北虫草提取物及其制备方法和应用的制作方法[0002]北冬虫夏草(北虫草)，又名蛹虫草[Cordyceps militaris (L.) Link],属子囊菌亚门(Ascomycotina)核菌纲(pyrenomycetes)球壳目(Sphaerinles)麦角菌科(claviticpitaceae)虫草属(Coedyceps),与冬虫夏草同属异种，是一种富含虫草素、高蛋白、氨基酸的食用菌类。《中华药海》记载“蛹草，性味甘、平，入肺、肾二经。”《全国中草药汇编》记载“蛹虫草(北虫草)的子实体及蛹体也可作为冬虫夏草入药。”北虫草主要分两类:一类是人工饲养用虫蛹生菌而成，培养难度大、存活率低，市场占有率极少；第二类是市场上最常见的，用谷类、麦子或大米为培养基质人工发酵而成的子实体，又名虫草花。由于目前野生冬虫夏草资源严重缺乏，而北虫草的化学成分及药理作用与冬虫夏草相似，且较冬虫夏草易于栽培，因此，北虫草已成为野生冬虫夏草的最佳替代品被用于医药保健。[0003]北虫草中主要含有核苷、虫草多糖、蛋白质、氨基酸、留醇、有机酸及多种维生素、微量元素等。在核苷类成分中，对于虫草素和腺苷的药理作用研究较为常见，作为一种脱氧核苷类抗菌素，虫草素是第一个从真菌中分离出来的，分子式为CltlH13N5O3,相对分子质量为251，北虫草是目前已报道的300余种虫草菌中唯一能大量形成虫草素的菌种，在天然冬虫夏草或发酵菌丝体中不存在虫草素或含量极微，且人工北虫草中的虫草素含量高于野生北虫草，虫草素具有多种生物活性，如抗菌、抗炎、抗肿瘤及免疫调节等活性。有现代研究表明:北虫草提取物可以抗疲劳、抗衰老、提高人体免疫力、抗肿瘤、抗菌等，同时有雄激素样作用，对内分泌以及中枢神经系统有调节作用。大量事实证明，北虫草作为药食两用的产品是安全的，除作为药用外，还可将其开发成为茶饮料、食品添加剂、化妆品等产品。[0004]现有文献研究较多的是对于北虫草的滋肺补肾、止血、化痰、降血压及抗菌作用，此研究大都是定位于经口服途径给药目的，但有关北虫草提取物用于面部皮肤抗氧化和美白作用的产品研发相关报导却较少，经查阅数据库仅发现，北虫草提取物能够增加衰老小鼠皮肤的含水量和SOD活力，降低皮肤中MDA含量，具有推迟皮肤衰老的作用，并无关于北虫草提取物用于面部皮肤类化妆品的抗氧化和美白的系统研究数据，更无针对此功效的目标提取物的制备工艺路线报导。例如，对于北虫草的提取方法，大多文献报导以水超声或者煎煮的方式，前者无法适用于工业化生产，因为受超声波衰减因素的制约，如果提取罐直径过大，在罐的周围就会形成超声空白区，且大体积、大功率的工业型超声设备购买价格较高；后者的提取温度将影响以虫草素为代表的核苷类成份的提取率及稳定性，由于较高的提取温度还将产生浓重的菌菇味道，可能由于生成了含硫的八碳类物质，从而限制了将其开发出化妆品的可行性。
[0005]基于此，本发明的目的是提供一种北虫草提取物的制备方法。[0006]具体的技术方案如下:[0007]一种北虫草提取物的制备方法，包括如下步骤:[0008](I)预处理:将北虫草药材的粗粉与物理吸附剂按5-10:1的质量比进行混合得混合物，然后加入水润湿混合物，水的加入量为混合物质量的1-3倍，拌匀后静置5-7h ；
[0009](2)温浸提取:在步骤(1)得到的混合物中加入蒸馏水进行温浸提取操作，其中温浸提取的温度为35-80°C，蒸馏水的添加量为混合物的5-25倍，加热时间为6_24h，过滤，滤液冻干干燥，即得所述北虫草提取物。
[0010]在其中一个实施例中，所述物理吸附剂为海藻酸钠、硅藻土或白陶土。
[0011]在其中一个实施例中，预处理步骤中北虫草药材的粗粉与物理吸附剂的质量比为
