包含皂甙和免疫刺激寡核苷酸的佐剂组合物制作方法

M·弗里德, N·加康, P·赫尔曼德

2002年10月2日

2000年4月4日

1999年4月19日

史密丝克莱恩比彻姆生物有限公司

A61P37/00GK1372473SQ00808836

免疫刺激 寡核苷酸 佐剂 皂甙 包含

1.一种佐剂组合物，该组合物包含皂甙和免疫刺激寡核苷酸2.权利要求1的佐剂组合物，它还包含载体3.权利要求1或2要求保护的佐剂组合物，其中所述皂甙选自Quil A或纯化皂甙如QS21、QS7、QS17；β-七叶素或洋地黄皂甙4.权利要求1-3任一项要求保护的佐剂组合物，其中所述免疫刺激寡核苷酸包含嘌呤、嘌呤、C、G、嘧啶、嘧啶序列5.权利要求1-4要求保护的佐剂组合物，其中所述免疫刺激寡核苷酸选自TCC ATG ACG TTC CTG ACG TT(SEQ ID NO1)；TCTCCC AGC GTG CGC CAT(SEQ ID NO2)；ACC GAT GAC GTC GCCGGT GAC GGC ACC ACG(SEQ ID NO3)；TCG TCG TTT TGT CGTTTT GTC GTT(SEQ ID NO4)；TCC ATG ACG TTC CTG ATG CT(SEQ ID NO5)6.权利要求1-4的佐剂组合物，其中所述免疫刺激寡核苷酸包含被至少3个核苷酸分隔开的至少2个未甲基化CG重复基元7.权利要求6的佐剂组合物，其中所述免疫刺激寡核苷酸包含被6个核苷酸分隔开的至少2个未甲基化CG重复基元8.权利要求2-7任一项要求保护的佐剂组合物，其中所述载体为颗粒性载体，该颗粒性载体选自矿物盐、乳液、聚合物、脂质体、ISCOM9.一种包含权利要求1-8任一项要求保护的佐剂组合物的疫苗组合物，它还包含抗原10.权利要求9要求保护的疫苗组合物，其中所述抗原从生物获得，所述生物选自人类免疫缺陷病毒、水痘带状疱疹病毒、1型单纯疱疹病毒、2型单纯疱疹病毒、人类巨细胞病毒、登革热病毒、甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒或戊型肝炎病毒、呼吸道合胞病毒、人乳头瘤病毒、流感病毒、Hib、脑膜炎病毒、沙门氏菌属(Salmonella)、奈瑟氏菌属(Neisseria)、疏螺旋体属(Borrelia)、衣原体(Chlamydia)、博德特氏菌属(Bordetella)、链球菌属(Streptococcus)、支原体属(Mycoplasma)、分枝杆菌属(Mycobacteria)、嗜血杆菌属(Haemophilus)、疟原虫属(Plasmodium)或弓浆虫属(Toxoplasma)、stanworth十肽；或肿瘤相关抗原(TAA)、MAGE、BAGE、GAGE、MUC-1、Her-2 neu、CEA、PSA、KSA或PRAME；或自身肽激素GnRH11.权利要求9要求保护的疫苗组合物，其中所述抗原得自(a)肿瘤相关抗原PSMA、PSCA、酪氨酸酶、survivin、NY-ESO1、prostase、PS108、RAGE、LAGE、HAGE；(b)或淀粉样前体蛋白的N末端39-43个氨基酸片段(Aβ)；(c)或动脉硬化相关抗原12.权利要求9-11要求保护的疫苗组合物，其中所述疫苗通过系统途径给予13.权利要求9-11要求保护的疫苗组合物，其中所述疫苗通过粘膜给予14.权利要求13要求保护的疫苗组合物，其中所述佐剂组合物中的皂甙是溶血性皂甙15.一种预填充权利要求9-11的疫苗的传递装置，该装置设计用于通过系统途径给予所述疫苗16.一种诱导个体免疫反应的方法，该方法包括系统给予安全有效量的权利要求9-11要求保护的疫苗组合物17.一种治疗疾病易感个体或患病个体的方法，该治疗方法给予个体有效量的权利要求9-14任一项要求保护的疫苗18.权利要求17要求保护的治疗方法，其中所述疫苗的给予是通过系统途径给予19.一种治疗疾病患病个体的方法，该方法包括给予权利要求9-11任一项要求保护的疫苗，其中所述疾病选自前列腺癌、乳腺癌、结肠直肠癌、肺癌、胰腺癌、肾癌、卵巢癌或黑素瘤；非癌性慢性疾病、变态反应、阿尔茨海默氏病、动脉硬化20.一种防止个体罹患疾病的方法，该方法包括给予权利要求9-11任一项要求保护的疫苗，其中所述疾病选自前列腺癌、乳腺癌、结肠直肠癌、肺癌、胰腺癌、肾癌、卵巢癌或黑素瘤；非癌性慢性疾病、变态反应、阿尔茨海默氏病、动脉硬化21.权利要求19和20要求保护的治疗方法，其中所述疫苗通过系统途径给予22.权利要求9或11要求保护的疫苗，它用作药物23.皂甙和CpG分子组合用于生产疫苗的用途，所述疫苗用于预防和治疗病毒感染、细菌感染、寄生虫感染、变态反应、癌症或其它慢性病症24.皂甙、免疫刺激寡核苷酸和载体组合用于生产疫苗的用途，所述疫苗用于预防和治疗病毒感染、细菌感染、寄生虫感染、变态反应、癌症或其它慢性病症25.一种诱导哺乳动物系统性抗原特异性免疫反应的方法，该方法包括将包含抗原和溶血性皂甙以及CpG分子的组合物给予到所述哺乳动物的粘膜表面上26.一种制备佐剂组合物的方法，该方法包括混合皂甙与免疫刺激寡核苷酸27.一种制备佐剂组合物的方法，该方法包括混合皂甙、免疫刺激寡核苷酸和载体28.一种制备疫苗的方法，该方法包括混合下列组分(a)皂甙，(b)免疫刺激寡核苷酸，以及(c)抗原29.一种制备疫苗的方法，该方法包括混合下列组分(a)皂甙，(b)免疫刺激寡核苷酸，(c)载体以及(d)抗原

