一种四叶降脂咀嚼片的制备方法一、[0002]四叶咀嚼片组方源于纤美减肥茶加减方，选择方中菊叶、荷叶，增加桑叶、银杏叶组成此方。方中荷叶为主药，其他三味药物为补充药。四叶均为药食两用的药材，主要含黄酮类成分。[0003]方中荷叶是睡莲科植物莲(Nelumbo nucifera Gaertn)的干燥叶，荷叶黄酮具有降脂减肥、抗自由基、抗氧化、抑菌、抗病毒等作用。银杏叶为银杏科植物银杏(Ginkgobiloba Linn)的叶，银杏叶黄酮成分具有扩张血管、抑制血小板活化因子、抗氧化、调血脂，保护心脑血管和神经系统等药理作用。桑叶为桑科植物桑(Morus alba L.)的干燥叶,桑叶黄酮成分具有降血糖、降血脂和抗氧化等药理作用。菊叶来自菊科植物菊(Chrysanthemummorifolium Ramat.)的莖上叶,菊叶提取物有抗氧化、保护心肌缺血、抗菌作用。四味药物目前在降血脂方面应用一方面以泡茶喝为主，杂质溶出较多，影响降脂活性；另一方面，以传统工艺提取制备成一定制剂，其技术以传统醇提、水提为主，受溶剂和高温影响，难以提取出高纯度的活性成分。三、
[0004]本发明旨在提供一种四叶降脂咀嚼片的制备方法，所要解决的技术问题是遴选合适的原料进行配伍，使其具有降脂减肥的效果，降低毒副作用。本发明将四叶咀嚼片中荷叶、菊叶、银杏叶和桑叶进行超临界萃取，得`到总黄酮成分，同时利用超微粉碎技术粉碎荷叶，加入辅料，制备成咀嚼片。咀嚼片运输、使用、储存方便，具有良好的口感和随从性，适合高血脂病人不同人群长期服用。[0005]本发明四叶降脂咀嚼片是按以下方法制备得到的:[0006]I)将干燥后的52质量份的荷叶、12质量份的桑叶、21质量份的银杏叶和35质量份的菊叶粉碎并过24目筛得到粉料a，对粉料a进行超临界二氧化碳萃取得到提取液，于0-5°C冷藏8-12小时，抽滤，滤液回收乙醇后加等体积的石油醚和水，萃取4-5次，取水层减压浓缩并真空干燥，得到干浸膏；超临界二氧化碳萃取的工艺参数为:萃取时间120-140min，萃取温度45_55°C，CO2流量为16_18L/h，夹带剂为100_200ml的95%乙醇，分离压力为6MPa，分离温度为35°C。[0007]2)将荷叶干燥并以超微粉碎机粉碎，过300目筛，得到荷叶超微粉；
[0008]3)将20-30质量份的脱脂奶粉和20-30质量份的微晶纤维素置于研钵中研磨并混合均匀，过80目筛，得到粉料b ;将10-20质量份的干浸膏粉碎并过80目筛得到浸膏粉；将所述浸膏粉与所述粉料b混合均匀，再加入5-7质量份的荷叶超微粉，混匀后得到混合料；向所述混合料中加入混合料体积13-15vt%的聚乙烯吡咯烷酮(PVP)制软材，过18目筛制粒得粒料；将所得粒料于65°C干燥至恒重，以18目筛整粒，整粒后加入粒料质量1-3%的微粉硅胶作为润滑剂，压片后即得四叶降脂咀嚼片。每片含生药2.12g。一天服用三次，每次4-5 片。
[0009]本发明制备工艺中超临界二氧化碳萃取技术可充分提取四叶(荷叶、桑叶、银杏叶和菊叶)中总黄酮成分，提取物纯度较高；另外由于荷叶自身香味和作为主药，超微粉碎技术得到的荷叶超微粉可作为填充剂，增加片剂的色素美感和原始香味，提升荷叶作为主药的药效作用。另外，本发明提取、纯化过程不使用有毒试剂，环境友好，无污染。
[0010]本发明四叶降脂咀嚼片呈浅绿色，表面光洁，颜色均匀，硬度适中。本发明方法适于开发为保健食品或药品，发挥降脂减肥作用。药理研究表明，本发明四叶降脂咀嚼片可有效降低小鼠体重、脂肪、肝脏重量，具有潜在的减肥降脂作用。与传统提取方法提取的药理研究对比，显示超临界提取物在脂体比、小鼠体重、Lee’s指数上三个方面有明显的差异，活性较强。
四、
[0011]实施例1:
