专利名称：盐酸阿扎司琼葡萄糖注射液制剂、制备方法及其质量控制技术的制作方法 恶性肿瘤是严重威胁人类健康的常见病、多发病，是世界各国医学科学领域中的重大科研课题，目前尚无满意的防治措施。治疗恶性肿瘤的方法仍为手术切除、放射治疗和化学治疗，后者仍为临床治疗的重要方法。抗恶性肿瘤药对癌细胞和人体正常细胞的选择性差别不大，因而应用过程中的不良反应广泛而严重，最常见的为恶心、呕吐的胃肠道反应，高致吐性放、化疗药物所致的恶心呕吐不但可引起脱水、电解质紊乱，延缓放化疗的廓清及增加药物的毒性，而且影响患者的生存质量。另外，易产生耐药性也是治疗过程中的问题之一。止吐药是近年来销售量成长较快的品种之一，在消化系统用药中仅次于抗溃疡药而居其后。20纪90年代发展起来的高度选择性5-HT3受体拮抗剂在肿瘤化、放疗过程中止吐作用确切可靠，毒副作用低，临床日趋普及，被公认为是止吐疗法上的突破性进步。盐酸阿扎司琼是继昂丹司琼、格拉司琼之后上市的一种强效、高度选择性的5-HT3受体拮抗剂。它能强力抑制顺铂、阿霉素及环磷酰胺等抗癌药物引起的恶心及呕吐，对恶心、呕吐和恶心呕吐综合评价的有效率为76.9％、78.5％、76.9％，不良反应轻微。它的上市为我国癌症化、放疗患者带来福音。本发明制剂为输液剂型，可方便临床用药，减少药源性污染，给临床使用带来了方便。
本发明是公开一种疗效显著且质量稳定的盐酸阿扎司琼葡萄糖注射液的制剂、制备方法及质量控制技术。本发明的技术方案如下盐酸阿扎司琼葡萄糖注射液制剂，其特征在于按以下比例配制盐酸阿扎司琼0.1g葡萄糖 40~50g亚硫酸氢钠 0~20mg注射用水加至1000ml。所述的盐酸阿扎司琼葡萄糖注射液制剂，其特征在于按以下比例配制盐酸阿扎司琼0.1g葡萄糖 40～50g亚硫酸氢钠 20mg注射用水加至1000ml。所述的盐酸阿扎司琼葡萄糖注射液制剂，其特征在于按以下比例配制盐酸阿扎司琼0.1g葡萄糖 50g注射用水加至1000ml所述的盐酸阿扎司琼葡萄糖注射液制剂，其特征在于按以下比例配制盐酸阿扎司琼0.1g葡萄糖 50g亚硫酸氢钠 10mg注射用水加至1000ml所述的盐酸阿扎司琼葡萄糖注射液制剂的制备方法，其特征在于称取处方量的葡萄糖，溶于注射用水中，搅拌使葡萄糖充分溶解，加针用活性炭，保温搅拌并调节pH值，备用；另取处方量盐酸阿扎司琼及亚硫酸氢钠，避光操作，用上述葡萄糖溶液溶解，加针用活性炭常温下搅拌，过滤、脱炭、测定中间体含量，并用葡萄糖溶液稀释至所需浓度，经微孔滤膜过滤，测定含量和pH值，合格后灌装于100ml输液瓶中、压塞、轧盖，热压蒸气灭菌30分钟，即得。
所述的制备方法，其特征在于称取处方量的葡萄糖，溶于全量的90℃注射用水中，搅拌使葡萄糖充分溶解，加0.1％的针用活性炭，保温搅拌15分钟，过滤脱炭，并调节pH值至3.5～4.5范围内，测定含量，备用；另取处方量盐酸阿扎司琼及亚硫酸氢钠，避光操作，用上述葡萄糖溶液100ml溶解，加0.05％的针用活性炭常温下搅拌15分钟，过滤、脱炭、测定中间体含量，并用葡萄糖溶液稀释至所需浓度，经0.22μm微孔滤膜过滤，测定含量和pH值，合格后灌装于100ml输液瓶中、压塞、轧盖，115℃热压蒸气灭菌30分钟，即得。