本发明涉及用于疫苗的新型佐剂组合物具体来说，本发明佐剂组合物包含组合的皂甙和免疫刺激寡核苷酸，所述组合还任选包含载体本发明还提供包含本发明佐剂组合物和至少一种抗原的疫苗还提供生产本发明佐剂组合物和疫苗的方法及其用作药物的用途此外，本发明提供通过胃肠外或粘膜给予本发明疫苗治疗疾病易感个体或患病个体的方法本领域已知含未甲基化的CpG二核苷酸(“CpG”)的免疫刺激寡核苷酸当通过系统和粘膜途径给予时用作佐剂(WO 96/02555，EP468520，Davis等，J.Immunol，1998，160(2)870-876；McCluskie和Davis，J.Immunol.，1998，161(9)4463-6)CpG是DNA中存在的胞嘧啶-鸟苷二核苷酸基元的缩写从前观测到BCG的DNA部分能够发挥抗肿瘤作用在进一步的研究中，证实得自BCG基因序列的合成寡核苷酸能够诱导免疫刺激作用(在体外和体内)这些研究的作者的结论是某些回文序列，包括中央的CG基元，具有这种免疫刺激活性后来，Krieg在Nature 374，p546 1995中发表文章阐明了CG基元在免疫刺激中的主要作用详细的分析证实，CG基元必须处于一定的序列环境中，而且这种序列是细菌DNA中的常见序列，但是在脊椎动物DNA中非常罕见免疫刺激序列通常为嘌呤、嘌呤、C、G、嘧啶、嘧啶；其中所述二核苷酸CG基元是未甲基化CG基元，但是已知其它未甲基化CpG序列是免疫刺激序列而且可用于本发明在所述6个核苷酸的某些组合中存在回文序列在同一个寡核苷酸中可存在若干个这种基元，或者为重复的一个基元或组合的不同基元含一个或多个这样的免疫刺激序列的寡核苷酸可激活不同免疫亚组细胞，包括天然杀伤细胞(它产生γ干扰素而且具有裂解细胞活性)和巨噬细胞(Wooldrige等，第89卷(第8期)，1977)尽管目前证实不具有该共有序列的含其它未甲基化CpG的序列是免疫调节序列当CpG配制成疫苗时，一般以自由溶液和自由抗原一起(WO96/02555；McCluskie和Davis，同上)或者与抗原共价结合(PCT公布号WO 98/16247)或者用载体如氢氧化铝配制后((肝炎表面抗原)Davis等，同上；Brazolot-Millan等，Proc.Natl.Acad.Sci.，USA，1998，95(26)，15553-8)给予在Lacaille-Dubois，M和Wagner H(1996，关于皂甙的生物和药理活性的综述Phytomedicine第2卷第363-386页)中介绍了皂甙皂甙是广泛分布于植物和海洋动物的类固醇糖苷或三萜烯糖苷皂甙因为形成胶体水溶液以及沉淀胆固醇而引起人们的注意，所述胶体水溶液振荡时形成泡沫当皂甙接近细胞膜时，它们在膜上形成孔样结构，引起细胞膜破裂红细胞溶血就是这种现象的一个实例，它是某些皂甙但是不是所有皂甙的一个特性已知皂甙用作系统给予疫苗的佐剂本领域深入研究了各种皂甙的佐剂活性和溶血活性(Lacaille-Dubois和Wagner，同上)例如US5,057,540和“皂甙用作疫苗佐剂”，Kensil，C.R.，Crit Rev Ther DrugCarrier Syst，1996，12(1-2)1-55和EP 0 362 279 B1介绍了Quil A(从南美洲的树Quillaja Saponaria Molina树皮分离制得)及其部分包含QuilA部分的颗粒结构称为免疫刺激复合物(ISCOMS)，它具有溶血活性，而且已经将其用于生产疫苗(Morein，B.，EP 0 109 942 B1)据报道这些结构具有佐剂活性(EP 0 109 942 B1；WO 96/11711)溶血性皂甙QS21和QS17(HPLC纯化的Quil A部分)被描述为有效系统佐剂，美国专利号5,057,540和EP 0 362 279 B1公开了其生产方法这两种参考文献还介绍了用作系统疫苗有效佐剂的QS7(Quil-A的非溶血性部分)的作用Kensil等(1991，J.Immunology第146卷，431-437)还介绍了QS21的作用QS21和聚山梨酯或环糊精的组合是已知的(WO 99/10008)WO 96/33739和WO 96/11711介绍了包含部分QuilA如QS21和QS7的颗粒性佐剂系统用于系统免疫接种研究的其它皂甙包括得自其它植物种如丝石竹属(Gypsophila)和肥皂草属(Saponaria)的皂甙(Bomford等，Vaccine，10(9)572-577，1992)此外，已知皂甙用于粘膜用疫苗研究，它在诱导免疫反应方面获得了不同程度的成功以前证实，当鼻内给予抗原时，Quil-A皂甙对诱导免疫反应没有作用(Gizurarson等1994，Vaccine Research 3，23-29)而部分其他作者应用这种佐剂获得了成功(Maharaj等，Can.JMicrobiol，1986，32(5)414-20；Chavali和Campbell，Immunobiology，174(3)347-59)在胃肠道和鼻内疫苗制剂中使用了包含Quil A皂甙的ISCOM，显示它具有佐剂活性(McI Mowat等，1991，Immunology，72，317-322；McI Mowat和Donachie，Immunology Today，12，383-385)QS21为Quil A的无毒性部分，还介绍它用作口服或鼻内给药的佐剂(Sumino等，J.Virol.