7.5:1，水的加入量为混合物质量的2倍，静置的时间为6h。
[0012]在其中一个实施例中，温浸提取步骤中温浸温度为35_55°C，蒸馏水的添加量为混合物的20倍，加热时间为10h。
[0013]在其中一个实施例中，温浸提取步骤中温浸温度为40°C，蒸馏水的添加量为混合物的20倍，加热时间为IOh0
[0014]本发明的另一目的是提供一种北虫草提取物。
[0015]具体的技术方案如下:
[0016]一种上述制备方法制备得到的北虫草提取物。
[0017]本发明的另一目的是提供一种北虫草提取物的应用。
[0018]具体的技术方案如下:
[0019]上述制备方法制备得到的北虫草提取物在化妆品中的应用。
[0020]优选地，所述化妆品为抗氧化美白化妆品。
[0021]本发明的原理如下:
[0022]本发明针对本领域的技术空白，通过以多指标综合评分法，采用北虫草主要活性成分虫草素含量、得粉率、总蛋白含量、抗氧化功效及抑制酪氨酸酶活性(评价美白能力的指标)五种主要指标，通过化学成份研究与功效研究相结合的思路，研制出具有最好抗氧化和美白效果的北虫草提取物优化制备工艺。此法有别于常规口服北虫草提取物制备方法，是一种提取温度低、操作简便、能耗小、便于产业化的北虫草提取物的新制备方法，此法的创造性在于通过将药材与物理吸附剂以适宜比例混合后共提取的方法，不仅完成了有效成份的富集，还制备出无菌菇味道的提取物，使得通过此新方法制备的北虫草提取物具有杂质少、味道小、有效成份含量高、生物活性好的显著特点。
[0023]由于北虫草子实体是革质的，常规采用的热抽提法，在规模化生产中，必须优化提取技术以达到最佳活性效果。本发明通过事先将药材与物理吸附剂处理后再选择不同的温度、加水量及提取时间，以北虫草主要化学成分虫草素含量、总蛋白含量、抗氧化功效及抑制酪氨酸酶活性为主要指标，优化北虫草的提取工艺，制得具有强抗氧化活性和美白功效的北虫草提取物。
[0024]此外由于北虫草属于真菌类植物，其提取物具有浓郁的菌菇香气，但是此味道不是人人可以接受的，本发明尝试用不同的吸附剂进行预处理，优化提取工艺，提供一种北虫草提取物的制备方法。本发明的北虫草提取物可以用于制作美容面膜、膏、霜或精华素等化妆品的原材料。[0025]与市场上现有的抗氧化、美白作用产品相比，本发明具有以下有益效果:
[0026]与其他北虫草或虫草提取物比较，本发明采用物理吸附剂预先处理北虫草药材，以水在较低温度下浸提，再通过冻干干燥，不仅方便、节能，而且利于工业连续生产，最重要的是所得提取物不仅去除了北虫草提取物自带的菌菇味道，还提高了以虫草素为主要指标的核苷类的含量，更加适合作为制备化妆品所使用的原料。
[0027]本发明经上述预处理和提取过程后所得北虫草提取物，其抗氧化能力是未处理北虫草提取物的1.15倍；美白作用是1.12倍。与其余抗氧产品相比，新方法制备的北虫草提取物的抗氧化能力是燕窝3倍，是猪皮的58倍；与其余美白产品相比，新方法制备的北虫草提取物的美白作用是燕窝3倍，是猪皮的10倍。进一步证明，本发明提取物可作为抗氧化或美白的化妆品的安全原料进行应用。



[0028]图1为检测虫草素含量的空白溶剂对照HPLC色谱图；
[0029]图2为虫草素及其他核苷类成分对照品HPLC色谱图；
[0030]图3为对比例I北虫草提取物样品(未经任何处理)HPLC色谱图；
[0031]图4为海藻酸钠处理(实施例1)北虫草提取物样品HPLC色谱图；
[0032]图5为硅藻土处理(实施例2)北虫草提取物样品HPLC色谱图；
[0033]图6为白陶土处理(实施例3)北虫草提取物样品HPLC色谱图
[0034]图7为不同提取方法制备的北虫草提取物的抗氧化能力比较图；