盐酸阿扎司琼葡萄糖注射液制剂的质量控制技术，其特征在于通过以下方法进行鉴别和测定一、鉴别(1)在含量测定项下记录的色谱图中，供试品主峰的保留时间应与对照品的保留时间一致；(2)取本发明制剂适量，加水稀释制成1ml中含40μg的溶液，照分光光度法(中国药典2000年版二部附录IV A)测定，在305nm的波长有最大吸收，在282nm的波长处有最小吸收；(3)本发明制剂显氯化物的鉴别反应(中国药典2000年版二部附录III)；(4)取本发明制剂，缓缓滴入温热的碱性酒石酸铜试液中，即生成氧化亚铜的红色沉淀；
二、检查pH值应为3.0～5.0(中国药典2000年版二部附录VI H)；溶液的颜色 取本发明制剂，与黄色2号标准比色液(中国药典2000年版二部附录IX A第一法)比较，不得更深；有关物质 避光操作，取本发明制剂，作为供试品溶液；精密量取适量，加流动相制成1ml中含1.0μg的溶液，作为对照品溶液；照含量测定项下的色谱条件进行试验，取对照溶液20μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高约为满量程的20～25％；再准确量取上述两种溶液各20μl，分别进样，记录色谱图至主成分峰保留时间的2倍；供试品溶液的色谱图中如显示杂质峰(5-羟甲基糠醛不计在内)，量取各杂质峰面积的和，不得大于对照峰面积(1.0％)；5-羟甲基糠醛取本发明制剂作为供试品溶液；取5-羟甲基糠醛对照品适量，加水溶解并稀释成每1ml含5-羟甲基糠醛10μg的溶液，作为对照溶液；除检测波长为284nm外，照有关物质检查项下的方法，分别取供试品溶液、对照溶液20μl注入液相色谱仪中，记录色谱图；供试品溶液的色谱图中5-羟甲基糠醛峰面积不得大于对照溶液主峰面积；细菌内毒素 取本发明制剂依法检查(中国药典2000年版二部附录XI E)，每1ml中含内毒素不得过3EU；其他 应符合注射剂项下有关规定(中国药典2000年版二部附录I B)；三、含量测定盐酸阿扎司琼 避光操作，照高效液相色谱法(中国药典2000年版二部附录V D)测定；色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以磷酸盐溶液(取磷酸二氢钠7.8g，加三乙胺10ml，加水溶解并稀释至1000ml)-甲醇(70∶30)并用磷酸调pH值至2.5溶液为流动相，检测波长为220nm；理论塔板数按盐酸阿扎司琼计算应不低于2500；测定法 精密量取本发明制剂1ml，置10ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，精密量取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，另取105℃干燥至恒重的盐酸阿扎司琼对照品，同法测定，按外标法以峰面积计算，即得；含盐酸阿扎司琼(C17H20ClN3O3·HCl)应为标示量的90.0％～110.0％；葡萄糖 取本发明制剂，依法测定旋光度(中国药典2000年版二部附录VI E)，与2.0852相乘，即得供试品100ml中含有C6H12O6·H2O的重量(g)；含葡萄糖(C6H12O6·H2O)应为标示量的95.0％～105.0％。
处方的优化选择输液的处方设计要考虑药物的溶解性，药物的化学稳定性和生物学稳定性。盐酸阿扎司琼易溶于水，因此不需要加入助溶剂；本发明制剂对光非常敏感，因此配制过程中要避光操作，同时，可以考虑加入适量的抗氧剂。为此，我们设计以下几组处方。