，1998，72(6)4931-9；WO 98/56415)已有关于其它皂甙在鼻内免疫接种研究中应用的介绍例如昆诺藜(Chenopodium quinoa)皂甙既用于鼻内疫苗，又用于胃肠道疫苗(Estrada等，Comp.Immunol.Microbiol.Infect.Dis.，1998，21(3)225-36)本发明涉及令人惊奇的发现，即免疫刺激寡核苷酸(CpG)和皂甙组合是极其有效的佐剂因此，本发明提供包含组合的皂甙和免疫刺激寡核苷酸的佐剂组合物最好是本发明的佐剂还包含载体在一个优选形式的本发明中，所述佐剂和疫苗组合物中的皂甙和寡核苷酸在诱导抗原特异性抗体中协同作用，而且强力诱导通常与Th1型免疫系统有关的免疫反应因此，所述佐剂组合不仅适用于免疫预防疾病，而且令人惊奇地免疫治疗疾病，例如持续病毒、细菌或寄生虫感染，此外还适用于慢性病症如癌症用于本发明佐剂或疫苗的优选寡核苷酸优选包含2个或2个以上二核苷酸CpG基元，这些基元被至少3个、更优选至少6个或更多核苷酸间隔开本发明寡核苷酸通常为脱氧核苷酸在一个优选实施方案中，所述寡核苷酸中的内部核苷酸为二硫代磷酸酯、或更优选为硫代磷酸酯键，尽管磷酸二酯和其它内部核苷酸键属于本发明范畴，包括具有混合内部核苷酸键的寡核苷酸US5,666,153、US5,278,302和WO95/26204介绍了生产硫代磷酸寡核苷酸或二硫代磷酸酯的方法优选寡核苷酸实例具有以下序列所述序列优选包含硫代磷酸酯修饰的内部核苷酸键OLIGO 1(SEQ ID NO1)TCC ATG ACG TTC CTG ACG TT(CpG1826)OLIGO 2(SEQ ID NO2)TCT CCC AGC GTG CGC CAT(CpG 1758)OLIGO 3(SEQ ID NO3)ACC GAT GAC GTC GCC GGT GAC GGCACCACGOLIGO 4(SEQ ID NO4)TCG TCG TTT TGT CGT TTT GTCGTT(CpG 2006)OLIGO 5(SEQ ID NO5)TCC ATG ACG TTC CTG ATG CT(CpG1668)替代CpG寡核苷酸可包含以上优选序列，因为其中含有不重要的缺失或添加可用本领域已知的任何方法(例如EP 468520)合成用于本发明的CpG寡核苷酸通常可应用自动合成仪合成这样的寡核苷酸用于本发明的寡核苷酸通常为脱氧核苷酸在一个优选实施方案中，所述寡核苷酸中的内部核苷酸键是二硫代磷酸键、或更优选硫代磷酸键，尽管磷酸二酯键属于本发明范畴设计了包含不同内部核苷酸键的寡核苷酸，例如混合的硫代磷酸酯磷酸二酯可使用稳定所述寡核苷酸的其它内部核苷酸键可用于本发明佐剂组合的皂甙包括得自皂树(Quillaja SaponariaMolina)树皮的称为Quil A的皂甙及其部分，它们介绍于US 5,057,540和“用作疫苗佐剂的皂甙”，Kensil，C.R.，Crit Rev Ther Drug CarrierSyst，1996，12(1-2)1-55和EP 0 362 279 B1中特别优选的Quil A部分为QS21、QS7和QS17β-七叶素是另一种用于本发明佐剂组合物的优选溶血性皂甙默克索引(Merck index)(第12版，条目3737)介绍的七叶素为欧洲七叶树(Aesculus hippocastanum)种子中天然存在的皂甙混合物据介绍，其分离方法为层析法(Fiedler，Arzneimittel-Forsch，4，213(1953))，其纯化方法为离子交换树脂层析(Erbring等，US 3,238,190)纯化获得了七叶素α和七叶素β部分，而且证实它们具有生物活性(Yoshikawa M，等(Chem Pharm Bull(Tokyo)1996年8月；44(8)1454-1464))β-七叶素也称为七叶素用于本发明的另一种优选溶血性皂甙为洋地黄皂甙默克索引(第12版，条目3204)将洋地黄皂甙描述为皂甙，洋地黄皂甙得自紫花洋地黄(Digitalis purpurea)的种子，而且按照Gisvold等，J.Am.Pharm.Assoc.，1934，23，664和Ruhenstroth-Bauer，Physiol.Chem.