一种含有三七素和三七皂苷r1药物组合物及其制剂的制作方法【技术领域】[0001]本发明属于医药【技术领域】，具体涉及一种含有三七素和三七皂苷Rl的药物组合物及其制剂。[0002]三七别名田七、金不换，为五加科(araliaceae)人参属植物三七[panaxnotoginseng (Burk.)F.H.Chen]的干燥根。《本草纲目》言三七“止血散血定痛，金刃箭伤跌扑杖疮血出不止者，嚼烂涂，或为末掺之，其血即止。亦主吐血衄血，下血血痢，崩中经水不止，产后恶血不下，血运血痛，赤目痛肿，虎咬蛇伤诸病”。《医学衷中参西录》称其“化淤血而不伤新血，允为理血妙品”。《本草新编》称:“三七根，止血之神药也”。历版《中国药典》对三七的主要功能均界定为“散淤止血，消肿定痛”。数千年来三七广泛用于跌打损伤、内伤出血等内外出血症。[0003]以三七为原料的中药注射剂主要为血栓通注射液，血栓通注射液是用于视网膜中央静脉阻塞，脑血管病后遗症，内眼病，眼前房出血等，多用于眼科，心血管内科，神经内科。血栓通注射液具有很好的临床作用，但其主要成分为三七总皂苷，为多组分注射剂，在临床应用中，产生不良反应，无法追溯，给医生和患者带来潜在的安全隐患。
[0004]基于上述原因，本发明的目的是提供一种新的药物组合物，该组合物包括三七素与三七皂苷Rl，通过广泛而深入的研究，发明人发现二者在一定重量比进行组方具有协同的药理作用，并且优于市售血栓通注射液，在节省资源、具有更好的药效作用的基础上，有效成分组合物具有更好的安全性。[0005]本发明通过下述技术方案实现的。[0006]一种药物组合物，所述药物组合物活性成分包括三七素、三七皂苷Rl。
[0007]上述所述药物组合物，优选三七素与三七皂苷Rl的重量比为1-10:5-15。
[0008]所述的一种药物组合物，优选三七素与三七皂苷Rl的重量比为1-5:5-10。
[0009]所述的一种药物组合物，优选三七素与三七皂苷Rl的重量比为3:6.5。
[0010]所述药物组合物制备成注射制剂。
[0011]其中药物组合物包括辅料。
[0012]所述其中辅料包括L-缬氨酸。
[0013]所述辅料L-缬氨酸与三七素重量比为0.05-0.3:1。
[0014]药物组合物制备成注射剂，其中注射剂的制备方法为:取三七素和三七皂苷Rl混合均匀，加注射用水溶解完全，过滤，滤液加辅料，溶解完全，过滤，滤液加注射用水至全量，分装，灭菌，即得。
[0015]上述所述三七素的制备方法为:
[0016](I)取三七，粉碎至80-120目；[0017](2)将三七粉末加入质量百分比浓度为30%_80%的乙醇溶液中，再加入糖苷水解酶，三七粉末与乙醇溶液的质量体积比为1:5-20，三七粉末与糖苷水解酶的质量比为10-100:1，搅拌均匀，于45°C _50°C，密封酶解浸提6_72小时；
[0018](3)将酶解后的反应液过滤，滤液浓缩后上60-300目聚酰胺层析分离柱，先用质量百分比浓度为60%- 90%的乙醇溶液洗脱，然后用100%乙醇洗脱，收集100%乙醇的洗脱液，浓缩后得三七素的粗品；
[0019](4)将上述三七素粗品用热水溶解，再上200-600目聚酰胺层析柱，先用质量百分比浓度为80%-90%的乙醇溶液洗脱，然后用100%乙醇洗脱，收集100%乙醇的洗脱液，浓缩后得二七素的纯品。
[0020]本发明所述三七素、三七皂苷Rl也可以购自购自上海融禾医药科技发展有限公司纯度分别99.5%, 99.5%ο
[0021]本发明所述糖苷水解酶(glycosidehydrolase),又名糖苷酶。