[0012]I)将干燥后的52质量份的荷叶、12质量份的桑叶、21质量份的银杏叶和35质量份的菊叶粉碎并过24目筛得到粉料a，对粉料a进行超临界二氧化碳萃取得到提取液，于4°C冷藏10小时，抽滤，滤液回收乙醇后加等体积的石油醚和水，萃取4次，取水层减压浓缩并真空干燥，得到干浸膏；超临界二氧化碳萃取的工艺参数为:萃取时间120min，萃取温度45°C，C(V流量为16L/h，夹带剂为100mL的95vt%乙醇，分离压力为6MPa，分离温度为35°C。
[0013]2)将荷叶干燥并以超微粉碎机粉碎，过300目筛，得荷叶超微粉；
[0014]3)将20质量份的脱脂奶粉和20质量份的微晶纤维素置于研钵中研磨并混合均匀，过80目筛，得到粉料b;将10质量份的干浸膏粉碎并过80目筛得到浸膏粉；将所述浸膏粉与所述粉料b混合均匀，再加入5质量份的荷叶超微粉，混匀后得到混合料；向所述混合料中加入混合料体积13vt%的PVP制软材，过18目筛制粒得粒料；将所得粒料于65°C干燥至恒重，以18目筛整粒，整粒后加入粒料质量1%的微粉硅胶作为润滑剂，压片后即得四叶降脂咀嚼片。
[0015]实施例2:
[0016]1)将干燥后的52质量份的荷叶、12质量份的桑叶、21质量份的银杏叶和35质量份的菊叶粉碎并过24目筛得到粉料a，对粉料a进行超临界二氧化碳萃取得到提取液，于2°C冷藏8小时，抽滤，滤液回收乙醇后加等体积的石油醚和水，萃取5次，取水层减压浓缩并真空干燥，得到干浸膏；超临界二氧化碳萃取的工艺参数为:萃取时间130min，萃取温度50°C，C(V流量为17L/h，夹带剂为150ml的95vt%乙醇，分离压力为6MPa，分离温度为35°C。
[0017]2)将荷叶干燥并以超微粉碎机粉碎，过300目筛，得荷叶超微粉；
[0018]3)将25质量份的脱脂奶粉和25质量份的微晶纤维素置于研钵中研磨并混合均匀，过80目筛，得到粉料b;将15质量份的干浸膏粉碎并过80目筛得到浸膏粉；将所述浸膏粉与所述粉料b混合均匀，再加入6质量份的荷叶超微粉，混匀后得到混合料；向所述混合料中加入混合料体积14vt%的PVP制软材，过18目筛制粒得粒料；将所得粒料于65°C干燥至恒重，以18目筛整粒，整粒后加入粒料质量2%的微粉硅胶作为润滑剂，压片后即得四叶降脂咀嚼片。
[0019]实施例3:
[0020]I)将干燥后的52质量份的荷叶、12质量份的桑叶、21质量份的银杏叶和35质量份的菊叶粉碎并过24目筛得到粉料a，对粉料a进行超临界二氧化碳萃取得到提取液，于5°C冷藏12小时，抽滤，滤液回收乙醇后加等体积的石油醚和水，萃取4次，取水层减压浓缩并真空干燥，得到干浸膏；超临界二氧化碳萃取的工艺参数为:萃取时间140min，萃取温度550C，CO2流量为18L/h，夹带剂为200ml的95vt%乙醇，分离压力为6MPa，分离温度为35°C。
[0021]2)将荷叶干燥并以超微粉碎机粉碎，过300目筛，得荷叶超微粉；
[0022]3)将30质量份的脱脂奶粉和30质量份的微晶纤维素置于研钵中研磨并混合均匀，过80目筛，得到粉料b;将20质量份的干浸膏粉碎并过80目筛得到浸膏粉；将所述浸膏粉与所述粉料b混合均匀，再加入7质量份的荷叶超微粉，混匀后得到混合料；向所述混合料中加入混合料体积15vt%的PVP制软材，过18目筛制粒得粒料；将所得粒料于65°C干燥至恒重，以18目筛整粒，整粒后加入粒料质量3%的微粉硅胶作为润滑剂，压片后即得四叶降脂咀嚼片。
[0023]【药效试验】
[0024]I材料与方法
[0025]1.1材料与试剂
[0026]昆明种小鼠，雄性，6-8周龄，12_14g，安徽医科大学实验动物中心，合格证号:院医实动准字01号，为清洁普通动物。