，1955，301，621介绍的方法纯化据介绍，其用途为临床胆固醇测定试剂本发明的佐剂组合还可包含载体，使得皂甙或CpG或二者可与颗粒载体结合，增强所述组合的佐剂活性例如特别优选的系统疫苗包含载体分子用于本发明佐剂组合的CpG可为自由溶液或者可以复合在颗粒载体上，例如矿物盐(例如但不限于铝盐或钙盐)、脂质体、ISCOM、乳液(水包油、油包水、水包油包水)、聚合物(例如但不限于聚乳酸、聚乙醇酸、聚磷腈(polyphosphazine)、聚氨基酸、藻酸盐、壳聚糖)或微型颗粒所述载体优选为阳离子载体本发明疫苗还包含可与CpG-载体复合物结合的抗原、或者不能与CpG-载体复合物结合的抗原在这种情况下，所述抗原可以为自由悬浮液或可与另外的载体结合的抗原构成本发明组成部分的皂甙可以为独立的微胶粒，或者当用胆固醇和脂质配制时它可以为大的有序结构，例如ISCOM(EP 0 109 942 B1)或脂质体(WO 96/33739)，或者它为水包油乳液(WO 95/17210)皂甙优选与金属盐结合，例如氢氧化铝或磷酸铝(WO 98/15287)另一方面，皂甙可与颗粒载体如壳聚糖结合皂甙也可以为固态如粉末当最终制剂给予到疫苗接受者的粘膜表面时，最好是它为天然溶血性制剂皂甙可以与抗原通过直接键合或共同作用于同一颗粒载体分子而物理性结合，或者皂甙可以不与抗原结合(GB 9822712.7；WO98/16247)本发明佐剂或疫苗中的CpG和皂甙本身可以是独立的制品，或者它们结合在一起例如CpG和皂甙可以为自由悬浮液，或者可以通过载体结合在一起，更优选通过颗粒载体如氢氧化铝或阳离子脂质体或ISCOM结合在一起本发明的优选佐剂组合由在2个相邻CG基元之间含有至少3个、优选至少6个核苷酸的1个或多个CpG寡核苷酸和QS21以及颗粒载体组成，所述颗粒载体选自水包油乳液或DQ最优选佐剂组合包含与QS21混合的CpG 2006(SEQ ID NO4)或CpG 1758(SEQ ID NO2)或CpG 1826(SEQ ID NO1)以及选自水包油乳液或DQ的颗粒载体因此，特别优选的疫苗例如包括这样的佐剂组合和抗原本发明的优选疫苗用于通过系统途径给予个体后产生系统免疫反应本发明的佐剂组合既可以用作系统佐剂，也可以用作粘膜佐剂在本发明的一个具体形式中，提供通过系统途径或胃肠外途径给予的系统疫苗，所述途径例如肌肉、皮内、透皮、皮下、腹膜内或静脉内给予给予疫苗的优选途径是通过透皮途径，例如皮肤贴片本发明的系统疫苗制剂可用来通过肌肉、腹膜内、皮内、透皮、静脉内或皮下给予所述疫苗的方法而保护或治疗疾病易感哺乳动物或患病哺乳动物系统给予疫苗制剂的方法包括常规注射器和针头、或设计用于冲击性给予固体疫苗的装置(WO 99/27961)、或无针压力式液体喷射装置(US 4,596,556；US 5,993,412)、或透皮贴片(WO 97/48440；WO 98/28037)本发明还可用来增强用于皮肤的抗原的免疫原性(透皮或经皮给药WO 98/20734；WO 98/28037)因此，本发明提供预装有本发明疫苗或佐剂组合物的系统给予传递装置因此提供对个体诱导免疫反应的方法，该方法包括给予所述个体包含抗原和免疫刺激寡核苷酸、皂甙和载体的疫苗，其中所述疫苗通过胃肠外途径或系统途径给予诱导免疫反应的优选方法包括给予这样的疫苗它包含SEQ IDNO1、2、3、4或5中一种寡核苷酸和得自Quil A的皂甙如QS21以及载体，例如水包油乳液、含胆固醇的脂质体或明矾另一方面，本发明疫苗制剂可用来通过粘膜途径如口腔/消化道途径或鼻途径给予所述疫苗的方法保护或治疗疾病易感哺乳动物或患病哺乳动物可选择的粘膜途径有阴道内或直肠内途径优选的粘膜给药途径是通过鼻途径，称为鼻内免疫接种鼻内免疫接种的方法是本领域周知的，包括将所述疫苗滴鼻剂、喷雾剂或干粉剂给予到需要免疫个体的鼻咽部雾化疫苗制剂也构成本发明的一部分肠制剂如口服给予的胃耐受胶囊剂和颗粒剂、直肠或阴道给予的栓剂也构成本发明的一部分本发明的佐剂组合为一类通过粘膜免疫接种代替系统免疫接种的适用于人类的粘膜佐剂在一个优选形式的本发明中，纯皂甙与免疫刺激寡核苷酸的组合用作粘膜给予抗原的佐剂，以实现系统免疫反应，所述皂甙例如为Quil A或其衍生物，包括QS21、七叶素、洋地黄皂甙或满天星皂甙或昆诺藜(Chenopodium quinoa)皂甙本发明的佐剂组合可用于配制通过系统途径或粘膜途径给予的疫苗当疫苗用于粘膜给予时，所述佐剂组合优选包含溶血性皂甙对于粘膜给予而言，本发明组合物最好包含溶血性皂甙参照以下测定方法测定本发明目的的溶血性皂甙或皂甙制剂1.用磷酸缓冲盐水(PBS)以台式离心机洗涤豚鼠新鲜血液3次重悬浮至原体积后，再用PBS将血液稀释10倍2.在800μl含2倍稀释的表面活性剂或皂甙的PBS中加入50μl该血液悬浮液3. 8小时后肉眼或通过检测上清液光密度评价溶血存在于570nm吸收光的红色上清液说明存在溶血4.结果以不再出现溶血的第一个皂甙稀释液的浓度表示对于本发明目的，如果皂甙佐剂制剂溶解红细胞的浓度为0.1％以下时，则认为它是溶血性的按照此参考标准，根据该测定方法定义，大致纯Quil A、QS21、QS7、洋地黄皂甙和β-七叶素样品均为溶血性皂甙在这种生物测定的固有实验变异内，本发明皂甙的溶血活性优选为约0.5-0.00001％、更优选0.05-0.00001％、甚至更优选0.005-0.00001％、最优选0.001-0.0004％理想的是，所述皂甙的溶血活性与QS21的溶血活性相似(即在10倍差异范围内)本发明疫苗也可以通过口服途径给予在这种情况下，药学上可接受的赋形剂也可以包括碱性缓冲剂或肠溶胶囊或微型颗粒本发明疫苗也可以通过阴道途径给予在这种情况下，药学上可接受的赋形剂也可以包括乳化剂、聚合物如CARBOPOL?