一种bcg免疫抑制剂及其制备方法和用途制作方法

姜华, 席寅, 罗炜, 赖克方, 钟南山

2011年8月31日

2011年1月29日

2011年1月29日

广州医学院第一附属医院, 广州呼吸疾病研究所

A61K31/715GK102166220SQ20111003211

bcg 抑制剂 免疫

1.一种BCG免疫抑制剂，其特征在于该BCG免疫抑制剂包括以下按质量体积比计的组分卡介菌多糖267 μ g/ml和卡介菌核酸67 μ g/ml2.根据权利要求1所述的一种BCG免疫抑制剂，其特征在于所述BCG免疫抑制剂为滴鼻剂或注射剂3.根据权利要求1所述的一种BCG免疫抑制剂的制备方法，其特征在于包括以下操作步骤取BCG-PSA 110 μ 1和BCG-DNA 57 μ 1，加2. 833ml生理盐水，混合均勻，灭菌，得到 BCG免疫抑制剂4.根据权利要求1所述的一种BCG免疫抑制剂在制备治疗哮喘药物中的用途

本发明属于免疫抑制剂制备领域，特别涉及一种BCG免疫抑制剂及其制备方法和用途

下面结合实施例及附图对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此实施例1不同BCG组分对小鼠哮喘作用的对比实验一、材料和方法1、动物及分组实验动物SPF级Balb/c小鼠，雌性，5_6w龄，体重18_20g，广东省实验动物中心提供分为6组，即正常组(NS对照组)、哮喘组、BCG-PSA组、BCG-DNA组、BCG-PSN组、 nBCG-PSN组，每组干预总剂量为20 μ g，干预体积为200 μ 1，均为首次致敏前7d腹腔注射干预每组10只小鼠2、试剂BCG-PSA (购于湖南九芝堂公司)含卡介菌多糖2143. 5 μ g/ml，纯度为质量百分浓度97%BCG-DNA (购于湖南九芝堂公司)含卡介菌核酸926. 25 μ g/ml，纯度为质量百分浓度92%BCG-PSN (斯奇康)由质量百分浓度88. 4%的BCG-PSA和质量百分浓度11. 6%的 BCG-DNA组成，其中含有卡介菌多糖350 μ g/ml和卡介菌核酸44. 9 μ g/mlnBCG-PSN 由质量百分浓度80 %的BCG-PSA和质量百分浓度20 %的BCG-DNA组成，其中含有卡介菌多糖80 μ g/ml和卡介菌核酸20 μ g/ml3、模型制备在实验第 0、7 和 14d 腹腔注射(20 μ g0VA+150 μ IAl (OH) 3+50 μ INS) 混悬液致敏，在实验流程第观、四和30d给予滴鼻激发，每次给予100 Ug OVA (质量百分比浓度0. 2%，50 μ 1/只小鼠)混悬液，激发前用质量百分比浓度为的戊巴比妥钠50mg/ kg腹腔麻醉，将50 μ 1激发液经鼻滴入，利用小鼠自然呼吸将液滴吸入气道，滴完后转动小鼠体位数次以促进激发液在肺内均勻分布正常组在各个时间点给予相应剂量的NS4、气道反应性的检测各组在末次激发后48h，用美国Buxco公司的有创气道阻力与肺顺应性检测系统(RC system)检测小鼠的肺阻力(lung resistance, Rj，测定10 μ 1倍增浓度的乙酰甲胆碱(Mch)雾化激发后&的变化，激发浓度由低到高，依次为NS、3. 125、 6. 25、12. 5、25和50 (mg/ml)，记录各浓度Mch激发下的&平均值将每个Mch激发浓度下的&值转换为与NS激发时的&值的百分比(某浓度Mch激发的&值/生理盐水激发的 &值X100% )，以IVNS^表示，作为小鼠气道反应性的评价指标5、统计学处理所有数据用均数士标准差表示，各组间比较采用SpSS13. 0进行单因素方差分析，方差齐用最小显著差异法(LSD)，当方差不齐时用Tamhane’sT2法或采用秩和检验，P < 0. 05表示差异有统计学意义在造模过程中死亡及感染的动物不列入统计二、结果BCG各干预组对哮喘小鼠气道阻力(l/NS^i )的影响哮喘组在3. 12 50mg/ml 气道反应性均低于正常组，BCG-PSA组在3. 12 12. 5mg/ml均低于哮喘组，并且在3. 12mg/ ml与正常组无明显差异BCG-DNA组在3. 12 50mg/ml均低于哮喘组，并在3. 12，25 50mg/ml时与正常组无差异，BCG-PSN组在3. 12 12. 5mg/ml明显低于哮喘组，nBCG-PSN组在3. 12 50mg/ml均低于哮喘组，且各个浓度均与正常组无明显差异，并且在6. 25，25 50mg/ml明显低于BCG-PSA组，在6. 25 50mg/ml显著低于BCG-PSN组，在6. 25mg/ml显著低于BCG-DNA组(见图1)BCG各干预组对哮喘小鼠BALF中Eos %的影响正常组(0. 19% 士 0.03%)、 BCG-DNA 组(37.01% 士 5. 76% )、BCG_PSN 组(36. 29% 士 10. 05% )、nBCG_PSN 组(36. 38% 士8. 41% )均明显低于哮喘组 07.61% 士6. 91% ) (P < 0.01), BCG-PSA 组 01.41% ±7.81% )与哮喘组相比P < 0.05(见图2)实施例2本发明新比例BCG制剂不同给药方式对小鼠哮喘作用的对比实验一、材料和方法1、试剂取 BCG-PSA 110 μ 1 禾口 BCG-DNA 57 μ 1，力口 2. 833ml 生理盐水，混合均勻，灭菌，得到卡介菌多糖质量体积比浓度为267μ g/ml和卡介菌核酸质量体积比浓度为 67 μ g/mlBCG的免疫抑制剂按照给药剂量为20 μ g，即体积为60 μ 1的剂量给药2、实验分组包括腹腔注射组，清醒滴鼻组，口服灌胃组，肌肉注射组，麻醉滴鼻组3、动物造模、检测指标及检测方法、统计学处理同实施例1二、结果1、气道反应性结果如图3所示，麻醉滴鼻、肌肉注射均可显著降低气道高反应性，麻醉滴鼻更为显著2、气道炎症结果如图4所示，麻醉滴鼻、肌肉注射均可显著降低气道炎症上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其它的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化， 均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内