[0027]银杏叶、桑叶、荷叶均采自合肥市蜀山植物园，菊叶由安徽滁菊开发有限公司提供，以上药材经安徽新华学院庆兆老师鉴定为银杏科植物银杏Ginkgo biloba L.的干燥叶、桑科植物桑Morus alba L.干燥叶、睡莲科植物莲Nelumbo mucifera Gaertn.干燥叶、源菊(Chrysanthemum morifolium Ramat.)的莖上叶。
[0028]基础词料，安徽中医学院实验动物中心；闻脂词料，本院自制(配方:基础词料70%，猪油10%，熟鸡蛋10%，奶粉10%)。
[0029]甘油三酯检测试剂盒(中生北控生物科技股份有限公司，批号100681)，总胆固醇检测试剂盒(中生北控生物科技股份有限公司，批号100491)，直接高密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒(中生北控生物科技股份有限公司，批号100381)，直接低密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒(中生北控生物科技股份有限公司，批号100661)。
[0030]1.2仪器与设备
[0031]UV-4802S型紫外-可见分光光度仪，尤尼柯(上海)仪器有限公司；日立7020全自动生化分析仪:日本日立公司；LDZ4-1.2型台式低速自动平衡离心机，北京京立离心机有限公司；FA2004型电子天平，上海民桥精密科学仪器有限公司。
[0032]1.3 方法
[0033]1.3.1受试样品制备
[0034]根据预实验结果，通过提取工艺正交试验优选，分别称取菊叶35g，桑叶12g，银杏叶21g，荷叶52g，共计120g。上述原料备相同的两份，分别粉碎过24目筛得到粗粉。
[0035]一份常规提取，提取工艺为:荷叶粗粉加入60倍体积的90vt%乙醇90°C下单独提取三次(2h，Ih,0.5h)，菊叶粗粉、桑叶粗粉和银杏叶粗粉混合并加入50倍体积的90vt%乙醇90°C下混合提取三次(2h，Ih,0.5h)，冷却至室温，抽滤后将滤液混合，滤液回收乙醇后加等体积的石油醚和水，萃取4-5次，取水层减压浓缩，真空干燥，得干浸膏，粉碎，分别加温水调成含20g生药/100mL和IOg生药/100mL的混悬液，得到四叶提取物高剂量组(以下简称“常高剂量组”)和四叶提取物低剂量组(以下简称“常低剂量组”)。
[0036]另一份将荷叶粗粉、菊叶粗粉、桑叶粗粉和银杏叶粗粉混合并进行超临界二氧化碳萃取，萃取时间140min，萃取温度55°C，C(V流量为18L/h，夹带剂95vt%乙醇为200ml，分离压力为6MPa，分离温度为35°C。萃取液经抽滤、萃取、减压浓缩、真空干燥后得干浸膏，粉碎，分别加温水调成含20g生药/100mL和IOg生药/100mL的混悬液，得到四叶提取物高剂量组(以下简称“超高剂量组”)和四叶提取物低剂量组(以下简称“超低剂量组”)。
[0037]1.3.2实验设计
[0038]选取60只雄性小白鼠，随机分为正常对照组、模型组、常高剂量组、常低剂量组、超高剂量组和超低剂量组。正常对照组和模型组每天早上8:00给予蒸馏水，常高剂量组、常低剂量组、超高剂量组和超低剂量组给予相应药物，每组10只小鼠，按0.lml/10g体重进行灌胃，每天给药I次，连续给药30d。正常对照组组给予基础饲料，其他各组给予营养饲料，实验期间小鼠自由饮水，每周称量体重一次，饲养环境为室温条件。
[0039]1.3.3实验指标
[0040]实验期间每周称取实验动物的体重、体长；实验结束剖腹取睾丸及肾周脂肪并称重，计算Lee’s指数，脂/体比；称肝重:将处死的小鼠解剖，取其新鲜肝脏置于电子天平称重，计算肝重/体重比例。小鼠断头取血，将血液离心分离血清后分别测定TC、TG、HDL-C、LDL-C的浓度。
[0041]1.3.4公式计算
[0042]`