表1盐酸阿扎司琼葡萄糖注射液处方设计

称取处方量的葡萄糖，溶于全量的90℃注射用水中，搅拌使葡萄糖充分溶解，加0.1％的针用活性炭，保温搅拌15分钟，过滤脱炭，并调节pH值至3.0～5.0范围内，测定含量，备用。另取处方量盐酸阿扎司琼(及亚硫酸氢钠)，避光操作，用上述葡萄糖溶液100ml溶解，加0.05％的针用活性炭常温下搅拌15分钟，过滤、脱炭、测定中间体含量，并用葡萄糖溶液稀释至所需浓度，经0.22μm微孔滤膜过滤，测定含量和pH值，合格后灌装于100ml输液瓶中、压塞、轧盖，115℃热压蒸气灭菌30分钟，即得。
将上述各组样品分成3份，分别在自然条件下(不避光)、避光、光橱(光照强度为4500Lx)放置，温度均为室温，参照盐酸阿扎司琼质量标准，检测其有关物质，结果如下表2盐酸阿扎司琼葡萄糖注射液几种处方考察


从考察结果可以看出，在避光条件下，各处方样品均比较稳定，在强光条件下，各处方均不稳定，在自然条件下，抗氧剂浓度大的样品相对稳定。故本发明制剂应避光保存，为了防止在贮存及运输过程的偶然因素，处方中加入适量抗氧剂。选择处方3为中试处方。
制备方法的研究(1)pH值范围的确定参照小水针的pH范围为3.0～5.0，我们通过如下试验研究了pH值对药物稳定性的影响。制备时分别用0.1mol/L NaOH溶液或0.1mol/L HCl溶液调节pH在3.0～7.0之间，灭菌后分别测定盐酸阿扎司琼的含量，结果见表3。
表3 pH值对盐酸阿扎司琼含量的影响

结果表明，pH在3.0～7.0之间，对盐酸阿扎司琼的含量无明显影响。盐酸阿扎司琼处方量浓度下溶液pH值为4.8左右，可直接使用，考虑到大生产及样品贮存过程中pH可能有波动的实际情况，参照小水针的pH范围，质量标准中将本发明制剂pH值范围定为3.0～5.0。
(2)活性炭加入量对盐酸阿扎司琼含量的影响制备时分别按0.05％、0.10％、0.20％加入针用活性炭搅拌15分钟，过滤，脱炭，分别测定盐酸阿扎司琼的含量，结果见表4。
表4 活性炭加入量对盐酸阿扎司琼含量的影响

结果表明，活性炭的加入对主药有很大的吸附作用。考虑到实际生产中除热原的需要，我们选用活性炭加入量为0.05％，主药配制工艺采用浓配稀释法，以减少主药的损失。
(3)灭菌条件对盐酸阿扎司琼含量的影响配液，灌装后，分别在不同灭菌条件下灭菌，灭菌后分别测定盐酸阿扎司琼的含量，结果见表5。
表5 灭菌条件对盐酸阿扎司琼含量的影响

结果表明，本发明制剂对热较稳定，因此我们采用115℃热压蒸气灭菌30分钟。
稳定性试验研究(1)影响因素试验供试品在光照、高温条件下留样10天，分别于5天、10天取样检测，结果表明，高温对本发明制剂的稳定性影响不明显，强光对本发明制剂的稳定性有显著影响，因此本发明制剂需避光保存。
(2)加速试验供试品在模拟市售包装状态下经加速(40℃)试验6个月，于1、2、3、6个月份别取样检测各项指标，试验结果与0月比较无明显变化，因此可以初步预测本发明制剂的有效期为两年。
(3)室温长期留样供试品模拟市售包装，于室温条件下留样观察6个月，于0、3、6个月取样检测各项指标，试验结果与0月比较无明显变化。本发明制剂的长期试验仍在继续进行。