以及阴道乳膏和栓剂的其它已知稳定剂本发明疫苗也可以通过直肠途径给予在这种情况下，所述赋形剂也可以包括用于制备直肠栓剂的本领域已知的蜡和聚合物在本发明的佐剂组合中1种以上的皂甙的制剂也构成本发明的一部分例如至少2种以下皂甙的组合，所述皂甙包括QS21、QS7、Quil A、β-七叶素或洋地黄皂甙另外，本发明组合物可包含1种以上的免疫刺激寡核苷酸的组合在本发明的一个类似实施方案中，用于系统给予和粘膜给予的CpG/皂甙组合还可以与其它佐剂组合，所述其它佐剂包括单磷酰脂质A及其无毒衍生物3-脱氧酰化单磷酰脂质A另一方面，皂甙制剂可与以下物质组合壳聚糖或其它聚阳离子聚合物组成的疫苗载体、聚交酯和聚交酯-共-乙交酯颗粒、聚-N-乙酰葡糖胺基聚合物基质、多糖或化学修饰多糖组成的颗粒、脂质体和脂质基颗粒、甘油一酯组成的颗粒等也可以在存在胆固醇情况下配制皂甙成颗粒结构，例如脂质体或ISCOM此外，皂甙可与聚氧乙烯醚或聚氧乙烯酯配制为非颗粒性溶液或悬浮液，或者配制为颗粒结构，例如薄层(paucilamelar)脂质体或ISCOM皂甙也可以用诸如CarbopolR的赋形剂配制，以提高粘度，或者可以用粉型赋形剂如乳糖配制成干粉3脱氧酰化单磷酰脂质A是众所周知的佐剂，由RibiImmunochem(Montana)生产可用GB 2122204B介绍的方法制备3脱氧酰化单磷酰脂质A3脱氧酰化单磷酰脂质A的优选形式为直径小于0.2μm的小颗粒乳液(EP 0 689 454 B1)特别优选的佐剂为3D-MPL和QS21的组合(EP 0 671 948B1)、包含3D-MPL和QS21的水包油乳液(WO 95/17210，WO 98/56414)或用其他载体配制的3D-MPL(EP 0689 454 B1)本发明的疫苗制剂最好包含能够引发对抗人类病原体的免疫反应的抗原或抗原组合物，所述抗原或抗原组合物得自HIV-1(如tat、nef、gp120或gp160)、人类疱疹病毒(如gD或其衍生物或立即早期蛋白如HSV1或HSV2的ICP27)、巨细胞病毒((特别是人类)(如gB或其衍生物))、轮状病毒(包括活减毒病毒)、埃-巴二氏病毒(如gp350或其衍生物)、水痘-带状疱疹病毒(如gp I、II和IE63)，或者所述抗原或抗原组合物来自肝炎病毒如乙型肝炎病毒(例如乙型肝炎表面抗原或其衍生物)、甲型肝炎病毒、丙型肝炎病毒和戊型肝炎病毒，或者所述抗原或抗原组合物来自其它病毒性病原体，如副粘病毒呼吸道合胞病毒(如F蛋白和G蛋白及其衍生物)、副流感病毒、麻疹病毒、腮腺炎病毒、人乳头瘤病毒(例如HPV6、11、16和18等)、黄病毒(如黄热病毒、登革热病毒、蜱传脑炎病毒、日本脑炎病毒)或流感病毒(以卵或MDCK细胞培养的完整活病毒或灭活病毒、分裂的流感病毒，或完整的流感病毒体(如R.Gluck，Vaccine，1992，10，915-920介绍)或其纯化或重组蛋白，例如HA、NP、NA或M蛋白或其各种组合)，或者所述抗原或抗原组合物来自细菌病原体，如奈瑟氏菌属菌(Neisseriaspp)，包括淋病奈瑟氏菌(N.gonorrhea)和脑膜炎奈瑟氏菌(N.meningitidis)(例如荚膜多糖及其偶联物、运铁蛋白结合蛋白、乳铁蛋白结合蛋白、PilC、粘附素)；酿脓链球菌(S.pyogenes)(例如M蛋白或其片段、C5A蛋白酶、脂磷壁质)、无乳链球菌(S.agalactiae)、变异链球菌(S.mutans)；杜氏嗜血菌(H.ducreyi)；莫拉氏菌属菌(Moraxellaspp.)，包括粘膜炎莫拉氏菌(M.catarrhalis)，也称为卡他布兰汉民菌(Branhamella catarrhalis)(例如高分子量粘附素和低分子量粘附素及侵染素)；博德特氏菌属菌(Bordetella spp.)，包括百日咳博德特氏菌(B.pertussis)(例如pertactin、百日咳毒素或其衍生物、丝状血凝素、腺苷酸环化酶、菌毛)、副百日咳博德特氏菌(B.parapertussis)和支气管炎博德特氏菌(B.bronchiseptica)；分枝杆菌属菌(Mycobacterium spp.)，包括结核分枝杆菌(M.tuberculosis)(例如ESAT6、85A抗原、85-B抗原或85-C抗原)、牛分枝杆菌(M.bovis)、麻风分枝杆菌(M.leprae)、鸟分枝杆菌(M.avium)、副结核分枝杆菌(M.paratuberculosis)、耻垢分枝杆菌(M.smegmatis)；军团菌属菌(Legionella spp.)，包括嗜肺军团菌(L.pneumophila)；埃希氏菌属菌(Escherichia spp.)，包括肠毒性大肠杆菌(E.coli)(例如定居因子、热不稳定毒素或其衍生物、热稳定毒素或其衍生物)、肠出血性大肠杆菌、肠致病性大肠杆菌(例如志贺毒素样毒素或其衍生物)；弧菌属菌(Vibrio spp.)，包括霍乱弧菌(V.cholera)(例如霍乱毒素或其衍生物)；志贺氏菌属菌(Shigella spp.)，包括宋内氏志贺氏菌(S.sonnei)、痢疾志贺氏菌(S.dysenteriae)、弗氏志贺氏菌(S.flexnerii)；耶尔森氏菌属菌(Yersinia spp.)，包括小肠结膜炎耶尔森氏菌(Y.enterocolitica)(例如Yop蛋白)、鼠疫耶尔森氏菌(Y.pestis)、假结核耶尔森氏菌(Y.pseudotuberculosis)；弯曲杆菌属菌(Campylobacterspp.)