[0022]制备实施例
[0023]实施例1
[0024]三七素的制备:
[0025](I)取三七50g，5 5°C烘干，粉碎至120目；
[0026](2)将三七粉末加入质量百分比浓度为80%的乙醇溶液1000ml中，再加入糖苷水解酶0.5g，搅拌均匀，于50°C，密封酶解浸提72小时；
[0027](3)将酶解后的反应液过滤，滤液浓缩后上300目聚酰胺层析分离柱，先用质量百分比浓度为90%的乙醇溶液洗脱，然后用100%乙醇洗脱，收集100%乙醇的洗脱液，浓缩后得三七素的粗品，其纯度为60% ；
[0028](4)将上述三七素粗品用热水溶解，再上600目聚酰胺层析柱，先用质量百分比浓度为90%的乙醇溶液洗脱，然后用100%乙醇洗脱，收集100%乙醇的洗脱液，浓缩后得三七素的纯品，其纯度为99.8%。
[0029]实施例2
[0030]三七素的制备:
[0031](I)取三七50g，40°C烘干，粉碎至100目；
[0032](2)将三七粉末加入质量百分比浓度为40%的乙醇溶液500ml中，再加入糖苷水解酶2.5g，搅拌均匀，于46 °C，密封酶解浸提62小时；
[0033](3)将酶解后的反应液过滤，滤液浓缩后上100目聚酰胺层析分离柱，先用质量百分比浓度为70%的乙醇溶液洗脱，然后用100%乙醇洗脱，收集100%乙醇的洗脱液，浓缩后得三七素的粗品，其纯度为50% ；
[0034](4)将上述三七素粗品用热水溶解，再上300目聚酰胺层析柱，先用质量百分比浓度为85%的乙醇溶液洗脱，然后用100%乙醇洗脱，收集100%乙醇的洗脱液，浓缩后得三七素的纯品，其纯度为99.5%。
[0035]实施例3
[0036]三七素的制备:
[0037](I)取三七50g，自然晒干，粉碎至90目；
[0038](2)将三七粉末加入质量百分比浓度为60%的乙醇溶液400ml中，再加入糖苷水解酶2g，搅拌均匀，于45 °C，密封酶解浸提32小时；
[0039] (3)将酶解后的反应液过滤，滤液浓缩后上200目聚酰胺层析分离柱，先用质量百分比浓度为70%的乙醇溶液洗脱，然后用100%乙醇洗脱，收集100%乙醇的洗脱液，浓缩后得三七素的粗品，其纯度为53.5% ；
[0040](4)将上述三七素粗品用热水溶解，再上400目聚酰胺层析柱，先用质量百分比浓度为87%的乙醇溶液洗脱，然后用100%乙醇洗脱，收集100%乙醇的洗脱液，浓缩后得三七素的纯品，其纯度为99.7%。
[0041]实施例4
[0042]三七素的制备:
[0043](I)取三七50g，自然晒干，粉碎至80目；
[0044](2)将三七粉末加入质量百分比浓度为30%的乙醇溶液中250ml，再加入糖苷水解酶5g，搅拌均匀，于45°C，密封酶解浸提6小时；
[0045](3)将酶解后的反应液过滤，滤液浓缩后上60目聚酰胺层析分离柱，先用质量百分比浓度为60%的乙醇溶液洗脱，然后用100%乙醇洗脱，收集100%乙醇的洗脱液，浓缩后得二七素的粗品，其纯度为40% ；
[0046](4)将上述三七素粗品用热水溶解，再上200目聚酰胺层析柱，先用质量百分比浓度为80%的乙醇溶液洗脱，然后用100%乙醇洗脱，收集100%乙醇的洗脱液，浓缩后得三七素的纯品，其纯度为99.3%。
[0047]实施例5
[0048]三七素的制备:
[0049](I)取三七50g，55°C烘干，粉碎至110目；
[0050](2)将三七粉末加入质量百分比浓度为75%的乙醇溶液600nl中，再加入糖苷水解酶3g，搅拌均匀，于45 °C，密封酶解浸提24小时；