药理作用一种强效的选择性外周和中枢神经系统5-HT3受体拮抗剂，对因放疗、化疗及手术引起的恶心呕吐具有良好的预防和治疗作用。放疗、化疗及外科手术等因素可引起肠嗜铬细胞释放5-HT，5-HT可激活中枢迷走神经的5-HT3受体而引起呕吐反射。本发明制剂控制恶心呕吐的机制，是通过拮抗中枢化学感受区及外周迷走神经末梢的5-HT3受体，从而抑制恶心、呕吐的发生。
毒理作用(1)急性毒试验狗的最大耐受量约3mg/kg。大量地给予本发明制剂量狗出现舌舐不停、瞬膜突出、呕吐、四肢发红。肌肉颤动。
(2)亚急性与慢性毒性试验给大鼠连续注本发明制剂28日或13周的最大耐受量各为3.0、0.5mg/kg；狗的最高剂量组(3mg/kg)见GOT、GPT、LDH值轻度、可逆性地升高。
(3)局部刺激性试验抗原性试验结果，本发明制剂诱发免疫反应的可能性甚小，局部刺激性试验结果为阴性。
(4)生殖毒性试验大鼠Seg.I试验中皮下注射本发明制剂、0.1、0.5、6mg/kg各种剂量组动物均未见对本代及其下一代生殖的不良影响。Seg.II试验，大鼠静注本发明制剂0.3、3、9mg/kg，兔静注本发明制剂0.3、1、3mg/kg，均未见最高剂量组动物发生异常。Seg.III试验，大鼠皮下注射本发明制剂0.1、0.5、6mg/kg，最大耐受量为0.5mg/kg，6mg/kg组仔鼠出生后的死亡数轻度增加。
本发明制剂经体外、体内动物实验表明对哺乳类细胞无遗传毒性。
(5)致癌试验根据2年致癌性研究资料表明大鼠和小鼠(两种性别)给予50mg/(kg·d)(大鼠剂量减少为25mg/d)连用59周，肝细胞癌和/或腺瘤增加。也发现雄性大鼠以5mg/(kg·d)，肝细胞新生物增加。在这两种动物中，未观察低剂量组(1mg/kg)药物诱导效应(肝细胞新生物)。
药物吸收、分布、消除健康的受试者静注本发明制剂20或40μg/mg后，平均血浆浓度峰值分别为13.7和42.8μg/L，血浆清除半衰期约3.1～5.9小时。本发明制剂在体内分布广泛，血清蛋白结合率约为65％，大部分迅速代谢，主要代谢途径为N-去烷基化及芳香环氧化后，再共轭形成结合产物，本发明制剂通过粪便和尿液排泄。
临床研究盐酸阿扎司琼是高效的、高选择性的、新型5-HT3受体拮抗剂，通过对内脏传入神经和中枢化学感受区5-HT3受体的显著抑制作用，拮抗肿瘤药物、放射线治疗后引起的恶心、呕吐，并减少惯例给予大剂量顺铂治疗后肿瘤患者在24h内发生恶心呕吐的次数，与大剂量甲氧氯普胺加地塞米松的抗呕效果相似，但却没有甲氧氯普胺的锥体外系副作用。另外，盐酸阿扎司琼对中晚期肝癌介入治疗后引起的恶心呕吐、术后病人自控镇痛过程中恶心呕吐、椎管内麻醉中引起的恶心呕吐等均具有确切疗效。
类别止吐药。
规格100ml盐酸阿扎司琼10mg与葡萄糖5g。
贮藏避光，密闭保存。
有效期暂定二年

质量标准控制方法本发明制剂为盐酸阿扎司琼和葡萄糖的灭菌水溶液。含盐酸阿扎司琼(C17H20ClN3O3·HCl)应为标示量的90.0％～110.0％；含葡萄糖(C6H12O6·H2O)应为标示量的95.0％～105.0％。
性状本发明制剂为无色或几乎无色的澄明液体。
鉴别(1)在含量测定项下记录的色谱图中，供试品主峰的保留时间应与对照品的保留时间一致。
(2)取本发明制剂适量，加水稀释制成1ml中含40μg的溶液，照分光光度法(中国药典2000年版二部附录IVA)测定，在305nm的波长有最大吸收，在282nm的波长处有最小吸收。
(3)本发明制剂显氯化物的鉴别反应(中国药典2000年版二部附录III)。