[0035]图8为不同提取方法制备的北虫草提取物的美白功效比较图；
[0036]图9为正交试验各样品组的抗氧化能力比较图；
[0037]图10为正交试验各样品组的美白功效比较图；
[0038]图11为最佳工艺制备的北虫草提取物抗氧化能力比较图；
[0039]图12为最佳工艺制备的北虫草提取物美白作用比较图。

[0040]本发明实施例所使用的北虫草药材购自香港市场，经过董婷霞博士鉴别该品种为虫甬虫草 Cordyceps militaris (L)Link0
[0041]以下结合实施例和附图对本申请做进一步阐述。
[0042]实施例1
[0043]本实施例一种北虫草提取物的制备方法，包括如下步骤:
[0044](I)预处理:将北虫草药材的粗粉与海藻酸钠按7.5:1的质量比进行混合得混合物，然后加入水润湿混合物，水的加入量为混合物质量的2倍，拌匀后静置6h ；
[0045]( 2 )温浸提取:在步骤(1)得到的混合物中加入蒸馏水进行温浸提取操作，其中温浸温度为40°C，蒸馏水的添加量为混合物的20倍，加热时间为10h，过滤，滤液冻干干燥，即得所述北虫草提取物。
[0046]对北虫草提取物进行虫草素和总蛋白含量测定，抗氧化能力和美白能力测试。
[0047]该提取物粉末可以用于制作美容面膜、膏、霜或精华素等化妆品的原材料。
[0048]实施例2[0049]本实施例一种北虫草提取物的制备方法，包括如下步骤:
[0050](I)预处理:将北虫草药材的粗粉与硅藻土按10:1的质量比进行混合得混合物，然后加入水润湿混合物，水的加入量为混合物质量的2.5倍，拌匀后静置5h ；
[0051](2)温浸提取:在步骤(1)得到的混合物中加入蒸馏水进行温浸提取操作，其中温浸温度为35°C，蒸馏水的添加量为混合物的15倍，加热时间为8h，过滤，滤液冻干干燥，即得所述北虫草提取物。
[0052]对北虫草提取物进行虫草素和总蛋白含量测定，抗氧化能力和美白能力测试。
[0053]该提取物粉末可以用于制作美容面膜、膏、霜或精华素等化妆品的原材料。
[0054]实施例3
[0055]本实施例一种北虫草提取物的制备方法，包括如下步骤:
[0056](I)预处理:将北虫草药材的粗粉与白陶土按5:1的质量比进行混合得混合物，然后加入水润湿混合物，水的加入量为混合物质量的3倍，拌匀后静置7h ；
[0057](2)温浸提取:在步骤(1)得到的混合物中加入蒸馏水进行温浸提取操作，其中温浸温度为45°C，蒸馏水的添加量为混合物的25倍，加热时间为12h，过滤，滤液冻干干燥，即得所述北虫草提取物。
[0058]对北虫草提取物进行虫草素和总蛋白含量测定，抗氧化能力和美白能力测试。
[0059]该提取物粉末可以用于制作美容面膜、膏、霜或精华素等化妆品的原材料。
[0060]实施例4
[0061]本实施例一种北虫草提取物的制备方法，包括如下步骤:
[0062](I)预处理:将北虫草药材的粗粉与白陶土按7.5:1的质量比进行混合得混合物，然后加入水润湿混合物，水的加入量为混合物质量的2倍，拌匀后静置7h ；
[0063](2)温浸提取:在步骤(1)得到的混合物中加入蒸馏水进行温浸提取操作，其中温浸温度为55°C，蒸馏水的添加量为混合物的25倍，加热时间为12h，过滤，滤液冻干干燥，即得所述北虫草提取物。
[0064]对北虫草提取物进行虫草素和总蛋白含量测定，抗氧化能力和美白能力测试。
[0065]该提取物粉末可以用于制作美容面膜、膏、霜或精华素等化妆品的原材料。
[0066]实施例5
[0067]本实施例一种北虫草提取物的制备方法，包括如下步骤:
[0068]( I)预处理:将北虫草药材的粗粉与海藻酸钠按5:1的质量比进行混合得混合物，然后加入水润湿混合物，水的加入量为混合物质量的I倍，拌匀后静置6h ；
[0069](2)温浸提取:在步骤(1)得到的混合物中加入蒸馏水进行温浸提取操作，其中温浸温度为40°C，蒸馏水的添加量为混合物的16倍，加热时间为10h，过滤，滤液冻干干燥，即得所述北虫草提取物。
[0070]对北虫草提取物进行虫草素和总蛋白含量测定，抗氧化能力和美白能力测试。
[0071]该提取物粉末可以用于制作美容面膜、膏、霜或精华素等化妆品的原材料。
[0072]对比例I
[0073]本实施例一种北虫草提取物的制备方法，包括如下步骤:
[0074]将北虫草药材的粗粉，加入蒸馏水进行温浸提取操作，其中温浸温度为40°C，蒸馏水的添加 量为混合物的20倍，加热时间为10h，过滤，滤液冻干干燥，即得所述北虫草提取物。
[0075]对北虫草提取物进行虫草素和总蛋白含量测定，抗氧化能力和美白能力测试。
[0076]该提取物粉末可以用于制作美容面膜、膏、霜或精华素等化妆品的原材料。
[0077]对比例2
[0078]本对比例一种北虫草提取物的制备方法，包括如下步骤:
[0079]( I)在北虫草药材的粗粉加入蒸馏水进行温浸提取操作，其中温浸温度为70°C，蒸馏水的添加量为混合物的20倍，加热时间为2h，过滤，滤液冻干干燥，即得所述北虫草提取物。
[0080]对该北虫草提取物进行虫草素和总蛋白含量测定，抗氧化能力和美白能力测试。
[0081]对比例3
[0082]本对比例一种北虫草提取物的制备方法，包括如下步骤:
[0083]( I)在北虫草药材的粗粉加入蒸馏水进行超声提取操作，蒸馏水的添加量为混合物的20倍，超声提取时间为2h，过滤，滤液冻干干燥，即得所述北虫草提取物。
[0084]对该北虫草提取物进行虫草素和总蛋白含量测定，抗氧化能力和美白能力测试。
[0085]对比例4
[0086]本对比例一种北虫草提取物的制备方法，包括如下步骤:
[0087]( I)在北虫草药材的粗粉加入蒸馏水进行煎煮提取操作，蒸馏水的添加量为混合物的20倍，煎煮提取的温度为100°C，提取时间为2h，过滤，滤液冻干干燥，即得所述北虫草提取物。
[0088]对该北虫草提取物进行虫草素和总蛋白含量测定，抗氧化能力和美白能力测试。
[0089]工艺优化及性能评价
[0090]本发明以如下的具体试验确定了新制备方法:
[0091]一、北虫草药材预处理
[0092]此步骤目的为去除北虫草提取物自带的菌菇味道，提高以虫草素为主要指标的核苷类的含量。
[0093]将北虫草药材粉碎为粗粉，将北虫草药材的粗粉与物理吸附剂(海藻酸钠、硅藻土、白陶土中的一种)按5-10:1的质量比进行混合得混合物，再加入水润湿混合物，水的加入量为混合物质量的1-3倍，拌匀后静置5-7h。
[0094]二、北虫草提取物制备工艺优化方法
[0095]1、提取方法选择
[0096]称取预处理后药材10g，采用如下方法提取，包括40°C温浸(对比例1)、70°C温浸(对比例2)、超声(对比例3)、煎煮提取(对比例4)，海藻酸钠处理温浸(实施例1),硅藻土处理温浸(实施例2)，白陶土处理温浸(实施例3)，将提取液过滤，滤液以水定容至50ml，药液冻干，将提取物以HPLC法测定虫草素的含量，结果见表1及图1，2，3，4，5，6 ;用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定总蛋白含量；以维他命E为对照，用TAC试剂盒测定抗氧化能力，结果见图7 ;以抑制酪氨酸酶活性作用评价美白效果，结果见图8。
[0097]表1北虫草不同提取方法的虫草素含量比较
[0098]