内，经四氧嘧啶(200mg/kg)诱导的高血糖。表1.小鼠血清中葡萄糖含量(mmol/L)检测结果


本发明属于生物发酵工程领域。选用具有降血糖功效的药性基质和真菌菌种作为双向发酵的原料，其中，药性基质主要由下述原料组成山茱萸、绞股兰、罗汉果、鬼箭羽、苦瓜、拟黑多刺蚁；真菌菌种由下述菌种组成桦褐孔菌、冬虫夏草、桑黄菌、云芝、灰树花；再通过双向发酵工艺，在诸多食药用真菌和中草药之间进行双向性多菌发酵，使二届或三界生物间达到有机结合而获得全新降血糖药性菌质制品。本品对于免疫力低下能够产生1+1＞2的生理功能效用，具有明显的降低血糖又不增加胰岛素浓度的作用；对于帮助治疗和控制糖尿病的并发症有明显和积极的效果，可作为预防、治疗糖尿病的口服药剂或调节血糖的保健品。