，包括空肠弯曲杆菌(C.jejuni)(例如毒素、粘附素和侵袭素)和大肠弯曲杆菌(C.coli)；沙门氏菌属菌(Salmonella spp.)，包括伤寒沙门氏菌(S.typhi)、副伤寒沙门氏菌、猪霍乱沙门氏菌(S.choleraesuis)、肠炎沙门氏菌(S.enteritidis)；李斯特氏菌属菌(Listeria spp.)，包括单核细胞增生李斯特氏菌(L.monocytogenes)；螺旋杆菌属菌(Helicobacterspp.)，包括幽门螺旋杆菌(H.pylori)(例如脲酶、过氧化氢酶、空泡毒素(vacuolating toxin))；假单胞菌属菌(Pseudomonas spp.)，包括铜绿假单胞菌(P.aeruginosa)；葡萄球菌属菌(Staphylococcus spp.)，包括金黄色葡萄球菌(S.aureus)、表皮葡萄球菌(S.epidermidis)；肠球菌属菌(Enterococcus spp.)，包括粪肠球菌(E.faecalis)、屎肠球菌(E.faecium)；梭菌属菌(Clostridium spp.)，包括破伤风梭菌(C.tetani)(例如破伤风毒素及其衍生物)、肉毒梭菌(C.botulinum)(例如肉毒杆菌毒素及其衍生物)、艰难梭菌(C.difficile)(例如梭菌毒素A或梭菌毒素B及它们的衍生物)；芽孢杆菌属菌(Bacillus spp.)，包括炭疽芽孢杆菌(B.anthracis)(例如肉毒杆菌毒素及其衍生物)；棒杆菌属菌(Corynebacterium spp.)，包括白喉棒杆菌(C.diphtheriae)(例如白喉毒素及其衍生物)；疏螺旋体属菌(Borrelia spp.)，包括布氏疏螺旋体(B.burgdorferi)(例如OspA、OspC、DbpA、DbpB)、嘎氏疏螺旋体(B.garinii)(例如OspA、OspC、DbpA、DbpB)、阿氏疏螺旋体(B.afzelii)(例如OspA、OspC、DbpA、DbpB)、B.andersonii(例如OspA、OspC、DbpA、DbpB)、赫氏蜱疏螺旋体(B.hermsii)；埃里希氏体属菌(Ehrlichia spp)，包括马埃里希氏体(E.equi)和人粒细胞增多埃里希病的病原体；立克次氏体属菌(Rickettsia spp.)，包括立氏立克次氏体(R.rickettsii)；衣原体属菌(Chlamydia spp.)，包括沙眼衣原体(C.trachomatis)(例如MOMP、肝素结合蛋白)、肺炎衣原体(C.pneumoniae)(例如MOMP、肝素结合蛋白)、鹦鹉热衣原体(C.psittaci)；钩端螺旋体属菌(Leptospira spp.)，包括问号钩端螺旋体(L.interrogans)；密螺旋体属菌(Treponema spp.)，包括苍白密螺旋体(T.pallidum)(例如稀有外膜蛋白)、齿垢密螺旋体(T.denticola)、猪痢疾密螺旋体(T.hyodysenteriae)；或所述抗原或抗原组合物得自寄生虫，例如疟原虫属寄生虫(Plasmodium spp.)，包括恶性疟原虫；弓浆虫属寄生虫(Toxoplasma spp.)，包括鼠弓浆虫(T.gondii)(例如SAG2、SAG3、Tg34)；内阿米巴属寄生虫(Entamoeba spp.)，包括痢疾内变形虫(E.histolytica)；巴贝虫属寄生虫(Babesia spp.)，包括田鼠巴贝虫(B.microti)；锥虫属寄生虫(Trypanosoma spp.)，包括克鲁兹锥虫(T.cruzi)；贾第鞭毛虫属寄生虫(Giardia spp.)，包括吸吮贾第虫(G.lamblia)；Leshmania属寄生虫，包括L.major；肺囊虫属寄生虫(Pneumocystis spp.)，包括卡氏肺囊虫(P.carinii)；毛滴虫属寄生虫(Trichomonas spp.)，包括阴道毛滴虫(T.vaginalis)；Schisostoma属寄生虫，包括S.mansoni，或所述抗原或抗原组合物得自酵母，例如念珠菌属酵母(Candida spp.)，包括白色念珠菌(C.albicans)；隐球酵母属酵母(Cryptococcus spp.)，包括新型隐球菌酵母(C.neoformans)其它优选的结核分枝杆菌具体抗原有例如Tb Ra12、Tb H9、TbRa35、Tb38-1、Erd 14、DPV、MTI、MSL、mTTC2和hTCC1(WO 99/51748)结核分枝杆菌的蛋白还包括其融合蛋白和变异体蛋白，其中至少2种、优选3种结核分枝杆菌多肽融合为更大的蛋白优选融合蛋白包括Ra12-TbH9-Ra35、Erd14-DPV-MTI、DPV-MTI-MSL、Erd14-DPV-MTI-MSL-mTCC2、Erd14-DPV-MTI-MSL、DPV-MTI-MSL-mTCC2、TbH9-DPV-MTI(WO 99/51748)最优选的衣原体抗原包括例如高分子量蛋白(HWMP)(WO99/17741)、ORF3(EP 366 412)和推定的膜蛋白(Pmp)所述疫苗制剂的其它衣原体抗原可选自WO 99/28475介绍的衣原体抗原优选细菌疫苗包含得自包括肺炎链球菌(例如荚膜多糖及其偶联物、PsaA、PspA、链球菌溶血素、胆碱结合蛋白)在内的链球菌属细菌的抗原和蛋白抗原肺炎链球菌溶血素(Biochem Biophys Acta，1989，67，1007；Rubins等，Microbial Pathogenesis，25，337-342)及其变异的去毒衍生物(WO 90/06951；WO 99/03884)其它优选细菌疫苗包含得自嗜血菌属细菌(Haemophilus spp.)