(4)取本发明制剂，缓缓滴入温热的碱性酒石酸铜试液中，即生成氧化亚铜的红色沉淀。
检查pH值应为3.0～5.0(中国药典2000年版二部附录VIH)。
溶液的颜色 取本发明制剂，与黄色2号标准比色液(中国药典2000年版二部附录IXA第一法)比较，不得更深。
有关物质 避光操作，取本发明制剂，作为供试品溶液；精密量取适量，加流动相制成1ml中含1.0μg的溶液，作为对照溶液。照含量测定项下的色谱条件进行试验，取对照溶液20μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高约为满量程的20～25％；再准确量取上述两种溶液各20μl，分别进样，记录色谱图至主成分峰保留时间的2倍。供试品溶液的色谱图中如显示杂质峰(5-羟甲基糠醛不计在内)，量取各杂质峰面积的和，不得大于对照峰面积(1.0％)。
5-羟甲基糠醛取本发明制剂作为供试品溶液。取5-羟甲基糠醛对照品适量，加水溶解并稀释成每1ml含5-羟甲基糠醛10μg的溶液，作为对照溶液。除检测波长为284nm外，照有关物质检查项下的方法，分别取供试品溶液、对照溶液20μl注入液相色谱仪中，记录色谱图。供试品溶液的色谱图中5-羟甲基糠醛峰面积不得大于对照溶液主峰面积。
细菌内毒素 取本发明制剂依法检查(中国药典2000年版二部附录XIE)，每1ml中含内毒素不得过3EU。
其他 应符合注射剂项下有关规定(中国药典2000年版二部附录IB)。
含量测定盐酸阿扎司琼避光操作，照高效液相色谱法(中国药典2000年版二部附录VD)测定。
色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以磷酸盐溶液(取磷酸二氢钠7.8g，加三乙胺10ml，加水溶解并稀释至1000ml)-甲醇(70∶30)并用磷酸调pH值至2.5溶液为流动相，检测波长为220nm。理论塔板数按盐酸阿扎司琼计算应不低于2500。
测定法 精密量取本发明制剂1ml，置10ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，精密量取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，另取105℃干燥至恒重的盐酸阿扎司琼对照品，同法测定，按外标法以峰面积计算，即得。
葡萄糖 取本发明制剂，依法测定旋光度(中国药典2000年版二部附录VIE)，与2.0852相乘，即得供试品100ml中含有C6H12O6·H2O的重量(g)，应为标示量的95.0％～105.0％。
本发明制剂还可以采用以下处方用上述方法制备并进行质量控制。
处方2盐酸阿扎司琼葡萄糖注射液制剂盐酸阿扎司琼0.1g葡萄糖 40g亚硫酸氢钠 20mg注射用水加至1000ml处方3盐酸阿扎司琼葡萄糖注射液制剂盐酸阿扎司琼0.1g葡萄糖 50g注射用水加至1000ml处方4盐酸阿扎司琼葡萄糖注射液制剂盐酸阿扎司琼0.1g葡萄糖 50g亚硫酸氢钠 10mg注射用水加至1000ml


本发明公布的是一种止吐药——盐酸阿扎司琼葡萄糖注射液制剂、制备方法及质量控制技术。按以下比例配制盐酸阿扎司琼0.1g、葡萄糖40~50g、亚硫酸氢钠0~20mg，上述组分加注射用水溶解至1000ml。盐酸阿扎司琼是高效的、高选择性的、新型5－HT