[0051](3)将酶解后的反应液过滤，滤液浓缩后上200目聚酰胺层析分离柱，先用质量百分比浓度为85%的乙醇溶液洗脱，然后用100%乙醇洗脱，收集100%乙醇的洗脱液，浓缩后得三七素的粗品，其纯度为57.3% ；
[0052](4)将上述三七素粗品用热水溶解，再上500目聚酰胺层析柱，先用质量百分比浓度为85%的乙醇溶液洗脱，然后用100%乙醇洗脱，收集100%乙醇的洗脱液，浓缩后得三七素的纯品，其纯度为99.8%。
[0053]实施例6
[0054]三七素lg，三七皂苷R15g，辅料L-缬氨酸0.05g。
[0055]制备方法:取实施例1制备的三七素和三七皂苷Rl混合均匀，加注射用水溶解完全，过滤，滤液加辅料，溶解完全，过滤，滤液加注射用水至2000ml，制备成2ml水针剂,灭菌，得到注射液1000瓶。
[0056]实施例7
[0057]三七素10g，三七皂苷R115g，辅料L-缬氨酸3g。
[0058]制备方法:取实施例1制备的三七素和三七皂苷Rl混合均匀，加注射用水溶解完全，过滤，滤液加辅料，溶解完全，过滤，滤液加注射用水至2000ml,装瓶,每瓶2ml,普通干燥，得到粉针剂。[0059]实施例8
[0060]三七素5g，三七皂苷R15g，辅料L-缬氨酸lg。
[0061]制备方法:取实施例2制备的三七素和三七皂苷Rl混合均匀，加注射用水溶解完全，过滤，滤液加辅料，溶解完全，过滤，滤液加注射用水至2000ml,装瓶,每瓶2ml,冷冻干燥，得到冻干粉针剂。
[0062]实施例9
[0063]三七素lg，三七皂苷Rl 10g，辅料L-缬氨酸0.15g。
[0064]制备方法:取实施例3制备的三七素和三七皂苷Rl混合均匀，加注射用水溶解完全，过滤，滤液加辅料，溶解完全，过滤，滤液加注射用水至2000ml，制备成2ml水针剂,灭菌，得到注射液1000瓶。
[0065]实施例10[0066]三七素4g，三七皂苷R19g，辅料L-缬氨酸0.8g。
[0067]制备方法:取实施例5制备的三七素和三七皂苷Rl混合均匀，加注射用水溶解完全，过滤，滤液加辅料，溶解完全，过滤，滤液加注射用水至2000ml，制备成2ml水针剂,灭菌，得到注射液1000瓶。
[0068]实施例11
[0069]三七素lg，三七皂苷R15g，辅料L-缬氨酸0.05g。
[0070]制备方法:取实施例4制备的三七素和三七皂苷Rl混合均匀，加注射用水溶解完全，过滤，滤液加辅料，溶解完全，过滤，滤液加注射用水至2000ml,装瓶,每瓶2ml,冷冻干燥，得到粉针剂。
[0071]实施例12
[0072]三七素4g，三七皂苷R19.5g，辅料L-缬氨酸0.8g。
[0073]制备方法:取实施例1制备的三七素和三七皂苷Rl混合均匀，加注射用水溶解完全，过滤，滤液加辅料，溶解完全，过滤，滤液加注射用水至2000ml,装瓶,每瓶2ml,冷冻干燥，得到冻干粉针剂。
[0074]实施例13
[0075]三七素2g，三七皂苷R114g，辅料L-缬氨酸0.2g。
[0076]制备方法:取实施例4制备的三七素和三七皂苷Rl混合均匀，加注射用水溶解完全，过滤，滤液加辅料，溶解完全，过滤，滤液加注射用水至2000ml，制备成2ml水针剂,灭菌，得到注射液1000瓶。
[0077]实施例14
[0078]三七素9g，三七皂苷R16g，辅料L-缬氨酸1.8g。
[0079]制备方法:取实施例3制备的三七素和三七皂苷Rl混合均匀，加注射用水溶解完全，过滤，滤液加辅料，溶解完全，过滤，滤液加注射用水至2000ml，制备成2ml水针剂,灭菌，得到注射液1000瓶。