的抗原，包括B型流感嗜血菌(H.influenzae)(例如PRP及其偶联物)、未定型(non typeable)流感嗜血菌，例如OMP26、高分子量粘附素、P5、P6、蛋白D以及脂蛋白D和丝束蛋白以及丝束蛋白衍生的肽(US 5,843,464)或其多拷贝变异体或融合蛋白乙型肝炎表面抗原的衍生物是本领域众所周知的，特别包括欧洲专利申请EP-A-414 374、EP-A-0304 578和EP 198-474介绍的PreS1、PreS2 S抗原在一个优选方面，本发明疫苗制剂包含HIV-1抗原、gp120，尤其是当用CHO细胞表达时在另一个实施方案中，本发明疫苗制剂包含本文以上定义的gD2t在本发明的一个优选实施方案中，包含要求保护的佐剂的疫苗包含得自认为与生殖器疣有关的人乳头瘤病毒(HPV)(HPV 6或HPV 11以及其它HPV病毒)和与宫颈癌有关的HPV病毒(HPV16、HPV18以及其它HPV病毒)的抗原特别优选形式的生殖器疣预防或治疗疫苗包含L1颗粒或病毒壳粒和融合蛋白，该融合蛋白包含一种或多种选自HPV 6和HPV 11蛋白E6、E7、L1和L2的抗原最优选形式的融合蛋白为WO 96/26277公开的L2E7和GB9717953.5(PCT/EP98/05285)公开的蛋白D(1/3)-E7优选HPV宫颈感染或宫颈癌的预防或治疗疫苗组合物可包含HPV 16或18抗原例如L1或L2抗原单体、或以病毒样颗粒(VLP)一起存在的L1或L2抗原或者只以VLP或壳粒结构存在的L1单一蛋白这类抗原、病毒样颗粒和壳粒本身是已知的参见例如WO94/00152、WO94/20137、WO94/05792和WO93/02184VLP可包含单一或为融合蛋白的其它早期蛋白，例如E7、E2或优选E5；这样特别优选的实施方案包括含L1E7融合蛋白的VLP(WO96/11272)特别优选HPV 16抗原包含与蛋白D载体融合的早期蛋白E6或E7，以形成蛋白D-HPV 16的E6或E7融合，或其组合；或者E6或E7与L2的组合(WO 96/26277)另一方面，HPV 16或18早期蛋白E6和E7可以以一个分子、优选蛋白D-E6/E7融合蛋白存在这种疫苗可任选包含HPV18的E6和E7之一或二者，该疫苗优选为蛋白D-E6或蛋白D-E7融合蛋白或蛋白D E6/E7融合蛋白形式本发明疫苗还可包含其它HPV病毒株、优选病毒株HPV 31或33的抗原本发明疫苗还包含从引起疟疾的寄生虫获得的抗原例如恶性疟原虫(Plasmodia falciparum)的优选抗原包括RTS、S和TRAPRTS是一种杂合蛋白，主要包含恶性疟原虫环子孢子蛋白(CS)的基本上所有C-末端部分，该部分通过乙型肝炎表面抗原preS2部分的4个氨基酸与乙型肝炎病毒表面抗原(S)连接国际专利申请号PCT/EP92/02591公开了其完整结构，所述专利以公布号WO 93/10152公布，它要求英国专利申请第9124390.7号的优先权当用酵母表达时，产生的RTS为脂蛋白颗粒，当它与HBV的S抗原共表达时，它产生称为RTS，S的混合颗粒以WO 90/01496公布的国际专利申请号PCT/GB89/00895介绍了TRAP抗原本发明的一个优选实施方案是疟疾疫苗，其中所述抗原制剂包含组合的RTS、S和TRAP抗原其它可能候选为多阶段疟疾疫苗组分的疟原虫抗原有恶性疟原虫MSP1、AMA1、MSP3、EBA、GLURP、RAP1、RAP2、钳合蛋白、PfEMP1、Pf332、LSA1、LSA3、STARP、SALSA、PfEXP1、Pfs25、Pfs28、PFS27/25、Pfs16、Pfs48/45、Pfs230及其疟原虫属类似物所述制剂还可含有抗肿瘤抗原，并可用于免疫治疗癌症例如所述佐剂制剂可用于肿瘤排斥抗原，例如前列腺癌、乳腺癌、结肠直肠癌、肺癌、胰腺癌、肾脏癌症或黑素瘤抗原典型抗原包括MAGE 1和MAGE3或其它MAGE抗原(用于治疗黑素瘤)、PRAME、BAGE或GAGE(Robbins和Kawakami，1996，Current Opinions in Immunology 8，第628-636页；Van den Eynde等，International Journal of Clinical &Laboratory Research(1997年递交)；Correale等(1997)，Journal of theNational Cancer Institute 