[0080]实施例15
[0081]三七素8g，三七皂苷R15g，辅料L-缬氨酸0.8g。
[0082]制备方法:取实施例2制备的三七素和三七皂苷Rl混合均匀，加注射用水溶解完全，过滤，滤液加辅料，溶解完全，过滤，滤液加注射用水至2000ml，制备成2ml水针剂,灭菌，得到注射液1000瓶。
[0083]实施例16
[0084]三七素3g，三七皂苷R16.5g，辅料L-缬氨酸0.45g。
[0085]制备方法:取实施例1制备的三七素和三七皂苷Rl混合均匀，加注射用水溶解完全，过滤，滤液加辅料，溶解完全，过滤，滤液加注射用水至2000ml，制备成2ml水针剂,灭菌，得到注射液1000瓶。
[0086]实施例17
[0087]三七素3g，三七皂苷R18g，辅料L-缬氨酸0.6g。
[0088]制备方法:取实施例1制备的三七素和三七皂苷Rl混合均匀，加注射用水溶解完全，过滤，滤液加辅料，溶解完全，过滤，滤液加注射用水至2000ml,装瓶,每瓶2ml,冷冻干燥，得到冻干粉针剂。
[0089]试验例I
[0090]测试方法:
[0091](I)色谱条件分析柱 Waters? Carbolydrate Caryridge ColumnC18(5.9X150nm)，流动相:95%缓冲液A(0.001%醋酸)-5%缓冲液B(46%乙腈:10%甲醇:46%水);流速1.0ml/min ;检测波长213nm ；
[0092]柱温:室温。
[0093](2)稳定性考察
[0094]精密称取三七素对照品1.0mg，用水溶解定容于ImL容量瓶中在Id内重复进样5次，按上述色谱条件进行测定，结果峰面积积分值的平均值为34250670，其RSD为0.95%。结果表明三七素在24小时内稳定性良好。
[0095](3)线性关系考察
[0096]精密称取三七素对照品lmg，加水定容于Iml容量瓶中精密吸取10.0,30.0,50.0，70.0，90.Ομ L进样，按上述色谱条件测定峰面积积分值，以三七素量为纵坐标峰面积积分值为横坐标，绘制标准曲线，计算回归方程Υ=2.8X10- 7Χ+0.0072, r2=0.9996。实验表明三七素在10.0~90.0 μ g具有良好的线性关系。
[0097](4)精密度实验
[0098]精密吸取上述对照品溶液，重复进样5次，测定。三七素峰面积积分值的平均值为34221870，其 RSD 为 0.85%。
[0099](5)重复性实验
[0100]取相同的样品5份，精密称定，按供试品溶液制备方法制备样品溶液，按上述色谱条件测定平均含量为0.49%，其RSD为1.75%。
[0101](6)供试品溶液的制备与测定
[0102]取各样品粉末约5g，精密称定，置具塞三角瓶中，精密加水25ml，称定重量，超声提取60min，放冷，再称定重量，加水补足减失的重量，摇匀，以4000rpm离心5min，收取上清液。用0.2 μ m滤膜过滤，取续滤液加水适量，调整三七素浓度至线性范围内，进样20 μ L，测定峰面积积分值 ，用外标法根据峰面积积分值计算三七素的含量，结果见表1。
[0103]本实验例参照以下对比文件的方法制备了三七素，并采用上述测试方法，测定了三七素的含量。[0104]样品I为参照专利200610027962的实施例1的方法制备的三七素提取物；
[0105]样品2为参照专利01136697.4的实施例1的方法制备的三七素提取物；
[0106]样品3为参照专利申请99114721.9的实施例1的方法制备的三七素提取物；
[0107]表1三七素提取物纯度测试结果
[0108]