89，第293页)实际上，这些抗原在种类繁多的肿瘤类型表达，例如黑素瘤、肺癌、肉瘤和膀胱癌其它肿瘤特异性抗原适用于本发明佐剂，包括但不限于肿瘤特异性神经节苷脂、前列腺特异性抗原(PSA)或Her-2/neu、KSA(GA733)、PAP、mammaglobin、MUC-1、癌胚抗原(CEA)因此，在本发明的一个方面，提供包含本发明的佐剂组合物和肿瘤排斥抗原的疫苗本发明一个特别优选的方面是所述疫苗包含肿瘤抗原；这种疫苗令人惊奇地有效治疗癌症，例如前列腺癌、乳腺癌、结肠直肠癌、肺癌、胰腺癌、肾脏癌、卵巢癌或黑素瘤因此，所述制剂可含有肿瘤相关抗原以及支持肿瘤形成(例如血管形成、肿瘤侵袭)的相关抗原另外，治疗癌症疫苗特别相关的抗原还包括前列腺特异性膜抗原(PSMA)、前列腺干细胞抗原(PSCA)、酪氨酸酶、survivin、NY-ESO1、prostase、PS108(WO 98/50567)、RAGE、LAGE、HAGE此外，所述抗原可以是自身肽激素，例如全长促性腺激素释放激素(GnRH，WO 95/20600)，该激素为10个氨基酸长的短肽，可用于治疗许多癌症或免疫阉割预期本发明组合物可用于配制含得自疏螺旋体属菌的抗原的疫苗例如抗原可包括核酸、病原体衍生的抗原或抗原性制品、重组产生的蛋白或肽以及嵌合融合蛋白所述抗原特别为OspAOspA为借助于宿主细胞(大肠杆菌)的脂质化型完全成熟蛋白，称为Lipo-OspA，或者为非脂质化衍生物该非脂质化衍生物包括非脂质化NS1-OspA融合蛋白，它含有流感病毒非结构蛋白(NS1)的前81个N-末端氨基酸和完整的OspA蛋白，非脂质化衍生物还包括另一种MDP-OspA，它为具有3个其它N-末端氨基酸的非脂质化OspA本发明疫苗可用于预防或治疗变态反应这种疫苗应该包含变应原特异性抗原(例如Der p1)和变应原非特异性抗原(例如人IgE产生的肽，包括但不限于stanworth十肽(decapeptide)(EP 0 477 231 B1))本发明疫苗还可用于预防或治疗变态反应、癌症或感染性疾病以外的慢性病症这类慢性病症为诸如动脉硬化和阿尔茨海默氏病的疾病预防和治疗这类阿尔茨海默氏神经变性性疾病易感者或患者的相关抗原具体有淀粉样前体蛋白的N末端39-43个氨基酸片段(Aβ)和小片段该抗原公开于国际专利申请号WO 99/27944-(AthenaNeurosciences)根据在典型疫苗接受者诱导免疫保护性反应而没有显著副作用的剂量，选定每个疫苗剂量中的蛋白剂量该剂量随使用的具体免疫原和如何提呈免疫原而不同一般来说，预期每个疫苗剂量包含1-1000μg蛋白、优选1-500μg、优选1-100μg、最优选1-50μg应用标准研究可确定具体疫苗的最佳剂量，所述标准研究包括观测接种疫苗者的合适免疫反应初次免疫接种后，疫苗接受者可间隔适当时间后再接受1次或若干次加强免疫接种在激发免疫接种或加强免疫接种方案中，该疫苗制剂可施用于哺乳动物粘膜表面；或者系统给予，例如通过透皮、皮下或肌肉途径系统给予本发明佐剂或疫苗中的CpG或免疫刺激寡核苷酸含量一般较小，但是根据疫苗制剂可以为1-1000μg/剂、优选1-500μg/剂而更优选1-100μg/剂用于本发明佐剂的皂甙量可以为1-1000μg/剂、优选1-500μg/剂、更优选1-250μg/剂而最优选1-100μg/剂所以，CpG皂甙(w/w)的比值为1∶1000至1000∶1，通常为1∶100至100∶1，优选1∶10至1∶1或1∶1至10∶1，最优选1∶1、4∶1或10∶1本发明制剂可用于预防和治疗目的因此，本发明提供组合的皂甙和CpG分子用于生产预防和治疗病毒感染、细菌感染、寄生虫感染、变态反应、癌症和其它非慢性病症的疫苗的用途所以，本发明提供治疗感染性疾病或癌症或变态反应或自身免疫性疾病易感或患病哺乳动物的方法本发明的再一方面，提供包含皂甙和CpG的本文描述的疫苗组合或佐剂组合，以用作药物New Trends and Developments inVaccines，Voller等编著，University Park Press，Baltimore，Maryland，U.S.A.1978全面介绍了疫苗制剂预期本发明组合物可用于配制含各种来源获得的抗原的疫苗例如，抗原可包括人类、细菌或病毒的核酸、病原体衍生的抗原或抗原性制品、肿瘤衍生抗原或抗原性制品、宿主衍生抗原(包括IgE产生的肽，例如IgE的释放组织胺的十肽(称为Stanworth十肽))、重组产生的蛋白或肽以及嵌合融合蛋白本发明提供包含抗原、皂甙和免疫刺激寡核苷酸的疫苗组合物因此，本发明提供治疗疾病易感或患病个体的方法，该方法为通过所述个体的系统途径给予本文大致介绍的组合物还提供防止个体罹患疾病的方法，该方法为通过所述个体的系统途径给予本文大致介绍的组合物，所述疾病包括感染性细菌疾病和病毒疾病、寄生虫病、前列腺癌、乳腺癌、结肠直肠癌、肺癌、胰腺癌、肾脏癌、卵巢癌或黑素瘤；非癌性慢性病症、变态反应、阿尔茨海默氏病、动脉硬化另一方面，本发明提供包含抗原和溶血性皂甙的粘膜疫苗组合物因此，本发明提供通过将本文大致介绍的组合物给予到所述个体的粘膜表面而治疗疾病易感个体或患病个体的方法此外，本发明介绍了诱导哺乳动物系统性抗原特异性免疫反应的方法，包括将包含抗原和溶血性皂甙的组合物给予到所述哺乳动物的粘膜表面上进而本发明还提供生产疫苗或佐剂的方法，包括制备皂甙、制备CpG分子以及将它们与抗原混合用于本发明组合的合适的药学上可接受的赋形剂实例包括水、磷酸缓冲盐水、等渗缓冲溶液